孕激素介導(dǎo)uPA在卵巢癌治療中的相關(guān)研究

何芳?朱艷

【摘要】 目的 探討孕激素介導(dǎo)uPA治療卵巢癌的可能機(jī)制。方法 傳代培養(yǎng)人卵巢癌細(xì)胞HO-8910， 應(yīng)用Western blot方法檢測對照組（未加孕激素組）和加入含有不同濃度孕激素培養(yǎng)液處理組， 作用72 h后對人卵巢癌細(xì)胞HO-8910 uPA表達(dá)的影響。結(jié)果 Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明孕激素能夠抑制uPA的表達(dá)， 呈濃度依賴性。結(jié)論 孕激素對卵巢癌細(xì)胞有抑制作用并且抑制人卵巢癌細(xì)胞uPA的表達(dá)， 提示孕激素用于卵巢癌的輔助治療可能介導(dǎo)對uPA的影響起作用。

【關(guān)鍵詞】 尿激酶型纖溶蛋白酶原激活劑；卵巢癌；孕激素；蛋白印記法

尿激酶型纖溶蛋白酶原激活系統(tǒng)（uPA系統(tǒng)）主要包括尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）、uPA特異性受體（uPAR）和纖溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）。uPA能激活無活性纖維蛋白溶解酶原生成纖溶酶， 使纖維蛋白水解成可溶性肽類片段。纖維蛋白溶解參與腫瘤生長和腫瘤細(xì)胞的浸入過程， uPA調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的降解， 并能激活刺激腫瘤生長因子和其他蛋白酶[1]。腫瘤自身分泌的uPA可激活纖溶酶原為纖溶酶， 使基底膜裂開， 有利于腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[2]。

有學(xué)者認(rèn)為：孕激素抑制癌細(xì)胞是孕激素作用于癌細(xì)胞并與孕激素受體結(jié)合形成復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞核， 延緩DNA和RNA復(fù)制， 抑制癌細(xì)胞生長[3]。但其確切機(jī)制， 仍不清楚。對于uPA在卵巢癌中的抗原表達(dá)及含量國外已有報(bào)道， 關(guān)于孕激素應(yīng)用于卵巢癌的輔助治療也有報(bào)道。但關(guān)于孕激素對卵巢癌細(xì)胞中uPA表達(dá)的影響目前尚無報(bào)道。本研究旨在應(yīng)用 Western-blot法研究孕激素對人卵巢癌細(xì)胞中uPA表達(dá)的影響， 從而探討孕激素在卵巢癌輔助治療中的可能機(jī)制， 為臨床治療卵巢癌提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 材料

1. 1. 1 細(xì)胞來源 卵巢漿液性囊腺癌細(xì)胞HO-8910（上海中科院細(xì)胞庫）細(xì)胞形態(tài)及生物學(xué)特征均符合卵巢漿液性囊腺癌特征。

1. 1. 2 實(shí)驗(yàn)試劑

RPMI-1640培養(yǎng)液（大連晨玉）

胰酶 （大連晨玉）

Hepes（大連晨玉）

標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清（大連博瑞德）

MTT（大連博瑞德）

uPA兔抗人多克隆抗體（北京博士德）

SP免疫試劑盒（北京中杉）

二甲基亞砜（大連誠銳）

蛋白印記試劑如：NC、丙烯酰胺、甲基雙丙烯酰胺、Tris、甘氨酸、氯化鈉、甲醇、冰乙酸、脫脂奶粉等（大連博瑞德）

耗材（沈聯(lián)化學(xué)試劑玻璃儀器有限公司）

1. 1. 3 主要設(shè)備

相差倒置顯微鏡（olympus公司）

CO2孵箱（Forma公司）

常溫臺式離心機(jī)（Sigma公司）

超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）

三用水箱（北京醫(yī)療設(shè)備廠）

多用途水浴恒溫振蕩器（江蘇太倉市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠）

電泳儀（大連捷邁生物公司）

轉(zhuǎn)膜儀（大連捷邁生物公司）

1. 2 實(shí)驗(yàn)方法

1. 2. 1 細(xì)胞培養(yǎng) ①試劑配置：RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基：用于培養(yǎng)卵巢癌細(xì)胞HO-8910。每升培養(yǎng)液中含RPMI 1640粉劑10.4 g、HEPES 4.8 g、NaHCO3 2.0 g、經(jīng)滅活的胎牛血清（FCS）100 ml、青霉素及鏈霉素各100 U/ml， 調(diào)節(jié)pH=7.4， 抽濾滅菌， 分裝， 4 ℃保存。PBS （10×）：稱取NaCl 8.5 g， Kcl 0.2 g， Na2HPO4·12H2O 2.85 g， KH2PO4 0.24 g， ddH2O 100 ml， 調(diào)pH=7.4， 高壓滅菌， 保存于4℃。②細(xì)胞培養(yǎng)：人卵巢癌細(xì)胞HO-8910常規(guī)培養(yǎng)于含10%胎牛血清、雙抗的RPMI-1640完全培養(yǎng)基中。置37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)， 相對濕度90%， 培養(yǎng)至70%～80%融合時(shí)， 0.25%胰蛋白酶消化、傳代。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到一定數(shù)量后， 細(xì)胞記數(shù)， 將一定數(shù)量細(xì)胞分別培養(yǎng)在4個(gè)大培養(yǎng)瓶中， 第2天待細(xì)胞貼壁后置入4℃恒溫箱1 h， 促成細(xì)胞同步化生長， 然后加入等量的含不同濃度孕激素的培養(yǎng)液， 繼續(xù)培養(yǎng)72 h。作用72 h后將4個(gè)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞消化下來離心收集， 保存在-70℃冰箱中備用。

1. 2. 2 MTT比色法 取對數(shù)生長期的人卵巢癌細(xì)胞HO-8910， 5×10-3/孔細(xì)胞數(shù)接種于96孔板， 置37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)， 第2天大部分貼壁后置入4℃恒溫箱1 h， 促成細(xì)胞同步化生長， 棄上清， 然后加入含有從1×10-4 mol/L倍比稀釋至0.03125×10-4 mol/L（由于孕激素是用酒精溶解為避免酒精對卵巢癌細(xì)胞有抑制作用故選取的酒精濃度<1%）孕激素的等量培養(yǎng)液中， 并設(shè)陰性對照（不加孕激素組）、空白對照（不加細(xì)胞組）及1%酒精組， 共8組， 每組設(shè)4個(gè)副孔， 培養(yǎng)48 h、72 h后， 各孔加入20 μlMTT溶液（濃度5 g/l）， 輕輕震蕩培養(yǎng)板， 繼續(xù)孵育4 h， 輕輕吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液， 每孔加入DMSO溶液150 μl， 輕輕震蕩15 min， 測A-580值。重復(fù)3次。篩選出合適的作用時(shí)間和孕激素濃度進(jìn)行Western blot實(shí)驗(yàn)。

1. 2. 3 Western blot法 ①提蛋白：收集用含有終濃度為0.5×10-5、1×10-5、0.5×10-4 mol/L孕激素培養(yǎng)液處理72 h后的人卵巢癌細(xì)胞HO-8910， 離心2500 rmp， 10 min；棄上清， 用2 mlPBS吹吸洗滌細(xì)胞沉淀， 離心2500 rpm， 10 min；棄去上清， 用1 mlPBS吹吸洗滌細(xì)胞沉淀， 轉(zhuǎn)入1.5 mlEP管， 棄凈上清， 加入細(xì)胞裂解液， 超聲震蕩器震蕩， 4℃離心3000 rpm， 5 min， 提取上清， 取上清保存-20℃。②測蛋白：用754法測定蛋白含量， 計(jì)算上樣量。③配膠：將配制好的12%SDS-PAGE分離膠溶液5 ml混勻后立即將其注入邊條厚度為1.5 mm凝膠玻璃板內(nèi)， 至梳齒下約1 cm， 表面加100 μl無水乙醇封住15 min后膠凝固將無水乙醇倒掉， 用蒸餾水清洗， 濾紙吸干。見表1。配制5%濃縮膠3 ml將其灌滿， 立即傾斜插入梳子， 凝固1 h， 用蒸餾水沖洗， 加入TBE。見表2。④上樣：每孔上樣量為30 μl， 將蛋白質(zhì)樣品與樣品緩沖液在小EP管中混勻， 100℃加熱3 min， 離心1 s， 用微量注射器將樣品加入樣品孔中， 進(jìn)行電泳。其中一孔加入蛋白質(zhì)分子量Marker。⑤電泳：插好電極， 當(dāng)染料的前沿遷移至凝膠的底部約需2 h。電泳結(jié)束后， 關(guān)閉電源， 從電極上拔掉電極插頭， 將凝膠玻璃板從電泳槽中取出， 小心移動兩玻璃板之間的隔片， 輕輕撬開玻板， 使凝膠貼在其中的一塊板上。⑥轉(zhuǎn)膜及染色：電泳后將凝膠浸入轉(zhuǎn)移緩沖液1 h， 濾紙和硝酸纖維素膜剪成與凝膠同樣大小， 于轉(zhuǎn)移緩沖液中浸泡30 min， 按順序?qū)⑾跛崂w維素膜、凝膠、濾紙放好， 用玻璃棒將各層之間的空氣趕走進(jìn)行轉(zhuǎn)膜1 h， 轉(zhuǎn)移后將硝酸纖維素膜和凝膠麗春紅染色， 觀察條帶。⑦封閉及雜交 硝酸纖維素膜TBS漂洗、加脫脂奶粉封阻過夜、加一抗37℃1 h、TBS漂洗3次、加二抗37℃1 h、TBS漂洗3次、加酶標(biāo)37℃1 h、TBS漂洗3次。⑧顯色：取DAB顯色試劑， 在暗室內(nèi)與硝酸纖維素膜搖動孵育1 min， 顯色， 數(shù)碼照相。經(jīng)凝膠成像系統(tǒng)分析。

表1 12%的分離膠

試劑名稱 單面 雙面

ddH2O 2.64 ml 4.9 ml

30%丙烯酰胺 3.2 ml 6.0 ml

1.5 mTris-cl（PH8.8） 2 ml 3.8 ml

10%SDS 80 μl 150 μl

10%APS 80 μl 150 μl

TEMED 5 μl 8 μl

合 計(jì) 8 ml 15 ml

表2 5%濃縮膠

試劑名稱 單面 雙面

ddH2O 2.1 ml 4.2 ml

30%單/雙丙烯酰胺 500 μl 1.0 ml

1 mTris-cl（PH6.8） 380 μl 760 μl

10%SDS 30 μl 60 μl

10%APS 30 μl 60 μl

TEMED 4 μl 8 μl

合 計(jì) 3 ml 6 ml

2 結(jié)果

正常對照組和孕激素處理組卵巢癌細(xì)胞HO-8910中uPA的表達(dá)量， 見圖1。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果， 孕激素能夠抑制卵巢癌細(xì)胞HO-8910 uPA的表達(dá)， 并且呈濃度依賴性。

經(jīng)凝膠成像系統(tǒng)分析結(jié)果如圖2。

圖2 經(jīng)凝膠成像系統(tǒng)分析

3 討論

卵巢癌是婦科常見的惡性腫瘤之一， 死亡率很高。手術(shù)與化療是治療卵巢癌的主要手段， 激素療法僅用于卵巢癌的輔助治療或?qū)熌退幉±墓孟⑿灾委?。由于激素療法的副反?yīng)小， 毒性低， 且有一定的療效， 因而越來越受到臨床的關(guān)注[4]。

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用MTT比色法發(fā)現(xiàn)孕激素對人卵巢癌細(xì)胞HO-8910有抑制作用， 作用72 h后對人卵巢癌細(xì)胞HO-8910有明顯的抑制作用。近年來許多研究提示孕激素可降低卵巢癌的危險(xiǎn)性， 卵巢癌血清孕激素水平高者， 生存率提高[5]。陳曉軍等[6]以已行瘤體減滅術(shù)的卵巢癌患者1～4期為研究對象， 分為單純化療組、己酸孕酮組和普維拉組。隨訪、統(tǒng)計(jì)各組各期患者的生存率及復(fù)發(fā)率、血清激素水平、骨密度變化及化療反應(yīng)， 結(jié)果顯示孕激素聯(lián)合以鉑類為主的常規(guī)化療可以改善晚期卵巢癌的預(yù)后， 并且不增加化療的毒副作用， 可改善患者的骨量丟失。通過MTT比色法篩選出對卵巢癌細(xì)胞的抑制作用較明顯的合適濃度進(jìn)行Western blot實(shí)驗(yàn)， 檢測孕激素對uPA的影響， 結(jié)果發(fā)現(xiàn)， 孕激素的濃度越大， uPA的表達(dá)越弱， 通過條帶分析發(fā)現(xiàn)含量也越少， 說明孕激素能夠抑制uPA的表達(dá)。但孕激素做為卵巢癌治療的輔助藥物， 其作用機(jī)制不很清楚。檢測孕激素對uPA表達(dá)的抑制， 也許正是孕激素抑制卵巢癌細(xì)胞生長的一條重要途徑， 可能是孕激素介導(dǎo)對uPA的表達(dá)而發(fā)揮治療作用。由于本實(shí)驗(yàn)選取的人卵巢癌細(xì)胞為漿液性囊腺癌細(xì)胞， 存在局限性， 不能說明對所有卵巢癌病理分型都有作用， 還有待于進(jìn)一步的研究。并且在基因水平上還需要進(jìn)一步研究， 探討孕激素對uPA mRNA的影響及其可能機(jī)制。用激素替代治療為卵巢癌患者提供了新的非手術(shù)的輔助治療方法， 但是關(guān)于激素治療卵巢癌對人體是否會產(chǎn)生副作用目前還存在很大爭議， 有必要進(jìn)行臨床跟蹤隨訪。以uPA為靶點(diǎn)開發(fā)出更多治療卵巢癌的導(dǎo)向藥物， 將成為新的研究熱點(diǎn)。

孕激素對卵巢癌細(xì)胞有抑制作用并且抑制人卵巢癌細(xì)胞uPA的表達(dá)， 提示孕激素用于卵巢癌的輔助治療可能介導(dǎo)對uPA的影響起作用。本實(shí)驗(yàn)選取的人卵巢癌細(xì)胞為漿液性囊腺癌細(xì)胞， 存在局限性， 不能說明對所有卵巢癌病理分型都有作用， 還有待于進(jìn)一步的研究。并且在基因水平上還需要進(jìn)一步研究， 探討孕激素對uPA mRNA的影響及其可能機(jī)制。用激素替代治療為卵巢癌患者提供了新的非手術(shù)的輔助治療方法， 但是關(guān)于激素治療卵巢癌對人體是否會產(chǎn)生副作用目前還存在很大爭議， 有必要進(jìn)行臨床跟蹤隨訪。

參考文獻(xiàn)

[1] Baker MS， Bleakey P， Woodrow GC， et al.Jnhibitor PAI and subsequent effects on extracellular matrix degradation.Cancer Res， 1990， 50（10）：4676-4684.

[2] Herszyi L， Farinati F， PLebani M， et al.The role of cathepsins and the plasminogen actionary inhibitior systemin colorectal cancer.Orv Hetil， 1999， 140（33）：1833-1836.

[3] Akhmedkhanov A， Zeleniuch - Jacquotte A， Toniolo P. Role ofexogenous and endogenous hormones in endometrial cancer： reviewof the evidence and research perspectives. Ann NY Acad Sci ， 2001， 43（12）： 296-302.

[4] 岳天孚， 張士偉.卵巢癌的內(nèi)分泌治療.中國實(shí)用婦科與產(chǎn)科， 1996， 6（12）：328-329.

[5] Bu SZ， Yin DL， Ren XH， et al.Progesterone induces apoptosis and upregalation of p53 expression in huruan ovarian carcinoma cell lines.Cancer， 1997， 79（10）：1944.

[6] 陳曉軍， 豐有吉.孕激素聯(lián)合化療治療卵巢上皮性癌.復(fù)旦學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）， 2003， 30（3）：273-276.

表1 12%的分離膠

試劑名稱 單面 雙面

ddH2O 2.64 ml 4.9 ml

30%丙烯酰胺 3.2 ml 6.0 ml

1.5 mTris-cl（PH8.8） 2 ml 3.8 ml

10%SDS 80 μl 150 μl

10%APS 80 μl 150 μl

TEMED 5 μl 8 μl

合 計(jì) 8 ml 15 ml

表2 5%濃縮膠

試劑名稱 單面 雙面

ddH2O 2.1 ml 4.2 ml

30%單/雙丙烯酰胺 500 μl 1.0 ml

1 mTris-cl（PH6.8） 380 μl 760 μl

10%SDS 30 μl 60 μl

10%APS 30 μl 60 μl

TEMED 4 μl 8 μl

合 計(jì) 3 ml 6 ml

2 結(jié)果

正常對照組和孕激素處理組卵巢癌細(xì)胞HO-8910中uPA的表達(dá)量， 見圖1。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果， 孕激素能夠抑制卵巢癌細(xì)胞HO-8910 uPA的表達(dá)， 并且呈濃度依賴性。

經(jīng)凝膠成像系統(tǒng)分析結(jié)果如圖2。

圖2 經(jīng)凝膠成像系統(tǒng)分析

3 討論

卵巢癌是婦科常見的惡性腫瘤之一， 死亡率很高。手術(shù)與化療是治療卵巢癌的主要手段， 激素療法僅用于卵巢癌的輔助治療或?qū)熌退幉±墓孟⑿灾委?。由于激素療法的副反?yīng)小， 毒性低， 且有一定的療效， 因而越來越受到臨床的關(guān)注[4]。

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用MTT比色法發(fā)現(xiàn)孕激素對人卵巢癌細(xì)胞HO-8910有抑制作用， 作用72 h后對人卵巢癌細(xì)胞HO-8910有明顯的抑制作用。近年來許多研究提示孕激素可降低卵巢癌的危險(xiǎn)性， 卵巢癌血清孕激素水平高者， 生存率提高[5]。陳曉軍等[6]以已行瘤體減滅術(shù)的卵巢癌患者1～4期為研究對象， 分為單純化療組、己酸孕酮組和普維拉組。隨訪、統(tǒng)計(jì)各組各期患者的生存率及復(fù)發(fā)率、血清激素水平、骨密度變化及化療反應(yīng)， 結(jié)果顯示孕激素聯(lián)合以鉑類為主的常規(guī)化療可以改善晚期卵巢癌的預(yù)后， 并且不增加化療的毒副作用， 可改善患者的骨量丟失。通過MTT比色法篩選出對卵巢癌細(xì)胞的抑制作用較明顯的合適濃度進(jìn)行Western blot實(shí)驗(yàn)， 檢測孕激素對uPA的影響， 結(jié)果發(fā)現(xiàn)， 孕激素的濃度越大， uPA的表達(dá)越弱， 通過條帶分析發(fā)現(xiàn)含量也越少， 說明孕激素能夠抑制uPA的表達(dá)。但孕激素做為卵巢癌治療的輔助藥物， 其作用機(jī)制不很清楚。檢測孕激素對uPA表達(dá)的抑制， 也許正是孕激素抑制卵巢癌細(xì)胞生長的一條重要途徑， 可能是孕激素介導(dǎo)對uPA的表達(dá)而發(fā)揮治療作用。由于本實(shí)驗(yàn)選取的人卵巢癌細(xì)胞為漿液性囊腺癌細(xì)胞， 存在局限性， 不能說明對所有卵巢癌病理分型都有作用， 還有待于進(jìn)一步的研究。并且在基因水平上還需要進(jìn)一步研究， 探討孕激素對uPA mRNA的影響及其可能機(jī)制。用激素替代治療為卵巢癌患者提供了新的非手術(shù)的輔助治療方法， 但是關(guān)于激素治療卵巢癌對人體是否會產(chǎn)生副作用目前還存在很大爭議， 有必要進(jìn)行臨床跟蹤隨訪。以uPA為靶點(diǎn)開發(fā)出更多治療卵巢癌的導(dǎo)向藥物， 將成為新的研究熱點(diǎn)。

孕激素對卵巢癌細(xì)胞有抑制作用并且抑制人卵巢癌細(xì)胞uPA的表達(dá)， 提示孕激素用于卵巢癌的輔助治療可能介導(dǎo)對uPA的影響起作用。本實(shí)驗(yàn)選取的人卵巢癌細(xì)胞為漿液性囊腺癌細(xì)胞， 存在局限性， 不能說明對所有卵巢癌病理分型都有作用， 還有待于進(jìn)一步的研究。并且在基因水平上還需要進(jìn)一步研究， 探討孕激素對uPA mRNA的影響及其可能機(jī)制。用激素替代治療為卵巢癌患者提供了新的非手術(shù)的輔助治療方法， 但是關(guān)于激素治療卵巢癌對人體是否會產(chǎn)生副作用目前還存在很大爭議， 有必要進(jìn)行臨床跟蹤隨訪。

參考文獻(xiàn)

[1] Baker MS， Bleakey P， Woodrow GC， et al.Jnhibitor PAI and subsequent effects on extracellular matrix degradation.Cancer Res， 1990， 50（10）：4676-4684.

[2] Herszyi L， Farinati F， PLebani M， et al.The role of cathepsins and the plasminogen actionary inhibitior systemin colorectal cancer.Orv Hetil， 1999， 140（33）：1833-1836.

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[5] Bu SZ， Yin DL， Ren XH， et al.Progesterone induces apoptosis and upregalation of p53 expression in huruan ovarian carcinoma cell lines.Cancer， 1997， 79（10）：1944.

[6] 陳曉軍， 豐有吉.孕激素聯(lián)合化療治療卵巢上皮性癌.復(fù)旦學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）， 2003， 30（3）：273-276.

表1 12%的分離膠

試劑名稱 單面 雙面

ddH2O 2.64 ml 4.9 ml

30%丙烯酰胺 3.2 ml 6.0 ml

1.5 mTris-cl（PH8.8） 2 ml 3.8 ml

10%SDS 80 μl 150 μl

10%APS 80 μl 150 μl

TEMED 5 μl 8 μl

合 計(jì) 8 ml 15 ml

表2 5%濃縮膠

試劑名稱 單面 雙面

ddH2O 2.1 ml 4.2 ml

30%單/雙丙烯酰胺 500 μl 1.0 ml

1 mTris-cl（PH6.8） 380 μl 760 μl

10%SDS 30 μl 60 μl

10%APS 30 μl 60 μl

TEMED 4 μl 8 μl

合 計(jì) 3 ml 6 ml

2 結(jié)果

正常對照組和孕激素處理組卵巢癌細(xì)胞HO-8910中uPA的表達(dá)量， 見圖1。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果， 孕激素能夠抑制卵巢癌細(xì)胞HO-8910 uPA的表達(dá)， 并且呈濃度依賴性。

經(jīng)凝膠成像系統(tǒng)分析結(jié)果如圖2。

圖2 經(jīng)凝膠成像系統(tǒng)分析

3 討論

卵巢癌是婦科常見的惡性腫瘤之一， 死亡率很高。手術(shù)與化療是治療卵巢癌的主要手段， 激素療法僅用于卵巢癌的輔助治療或?qū)熌退幉±墓孟⑿灾委?。由于激素療法的副反?yīng)小， 毒性低， 且有一定的療效， 因而越來越受到臨床的關(guān)注[4]。

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用MTT比色法發(fā)現(xiàn)孕激素對人卵巢癌細(xì)胞HO-8910有抑制作用， 作用72 h后對人卵巢癌細(xì)胞HO-8910有明顯的抑制作用。近年來許多研究提示孕激素可降低卵巢癌的危險(xiǎn)性， 卵巢癌血清孕激素水平高者， 生存率提高[5]。陳曉軍等[6]以已行瘤體減滅術(shù)的卵巢癌患者1～4期為研究對象， 分為單純化療組、己酸孕酮組和普維拉組。隨訪、統(tǒng)計(jì)各組各期患者的生存率及復(fù)發(fā)率、血清激素水平、骨密度變化及化療反應(yīng)， 結(jié)果顯示孕激素聯(lián)合以鉑類為主的常規(guī)化療可以改善晚期卵巢癌的預(yù)后， 并且不增加化療的毒副作用， 可改善患者的骨量丟失。通過MTT比色法篩選出對卵巢癌細(xì)胞的抑制作用較明顯的合適濃度進(jìn)行Western blot實(shí)驗(yàn)， 檢測孕激素對uPA的影響， 結(jié)果發(fā)現(xiàn)， 孕激素的濃度越大， uPA的表達(dá)越弱， 通過條帶分析發(fā)現(xiàn)含量也越少， 說明孕激素能夠抑制uPA的表達(dá)。但孕激素做為卵巢癌治療的輔助藥物， 其作用機(jī)制不很清楚。檢測孕激素對uPA表達(dá)的抑制， 也許正是孕激素抑制卵巢癌細(xì)胞生長的一條重要途徑， 可能是孕激素介導(dǎo)對uPA的表達(dá)而發(fā)揮治療作用。由于本實(shí)驗(yàn)選取的人卵巢癌細(xì)胞為漿液性囊腺癌細(xì)胞， 存在局限性， 不能說明對所有卵巢癌病理分型都有作用， 還有待于進(jìn)一步的研究。并且在基因水平上還需要進(jìn)一步研究， 探討孕激素對uPA mRNA的影響及其可能機(jī)制。用激素替代治療為卵巢癌患者提供了新的非手術(shù)的輔助治療方法， 但是關(guān)于激素治療卵巢癌對人體是否會產(chǎn)生副作用目前還存在很大爭議， 有必要進(jìn)行臨床跟蹤隨訪。以uPA為靶點(diǎn)開發(fā)出更多治療卵巢癌的導(dǎo)向藥物， 將成為新的研究熱點(diǎn)。

孕激素對卵巢癌細(xì)胞有抑制作用并且抑制人卵巢癌細(xì)胞uPA的表達(dá)， 提示孕激素用于卵巢癌的輔助治療可能介導(dǎo)對uPA的影響起作用。本實(shí)驗(yàn)選取的人卵巢癌細(xì)胞為漿液性囊腺癌細(xì)胞， 存在局限性， 不能說明對所有卵巢癌病理分型都有作用， 還有待于進(jìn)一步的研究。并且在基因水平上還需要進(jìn)一步研究， 探討孕激素對uPA mRNA的影響及其可能機(jī)制。用激素替代治療為卵巢癌患者提供了新的非手術(shù)的輔助治療方法， 但是關(guān)于激素治療卵巢癌對人體是否會產(chǎn)生副作用目前還存在很大爭議， 有必要進(jìn)行臨床跟蹤隨訪。

參考文獻(xiàn)

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[6] 陳曉軍， 豐有吉.孕激素聯(lián)合化療治療卵巢上皮性癌.復(fù)旦學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）， 2003， 30（3）：273-276.