大黃炮制前后物質(zhì)基礎(chǔ)變化研究

胡永淑（成都市第六人民醫(yī)院藥劑科，成都 610051）

中藥炮制是在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，按照中藥藥理及藥物配伍需求，將藥材或飲片進一步加工，使其在炮制后藥性發(fā)生一定改變，降低或消除毒性及副作用，或者增加某方面療效，達到增效減毒的目的，使其更適應(yīng)臨床用藥需求。而炮制前后藥材或飲片自身化學(xué)組分及生物活性變化規(guī)律，可以豐富藥性理論，闡明炮制原理，為制訂不同炮制品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供可靠依據(jù)[1]。

大黃，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為蓼科植物掌葉大黃、唐古特大黃或藥用大黃等的干燥根和根莖，味苦，性寒，歸脾、胃、大腸、心、肝經(jīng)[2]。它既能攻擊導(dǎo)滯、通腸泄熱，又可以導(dǎo)濕熱之邪自大便而出，促進黃疸消退；同時入心肝血分，可以泄血中實熱火毒、涼血止血而解毒，還可以通利血脈、活血化瘀。目前，有關(guān)大黃的炮制品記載較多，常用的有生大黃、酒大黃、熟大黃、大黃炭等4種炮制品。生大黃擅長攻擊導(dǎo)滯；酒大黃善解上焦熱毒，用于治療齒齦腫痛、目赤咽痛；熟大黃能瀉火解毒，用于治療瘡瘍火毒；大黃炭能化瘀、涼血、止血，用于治療血熱積滯的出血諸證。筆者主要以生大黃、酒大黃、熟大黃、大黃炭4種大黃炮制品為對象，研究炮制前后化學(xué)組分及物質(zhì)基礎(chǔ)變化，為大黃不同炮制品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

722分光光度計（上海第三分析儀器廠）。

1.2 飲片

大黃飲片（四川新荷花醫(yī)藥飲片公司，批號:111002）。

1.3 試劑

沒食子酸、大黃素、1，8-二羥基蒽醌對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號分別為041105、756-9003、847-4001）；碳酸鈉（重慶北碚精細化工廠）；干酪素（成都科龍化學(xué)試劑廠，批號:041005；杭州天和微生物試劑廠，批號:041028）。

2 方法與結(jié)果

2.1 大黃不同炮制品的制備

2.1.1 酒大黃 取生大黃飲片適量，按每100kg飲片用15kg黃酒的比例，將大黃飲片用黃酒拌勻，藥材悶潤1～2h，用80～120Ⅸ文火炒干，取出晾涼，備用。

2.1.2 熟大黃 取生大黃飲片適量，按照每100kg飲片用50kg黃酒的比例，將大黃飲片用黃酒拌勻，藥材悶潤1～2 h，待黃酒被藥材吸盡后，將藥材裝入特制蒸制容器，密封蒸制18～24h，待藥材表面呈黑褐色，內(nèi)部呈黃褐色時取出晾干，備用。

2.1.3 大黃炭 取生大黃飲片適量，180～220Ⅸ下在熱鍋中用武火炒至表面焦黑、內(nèi)部焦褐色時，在飲片表面噴淋少許清水，待火星熄滅后取出晾涼，備用。

2.2 樣品溶液的制備[3]

按文獻方法，分別將大黃各炮制品粉碎成粗粉，將粗粉過100目篩，得到大黃各炮制品粉末樣品。將制得的大黃各炮制品粉末用10倍量的甲醇提取3次，每次30min，濾過，減壓回收濾液，裝于棕色玻璃瓶中，置陰涼處貯藏，得大黃不同炮制品的樣品溶液，備用。

2.3 檢測項目

2.3.1 薄層色譜（TLC）鑒別 取生大黃粉末樣品0.1 g，加入20ml甲醇浸漬1 h，濾過后取5ml濾液蒸干，加10ml水溶解后，再加入1ml鹽酸，水浴加熱30min，冷卻后用乙醚提取，每次20ml，提取2次，將提取的乙醚液蒸干，殘渣加入氯仿進行溶解，制成1ml的生大黃溶液，作為對照溶液；按上述方法分別制備大黃不同炮制品的溶液。分別吸取生大黃及各炮制品溶液4μl，點于同一加入0.3%羥甲基纖維素鈉的硅膠H板上，以正己烷-醋酸乙醋-甲酸（30∶10∶0.5，V/V/V）為展開劑，展開晾干后，置紫外光燈（365nm）下檢視[4]。結(jié)果，大黃不同炮制品色譜中，在與生大黃色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的5個橙黃色熒光斑點；經(jīng)氨蒸氣熏后，置日光下檢視，斑點變?yōu)榧t色。大黃不同炮制品的TLC圖見圖1。

圖1 大黃不同炮制品的TLC圖1，5.生大黃；2～4.熟大黃；6～7.酒大黃；8.大黃炭Fig 1 TLC of processed R.palmatum products1，5.R.palmatum；2-4.prepared R.palmatum；6-7.prepared R.palmatum with wine；8.charred R.palmatum

2.3.2 鞣質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測定[5-6]精密稱取0.027mg/ml的沒食子酸溶液25ml，置50ml棕色量瓶中，加水稀釋至50ml，再精密量取5ml，加水稀釋至25ml，搖勻，作為對照品溶液。分別量取大黃不同炮制品的樣品溶液2ml，置25ml棕色量瓶中，加入1ml磷鉬鎢酸溶液和10ml水，在760nm波長下分別測定吸光度（A），根據(jù)回歸方程[A＝5.188c－0.00568（r＝0.9999），c為沒食子酸質(zhì)量濃度]計算溶液中沒食子酸含量，作為溶液中總酚量。取大黃不同炮制品的樣品溶液12.5ml，加入含有0.3 g干酪素的50ml具塞錐形瓶中，密封后30Ⅸ水浴1 h保溫處理，隨后取出，待冷卻后濾過，精密量取2ml濾液，置25ml棕色量瓶中，在760nm波長下測定A，根據(jù)上述回歸方程計算溶液中沒食子酸的含量，作為不被吸附的多酚量。根據(jù)下式計算大黃不同炮制品中鞣質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù):鞣質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)＝總酚量－不被吸附的多酚量，結(jié)果見表1。

表1 大黃不同炮制品炮制前后鞣質(zhì)、蔥醌質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定結(jié)果（，‰）Tab 1 Comparison of the contents of tannin and anthraquinone in R.palmatum before and after processing（，‰）

表1 大黃不同炮制品炮制前后鞣質(zhì)、蔥醌質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定結(jié)果（，‰）Tab 1 Comparison of the contents of tannin and anthraquinone in R.palmatum before and after processing（，‰）

樣品生大黃酒大黃熟大黃大黃炭成分鞣質(zhì)2.61±0.212.54±0.340.39±0.050.01±0.01結(jié)合蒽醌40.02±4.4536.21±5.2417.02±1.362.11±1.18游離蒽醌4.08±1.025.45±3.126.87±1.542.58±0.54總蒽醌44.10±3.0441.66±4.1223.89±1.184.69±1.89

2.3.3 蒽醌質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測定[7]精密稱取大黃素對照品1.24mg，置10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml含0.124mg的大黃素對照品溶液。精密吸取大黃不同炮制品的樣品溶液10ml，揮去甲醇，作為樣品貯備液。加1.0%醋酸鎂甲醇溶液，定容至10ml量瓶中，搖勻后在509nm波長處測定A。根據(jù)回歸方程[A＝3.4624 x+0.0234（r＝0.9992），x為大黃素進樣量，大黃素進樣量在0.0248～0.248mg范圍內(nèi)與吸收度呈良好線性關(guān)系]計算溶液中大黃素質(zhì)量分?jǐn)?shù)，作為溶液中總蒽醌質(zhì)量分?jǐn)?shù)；取大黃不同炮制品的樣品溶液10ml，加丙酮稀釋至25ml量瓶中，加入1，8二羥基蒽醌對照品溶液（精密稱取1，8-二羥基蒽醌對照品25mg，置50ml容量瓶中，加丙酮溶解至刻度），以丙酮為空白，在460、540nm波長處測定A（蒽醌的最大激發(fā)波長為460nm，固定該激發(fā)波長，掃描得發(fā)射圖譜，得到其發(fā)射波長為540nm。選擇該最大激發(fā)波長和最大發(fā)射波長作為測定波長。），根據(jù)回歸方程[A＝122.81 c+46.224（r＝0.9996），c為1，8二羥基蒽醌質(zhì)量濃度，1，8二羥基蒽醌質(zhì)量濃度在0.25～3μg/ml范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系]計算溶液中游離蒽醌含量。并按下式計算結(jié)合蒽醌的質(zhì)量分?jǐn)?shù):結(jié)合蒽醌質(zhì)量分?jǐn)?shù)＝總蒽醌質(zhì)量分?jǐn)?shù)－游離蒽醌質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果見表1。

由表1可知，大黃在炮制前、后蒽醌及鞣質(zhì)含量發(fā)生了變化，且變化程度同炮制條件的強烈程度相關(guān)。大黃不同炮制品中，熟大黃中游離蒽醌含量最高，生大黃中結(jié)合蒽醌含量最高。各成分含量高低排列順序分別為游離蒽醌:大黃炭＜生大黃＜酒大黃＜熟大黃；結(jié)合蒽醌:大黃炭＜熟大黃＜酒大黃＜生大黃；鞣質(zhì):大黃炭＜熟大黃＜酒大黃＜生大黃。

2.3.4 其他指標(biāo)[8]按2010年版《中國藥典》（一部）中灰分測定法、干燥失質(zhì)量測定法和浸出物測定法進行檢測，分別記錄檢測結(jié)果，結(jié)果見表2。

表2 大黃不同炮制品質(zhì)量檢測結(jié)果（，%）Tab 2 Results of quality test of different processed R.palmatum products（，%）

表2 大黃不同炮制品質(zhì)量檢測結(jié)果（，%）Tab 2 Results of quality test of different processed R.palmatum products（，%）

樣品生大黃酒大黃熟大黃大黃炭檢測指標(biāo)干燥失質(zhì)量6.52±0.416.40±0.346.12±0.185.41±0.24總灰分質(zhì)量分?jǐn)?shù)8.56±0.749.24±0.689.08±0.659.79±0.48酸不溶灰分質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.58±0.050.51±0.040.44±0.060.48±006浸出物質(zhì)量分?jǐn)?shù)47.02±4.3145.56±3.2145.42±2.9813.02±0.71

由表2可知，生大黃、酒大黃、熟大黃、大黃炭總灰分及酸不溶灰分成分含量相差不多；酒大黃、熟大黃干燥失質(zhì)量及浸出物含量無明顯變化，大黃炭干燥失質(zhì)量及浸出物含量明顯降低。

3 討論

3.1 大黃飲片炮制前后一般項目檢測

目前，相關(guān)部門沿用《中國藥典》中各飲片檢測標(biāo)準(zhǔn)對不同中藥飲片進行質(zhì)量檢測。規(guī)定炮制后干燥失質(zhì)量應(yīng)不超過15.0%；總灰分質(zhì)量分?jǐn)?shù)不得超過10.0%；酸不溶灰分質(zhì)量分?jǐn)?shù)不得超過0.8%；浸出物質(zhì)量分?jǐn)?shù)不得少于25.0%。本試驗中，生大黃、酒大黃、熟大黃及大黃炭4種大黃炮制品在干燥失質(zhì)量，總灰分含量、酸不溶灰分含量方面均同國家規(guī)定相符合。在浸出物檢測上，酒大黃及熟大黃浸出物含量變化不大，高于45%，符合《中國藥典》規(guī)定，但大黃炭浸出物含量為（13.02±0.71）%，低于《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)，這應(yīng)該同大黃飲片在炒炭過程中因劇烈受熱，飲片內(nèi)成分被大量分解破壞相關(guān)。

3.2 大黃飲片炮制前后化學(xué)組分含量及藥理作用改變

多數(shù)學(xué)者實驗研究證明，大黃的瀉下作用同其中含有的鞣質(zhì)及蒽醌含量多少有密切關(guān)系[9]。生大黃飲片中鞣質(zhì)含量高，并含有多種苷類組分，因此其具有明顯的瀉下、解熱功效；熟大黃、大黃炭中以蒽醌苷元、沒食子酸等化分成分為主，而苷類組分的含量下降，因此其瀉下、解熱作用減弱，活血化瘀功能增強。這些都說明大黃瀉下、解熱作用與蒽醌含量是密切相關(guān)的。同時，瀉下解熱作用與鞣質(zhì)含量也呈正相關(guān)。傳統(tǒng)中醫(yī)理論中，生大黃苦寒，炮制后苦寒性質(zhì)得到緩和，且大黃炭苦寒之性基本消失，故大黃苦寒性質(zhì)強弱同其瀉下解熱作用呈正相關(guān)。因此，大黃中鞣質(zhì)及蒽醌含量同大黃苦寒之性相關(guān)，為大黃苦寒性質(zhì)的物質(zhì)基礎(chǔ)，且大黃中鞣質(zhì)及蒽醌含量變化同大黃藥性改變關(guān)系密切。

在大黃不同炮制品中，熟大黃中游離蒽醌含量最多，生大黃中結(jié)合蒽醌含量最多，并且含量變化與炮制條件的強烈程度相關(guān)。生大黃中鞣質(zhì)含量最高，炮制過程中根據(jù)受熱程度而減少，其中大黃炭中鞣質(zhì)含量最低，幾乎檢測不到?，F(xiàn)代藥理研究證實，鞣質(zhì)中的沒食子酸及d-兒茶素是大黃發(fā)揮止血作用的有效成分。但是，在本試驗中生大黃中鞣質(zhì)含量最高，按照藥理實驗結(jié)論，生大黃止血效果應(yīng)該強于大黃炭及其他炮制品，而臨床應(yīng)用中，大黃炭止血效果最好，兩者在理論上相悖，今后還應(yīng)做進一步研究。大黃炭中總蒽醌含量最低，這應(yīng)該同炒炭炮制中，條件劇烈，各種化學(xué)組分被嚴(yán)重分解破壞有關(guān)。熟大黃因為受熱時間久，加熱溫度高，總蒽醌成分也受到顯著破壞，而結(jié)合蒽醌多分解為游離蒽醌，因此熟大黃中游離蒽醌含量最高。而酒大黃在制備過程中，加熱溫度低，因此被破壞程度低，蒽醌成分在結(jié)合及游離兩種類型間相關(guān)轉(zhuǎn)化，因此總量變化不大。

總之，從炮制前后鞣質(zhì)及蒽醌類物質(zhì)基礎(chǔ)含量變化能夠顯示大黃不同炮制品間藥性及毒性差異，反映大黃飲片不同的苦寒性質(zhì)，從而為不同炮制品臨床作用發(fā)揮提供科學(xué)理論基礎(chǔ)，同時也可為制訂不同炮制品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

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