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    安徽岳西茯苓醇提物高效液相指紋圖譜研究

    2014-05-18 09:14:10
    宿州學院學報 2014年5期
    關鍵詞:岳西茯苓產(chǎn)地

    張 穎

    安徽中醫(yī)藥高專藥學系,安徽蕪湖,241000

    茯苓為多孔菌科真菌茯苓(Poria cocs (Schw.)Wolf)的干燥菌核,具有利水消腫、健脾安神的療效[1];茯苓多糖和茯苓酸還可用于抗腫瘤和調(diào)節(jié)免疫[2]。傳統(tǒng)的茯苓道地產(chǎn)區(qū)是大別山和云貴一帶,特別是云南茯苓“云苓”,被認為是所有產(chǎn)地中質(zhì)量最好的,現(xiàn)有文獻也多集中于云南茯苓的研究。安徽大別山一帶和湖北茯苓GAP種植基地是目前茯苓產(chǎn)量最大的產(chǎn)區(qū),占全國產(chǎn)量七成以上。在文獻和前期研究的基礎上,筆者發(fā)現(xiàn)安徽岳西所產(chǎn)的茯苓藥材在外觀性狀和化學成分上與其他產(chǎn)地的茯苓有一些區(qū)別,如色澤、氣味,且當?shù)貍鹘y(tǒng)的用藥經(jīng)驗認為其質(zhì)量和療效優(yōu)于云苓。由于岳西茯苓具有獨特之處和優(yōu)良品質(zhì),對岳西茯苓進行特征性鑒別的指紋圖譜研究具有一定必要性,且有關岳西茯苓質(zhì)量控制的研究未見報道。本研究收集了安徽岳西及其周邊一帶的茯苓藥材,采用HPLC法對其進行指紋圖譜的分析研究,建立了安徽岳西一帶茯苓的特征圖譜,探討了該區(qū)域茯苓藥材色譜學行為的獨特之處,為安徽岳西茯苓的鑒別和質(zhì)量控制提供了科學依據(jù)。

    1 材料與儀器

    1.1 儀器

    E600型高效液相色譜儀為美國Waters公司生產(chǎn);檢測器為waters 2489紫外可見光檢測器,也為美國Waters公司生產(chǎn);FA21048型分析天平為上海越平儀器廠生產(chǎn);ATM40-1B超聲波清洗機為蘇州愛拓瑪機械公司生產(chǎn)。

    1.2 藥材

    本實驗共收集了安徽省大別山一帶5個縣區(qū)13個批次的茯苓藥材,由安徽中醫(yī)藥高等??茖W校中藥教研室鑒定為多孔菌科真菌茯苓(Poria cocs(Schw.)Wolf)的干燥菌核(表1)。

    表1 藥材采集信息

    1.3 試劑

    乙腈(色譜純,Merck公司)、磷酸(分析純,南京試劑一廠);水為娃哈哈純凈水;對照品茯苓酸為上海純優(yōu)生物科技有限公司提供,批號201301P0734。

    2 方 法

    2.1 色譜條件

    色譜柱為 waters symmetry C18(5μm,4.6*150 mm)。檢測波長為243nm。流動相為乙腈和0.5%磷酸水溶液梯度洗脫[3],洗脫條件如表2所示。

    表2 HPLC梯度洗脫條件

    2.2 對照品溶液的制備

    取茯苓酸對照品適量,精密稱定,甲醇溶解后定容于10mL容量瓶中,即得濃度為0.13mg/mL的茯苓酸對照品溶液,微孔濾膜過濾,待用。

    2.3 供試品溶液的制備

    將茯苓藥材粉碎后,精密稱取0.5g,置適宜的圓底燒瓶中,定量加入甲醇50mL,稱定質(zhì)量后超聲提取30min,冷卻后補足損失重量,靜置后取上清液用0.45μm微孔濾膜濾過,待用。

    2.4 穩(wěn)定性試驗

    取茯苓藥材(安徽岳西)1份,按既定方法制備溶液,并按既定方法分別在0、2、4、6、12、24h進樣分析,記錄各共有峰的峰面積和保留時間,通過分析,24h內(nèi)共有峰保留時間RSD值均小于0.82%,相對面積的RSD值均小于3.7%,實驗結果表明常溫下供試品溶液24h內(nèi)穩(wěn)定。

    2.5 重現(xiàn)性試驗

    取同一批茯苓藥材(安徽岳西)5份,按既定方法制備溶液,并按既定方法分別進樣20μL測定。計算各共有峰相對保留時間RSD值小于1.7%,相對峰面積RSD小于2.4%,實驗結果表明該方法重現(xiàn)性良好。

    2.6 精密度試驗

    取茯苓藥材(安徽岳西)1份,按既定方法制備溶液,并按既定方法平行測定6次。計算各共有峰相對保留時間RSD值小于0.94%,相對峰面積RSD小于3.1%,實驗結果表明儀器精密度良好。

    2.7 供試品的檢測

    取5個產(chǎn)地13批茯苓藥材,按既定方法制備供試藥液,分別取已制備好的各供試樣品20μL,注入高效液相色譜儀分析,記錄60min內(nèi)的色譜圖,記錄所有峰相對保留時間和相對峰面積。

    3 指紋圖譜及各項技術參數(shù)

    茯苓藥材指紋圖譜見圖1,分析比對5個不同產(chǎn)地的茯苓藥材供試品HPLC指紋圖譜(圖2),確定其中8個峰為共有峰,詳見表3。采用國家藥典委員會頒布的《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》(2004A版),對5個產(chǎn)地13批茯苓藥材指紋圖譜進行分析,各圖譜相似度介于0.893~0.963之間,詳見表4。其中10份藥材指紋圖譜相似性在0.96以上,僅有霍山縣所產(chǎn)茯苓藥材的相似性略低,為0.90左右,說明岳西及其周邊縣市所產(chǎn)茯苓所含成分種類及含量具有一致性,差異較小。

    圖1 茯苓藥材及加入茯苓酸標準品色譜圖

    其中峰4經(jīng)與標準品比對為茯苓酸,設定其為基礎峰,各檢測圖譜以基礎峰的保留時間、峰面積為參照,計算圖譜中各特征峰的相對保留時間和相對峰面積RSD,結果顯示:5批茯苓藥材相對保留時間RSD<0.98%,相對峰面積RSD小于4.79%,說明5批茯苓藥材所含成分及含量均較相似,詳見表5。

    圖2 13批茯苓藥材指紋圖譜

    表3 岳西及周邊地區(qū)茯苓藥材共有特征峰

    表4 岳西及周邊地區(qū)圖譜相似度分析結果

    表5 茯苓指紋圖譜測定結果(RT-保留時間,Area-峰面積)

    4 討 論

    (1)安徽大別山一帶自古以來就是茯苓藥材的重要產(chǎn)區(qū),特別是岳西縣所產(chǎn)茯苓遠近聞名,并且在藥材性狀上具有獨特之處。通過與其他產(chǎn)區(qū)茯苓藥材的比對,發(fā)現(xiàn)安徽茯苓的化學成分與其他產(chǎn)地存在差異[4]。本實驗采用高效液相色譜法,建立了岳西及周邊縣區(qū)茯苓藥材指紋圖譜。通過分析比對,安徽岳西及周邊一帶所產(chǎn)茯苓藥材樣本整體相似度較高,保留時間和峰面積均較為相似,提示該區(qū)域藥材質(zhì)量相近、穩(wěn)定一致,具有良好的相關性。這可能是由于大別山一帶地理位置、氣候、土壤等因素均較為相似,所產(chǎn)茯苓藥材的化學成分種類及含量較為相似和一致。

    (2)本實驗所建立的指紋圖譜分析方法簡單易行、穩(wěn)定可靠,具有良好的系統(tǒng)性、特征性和重現(xiàn)性,特征峰數(shù)目較多,且峰型較好,所用材料易于處理,可作為岳西大別山一帶茯苓藥材與其他產(chǎn)區(qū)鑒別及質(zhì)量控制的參考方法。

    (3)岳西茯苓的色譜圖顯示保留時間54min左右存在一個色譜峰,而其他產(chǎn)地茯苓藥材在此峰位沒有明顯峰型。這提示岳西茯苓在小極性區(qū)域存在一個獨特成分,相比其他產(chǎn)區(qū)茯苓含量明顯較高。結合岳西茯苓具有特有的香氣,猜測該成分或為一種揮發(fā)油或萜類,詳情有待進一步研究。

    [1]凌一揆,顏正華.中藥學[M].3版.上海:上海科學技術出版社,1984:95

    [2]張思訪,劉靜涵,蔣建勤,等.茯苓的化學成分和藥理作用及開發(fā)[J].中華實用中西醫(yī)結合雜志,2005,18(2):227-230

    [3]段啟,李霞蘭,王少軍,等.HPLC法測定茯苓皮中茯苓酸[J].中草藥,2006,37(2):284-285

    [4]許臘英,萬芳,付文強,等.不同產(chǎn)地茯苓中萜類成分的HPLC指紋圖譜研究[J].湖北中醫(yī)學院學報,2007,9(3):41-43

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