免疫比濁法和高效液相色譜法檢測糖化血紅蛋白方法的方法學(xué)比較

徐活成黃惠芳賴玉琴

（1 廣州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 廣州 510800；2 廣州市花都區(qū)婦幼保健院（胡忠醫(yī)院）檢驗(yàn)科，廣東 廣州 510800）

免疫比濁法和高效液相色譜法檢測糖化血紅蛋白方法的方法學(xué)比較

徐活成1黃惠芳2賴玉琴2

（1 廣州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 廣州 510800；2 廣州市花都區(qū)婦幼保健院（胡忠醫(yī)院）檢驗(yàn)科，廣東 廣州 510800）

目的探討免疫比濁法和高效液相色譜法檢測糖化血紅蛋白（HbAlc）結(jié)果的差異并評(píng)價(jià)其偏倚。方法選取我院2013年5月至2013年9月收集的120例常規(guī)標(biāo)本，采用免疫比濁法和高效液相色譜法對(duì)標(biāo)本進(jìn)行HbAlc檢測，評(píng)價(jià)兩種檢測結(jié)果的相關(guān)性及偏倚。結(jié)果HbAlc濃度在0～14.0%范圍內(nèi)，免疫比濁法和高效液相色譜法均有良好的重復(fù)性，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，t值分別為0.332、0.281、0.554，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論通過方法學(xué)評(píng)價(jià)，免疫比濁法和高效液相色譜法測定HbAlc精密度符合臨床要求，結(jié)果具有可比性，均適合臨床的治療監(jiān)測。

糖化血紅蛋白；免疫比濁法；高效液相色譜法；精密度

糖尿病是一種慢性疾病，近年來此病在很多國家和地區(qū)的患者呈逐年遞增的趨勢，糖化血紅蛋白是糖類與血紅蛋白經(jīng)非酶促反應(yīng)結(jié)合而成，其合成是緩慢和不可逆的[1]。糖化血紅蛋白（HbAlc）是診斷糖尿病和監(jiān)測糖尿病治療效果的重要指標(biāo)，其可反映患者3個(gè)月內(nèi)的血糖水平，對(duì)于評(píng)估當(dāng)前血糖濃度有重要意義。目前HbAlc的監(jiān)測方法有：離子交換高效液相色譜法、離子交換層析法、免疫抑制比濁法等。高效液相色譜法是國際標(biāo)準(zhǔn)化檢測方法，臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，免疫比濁法和高效液相色譜法對(duì)患者標(biāo)本檢測的基本性能可滿足患者的監(jiān)測要求[2]，為研究兩種檢測方法的差異程度，特進(jìn)行以下研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

標(biāo)本來源于門診血糖糖尿病患者和內(nèi)分泌科住院患者全血標(biāo)本120份，均采用EDTA-K2抗凝?；颊吣挲g在26～78歲，平均（48.5±4.3）歲。

1.2 方法

儀器采用東芝120全自動(dòng)生化儀，儀器定期校準(zhǔn)，每日用各儀器制定或提供的高、低值指控品進(jìn)行質(zhì)量控制。采用NCCLS-EP5進(jìn)行精密度評(píng)價(jià)，選擇有醫(yī)學(xué)決定水平的異常和正常濃度樣品，校準(zhǔn)后隔1 h對(duì)樣本測定一次，連續(xù)測定10次，每種方法可得到20個(gè)數(shù)據(jù)，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差、均值作為批內(nèi)精密度。嚴(yán)格按照說明書，肝素鋰標(biāo)本取10μL＋1000 μL溶血素處理，免疫比濁法和高效液相色譜法檢測HbAlc結(jié)果，計(jì)算HbAlc結(jié)果。有關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.3 數(shù)據(jù)處理

使用SPSS19.0軟件包對(duì)本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，以95%為可信區(qū)間，計(jì)算結(jié)果顯示P＜0.05時(shí)，表示樣本差異明顯且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。診斷準(zhǔn)確率為計(jì)數(shù)資料，組間比較方法為χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

兩種方法測試的HbAlc結(jié)果，低高濃度均值比較，見表1。

表1 兩種方法測試的HbAlc結(jié)果，低高濃度均值比較

HbAlc濃度在0～14.0%范圍內(nèi)，免疫比濁法和高效液相色譜法均有良好的重復(fù)性，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，t值分別為0.332、0.281、0.554，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討 論

大量研究表明，長期監(jiān)測、控制血糖能減少糖尿病相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)生，HbAlc是糖尿病患者血糖控制指標(biāo)，可作為血糖代謝情況的手段，對(duì)早期發(fā)現(xiàn)糖尿病、指導(dǎo)糖尿病治療有積極意義。HbAlc在糖尿病的篩查中有早期提示的價(jià)值，可作為輕癥[3]、隱形糖尿病的早期診斷，在治療過程中，是評(píng)價(jià)血糖控制好壞的重要標(biāo)準(zhǔn)，血糖控制效果欠佳時(shí)，濃度可升高，此外HbAlc可評(píng)估糖尿病慢性并發(fā)癥的發(fā)生與發(fā)展，其檢測越來越受到重視[4]。HbAlc是血液中與葡萄糖結(jié)合的部分血紅蛋白，血壓中葡萄糖濃度升高時(shí)，HbAlc含量也會(huì)升高。HbAlc是檢測120 d內(nèi)平均血糖水平，與空腹及胰島素使用無關(guān)。

目前HbAlc的檢測方法包括高效液相色譜法、電泳法、微柱法、親和層析法等，隨著技術(shù)不斷進(jìn)步[5]，先進(jìn)儀器不斷進(jìn)入檢驗(yàn)領(lǐng)域，免疫比濁法和高效液相色譜法成為臨床最常用的方法。

美國國家糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃（NGSP）推薦高效液相色譜法是檢測HbAlc的金標(biāo)準(zhǔn)，在本組資料中, HbAlc濃度在0～14%范圍時(shí)，兩種檢測方法都有良好的重復(fù)性[6]，兩組數(shù)據(jù)沒有顯著性差異，精密度均符合臨床要求，結(jié)果具有可比性，適合臨床用于糖尿病治療監(jiān)測。

隨著自動(dòng)生化分析儀的普及，免疫比濁法已經(jīng)廣泛應(yīng)用于基層醫(yī)院，但試劑的選擇，溶血?jiǎng)┖脱?xì)胞的比例，加入時(shí)間等都影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性[7]，單克隆抗體不可識(shí)別的希夫堿，因Hb變異體的普遍存在對(duì)免疫比濁法的重復(fù)性及準(zhǔn)確性造成巨大挑戰(zhàn)，為了提高其準(zhǔn)確性和可重復(fù)性，免疫比濁法在操作上力求標(biāo)準(zhǔn)化，在工作人員、試劑選擇、血細(xì)胞比例等方面做到標(biāo)準(zhǔn)化。高效液相色譜法使HbAlc的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性得到很大提高，免疫比濁法應(yīng)與高效液相色譜法進(jìn)行校正或設(shè)立參考區(qū)間[8]，對(duì)檢測方法進(jìn)行比較，臨床醫(yī)師在分析結(jié)果時(shí)也要了解方法學(xué)造成的檢測差異，這對(duì)病情的診斷、控制都有重要作用。

兩種檢測方法在操作環(huán)節(jié)嚴(yán)格控制下，檢測結(jié)果均有較好的吻合性。通過方法學(xué)評(píng)價(jià)，免疫比濁法和高效液相色譜法測定HbAlc精密度符合臨床要求，結(jié)果具有可比性，均適合臨床的治療監(jiān)測。

[1] 周丹秋,王東明,馮仁豐.免疫抑制比濁法測定HbAlc的可靠性評(píng)價(jià)[J].臨床檢驗(yàn)雜志,2012,21(5):291.

[2] 托馬斯,朱漢民,沈霞,等.糖化血紅蛋白[J].臨床實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2011, 5(1):112-113.

[3] 姚雪琴.空腹血糖和糖化血紅蛋白的相關(guān)性分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2012,3(6):280.

[4] Weber M,Harem C.Role of Prtype natriuretic peptide(BNP)and HbAlc in clinical routine[J].Heart,2009,92(6):843-849.

[5] De Lemos JA,Morrow DA,Bentley JH,et a1.The prog-nostic Value of B-type natriuretic peptide in patients withacute coronary syndromes[J]. N Engl J Med,2011,345(14):1014-1021.

[6] 郭世春,吳蕊,黃昭喧,等.糖尿病醫(yī)院感染患者糖化血紅蛋白的監(jiān)測意義[J].中國感染控制雜志,2012,5(2):148-149.

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1671-8194（2014）24-0072-02