先天性白內(nèi)障大鼠血液生化及血液流變學(xué)分析

田小蕓，尤金煒，董 敏，許龍祥，趙志剛，陳 莉，惲?xí)r鋒

（南京軍區(qū)南京總醫(yī)院比較醫(yī)學(xué)科，南京 210002）

先天性白內(nèi)障大鼠血液生化及血液流變學(xué)分析

田小蕓，尤金煒，董 敏，許龍祥，趙志剛，陳 莉，惲?xí)r鋒

（南京軍區(qū)南京總醫(yī)院比較醫(yī)學(xué)科，南京 210002）

目的 測(cè)定先天性白內(nèi)障大鼠血液常規(guī)、生化正常值及血液流變學(xué)變化。方法 采用XS-800i血常規(guī)分析儀和OLYMPUSAV2700生化自動(dòng)分析儀對(duì)185～211 g大鼠共計(jì)90只進(jìn)行血液常規(guī)和生化檢測(cè)及用SA-6600自動(dòng)血流變測(cè)試儀對(duì)血液進(jìn)行流變學(xué)的測(cè)定。結(jié)果 血像檢測(cè)結(jié)果是白內(nèi)障與正常對(duì)照同性比較無(wú)差異顯著性（P＞0.05）；小眼白內(nèi)障與正常對(duì)照同性比較紅細(xì)胞寬度（RDW）間差異顯著（P＜0.01或P＜0.05）。血生化檢測(cè)結(jié)果是白內(nèi)障大鼠與正常對(duì)照組同性間比較白蛋白（ALB）差異顯著（P＜0.01或P＜0.05）雌性與對(duì)照組比較尿素（Ure）差異顯著（P＜0.01），小眼白內(nèi)障雌性與正常對(duì)照比較肌酐（Cr）差異非常顯著（P＜0.01）。白內(nèi)障、小眼白內(nèi)障大鼠的紅細(xì)胞是雄性的低于雌性（P ＜0.05，P ＜0.01）而血小板是雄性的高于雌性（P ＜0.01），肌酐是雄性低于雌性P＜0.01），正常組雄雌間無(wú)差異；血液流變學(xué)各組間無(wú)差異顯著性。結(jié)論 白內(nèi)障大鼠與正常組大鼠間某些血常規(guī)及生化指標(biāo)有一定的差異，該數(shù)據(jù)為該鼠在這領(lǐng)域的使用提供參考。

先天性白內(nèi)障；大鼠；血常規(guī)；血生化；血液流變學(xué)

臨床上將晶狀體混濁稱(chēng)為白內(nèi)障，出生后即存在或出生后1年內(nèi)才逐漸形成的晶狀體部分或全部混濁稱(chēng)為先天性白內(nèi)障。先天性白內(nèi)障是造成兒童失明和弱視的主要原因，其發(fā)病率約為0.01％～0.06％，占兒童致盲性眼病的第二位。任何參與、影響晶狀體發(fā)育的基因突變都可能導(dǎo)致先天性白內(nèi)障的發(fā)生［1-3］。2007年由屏障環(huán)境繁殖大鼠生產(chǎn)的仔鼠中發(fā)現(xiàn)5只白內(nèi)障大鼠，其中3只雄鼠和2只雌鼠，于是我們將該鼠保留下來(lái)；又從屏障種鼠中找到了白內(nèi)障母鼠，但此后屏障中就再也未產(chǎn)過(guò)白內(nèi)障仔鼠。先天性白內(nèi)障約有1/3是與遺傳有關(guān)。遺傳性先天性白內(nèi)障有三種不同遺傳方式：常染色體顯性遺傳、常染色體隱性遺傳和X連鎖隱性遺傳3種；先天性白內(nèi)障的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程，其致病機(jī)制至今仍未闡明，眾多學(xué)說(shuō)林立，但尚無(wú)定論［4-6］。我們將白內(nèi)障仔鼠進(jìn)行了傳代，現(xiàn)小眼白內(nèi)障已穩(wěn)定傳代22代，封閉群白內(nèi)障大鼠封閉繁殖近7年，后代中有白內(nèi)障大鼠、小眼白內(nèi)障大鼠及正常大鼠三種；小眼白內(nèi)障大鼠近交后代5代內(nèi)全部是小眼白內(nèi)障大鼠，但是從第6代開(kāi)始出現(xiàn)分化，后代中不僅有小眼白內(nèi)障，還有單眼白內(nèi)障及小眼無(wú)白內(nèi)障情況出現(xiàn)，第7代還出現(xiàn)一只長(zhǎng)牙鼠，在第10代時(shí)選擇了回交，繼續(xù)選擇雙眼白內(nèi)障大鼠留種，從第14代開(kāi)始后代均為小眼白內(nèi)障大鼠，并能穩(wěn)定遺傳?，F(xiàn)就血液常規(guī)、生化及血液流變情況進(jìn)行分析，為該鼠提供一些基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

取自繁白內(nèi)障、小眼白內(nèi)障大鼠和正常對(duì)照185～211 g雌雄各15只進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，生產(chǎn)許可證SCXK（軍）2007-012。

1.2 飼養(yǎng)管理及環(huán)境

實(shí)驗(yàn)大鼠均飼養(yǎng)在屏障環(huán)境中，室內(nèi)的溫濕度均由中央空調(diào)控制，溫度為20℃ ～26℃，相對(duì)濕度為50％～70％，光照明暗交替12 h/天，使用許可證號(hào)為SYXK（軍）2007-029。

大鼠所食飼料為Co60輻照飼料，營(yíng)養(yǎng)成份為：粗蛋白21.8％，粗脂肪為4.0％，粗灰份為7.8％，粗纖維3.0％，水份10.1％，鈣1.7％，磷1.08％，生產(chǎn)許可證號(hào)為：蘇飼審（2008）01008，另每周加喂一次葵花籽。飲水為消毒的酸化水，使用的墊料、盒子等一切用具均進(jìn)行131℃5 min高壓預(yù)真空滅菌。

1.3 標(biāo)本采集

大鼠麻醉后先以無(wú)菌玻璃毛細(xì)管（內(nèi)徑0.9～1.1 mm）經(jīng)大鼠眶靜脈叢采血，血常規(guī)入專(zhuān)用抗凝血常規(guī)管中，血生化入1 mL離心管中，以3000 r/min的速度離心10 min，分離血清并送檢。血流變從腹主靜脈插管采血，采血后立即慢速顛倒，充分混勻，防止產(chǎn)生泡沫及血液凝固，切忌劇烈搖晃或震蕩，并在試管上貼上標(biāo)識(shí)，采血后盡快檢測(cè)，室溫保存，不超過(guò)4 h，全自動(dòng)血流變分析儀檢測(cè)。

1.4 測(cè)定儀器

血常規(guī)采用日本產(chǎn)sysmex，型號(hào)是XS-800i血常規(guī)分析儀自動(dòng)檢測(cè)，血液生化采用 OLYMPUS AV2700生化自動(dòng)分析儀進(jìn)行檢測(cè)；血流變采用賽科希德SA-6600自動(dòng)血流變測(cè)試儀。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用單因素方差分析對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果以±s表示，以P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［7-8］。

2 結(jié)果

各組大鼠的血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1，從表1中可以看出白內(nèi)障與正常對(duì)照同性比較無(wú)差異顯著性（P＞0.05）；小眼白內(nèi)障與正常對(duì)照同性比較RDW間差異顯著（P＜0.01或P＜0.05）。

白內(nèi)障大鼠RBC、MCH、MCHC、MCV、PLT、PCT雌雄間差異非常顯著（P＜0.01）；小眼白內(nèi)障大鼠的Hb、RBC雌雄間差異顯著（P＜0.05），MCHC、MCV、PLT、PCT雌雄間差異非常顯著（P＜0.01）；正常對(duì)照組MCH、MCHC、MCV雌雄間差異非常顯著（P＜0.01）。

各組大鼠的血生化檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。從表2中可以看出白內(nèi)障大鼠與正常對(duì)照組同性間比較ALB差異顯著（P＜0.01或P＜0.05），白內(nèi)障和小眼白內(nèi)障雌性與對(duì)照組比較Ure差異顯著（P ＜0.01或P＜0.05），小眼白內(nèi)障雌性與正常對(duì)照比較Cr差異非常顯著（P＜0.01）。

白內(nèi)障大鼠的TP、ALB、Cr雌雄間差異非常顯著（P＜0.01），GL、Ure差異顯著（P ＜0.05）；小眼白內(nèi)障的TP、ALB、GL、Cr雌雄間差異非常顯著（P＜0.01），CHO差異顯著（P＜0.05）；正常對(duì)照組的TP、ALB雌雄間差異非常顯著（P ＜0.01），GL、CHO差異顯著（P＜0.05）。

先天性白內(nèi)障大鼠血液流變學(xué)結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果顯示每組大鼠的血液流變指標(biāo)間沒(méi)有顯著性差異（P ＞0.05）。

3 討論

正常實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的各種生物學(xué)數(shù)據(jù)雖然有其一定的數(shù)值，但這是相對(duì)而言的，常因動(dòng)物品種、年齡、測(cè)定方法、測(cè)定時(shí)間、測(cè)定時(shí)技術(shù)熟練程度等不同，其數(shù)值也隨之變化［9］。臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)是測(cè)定機(jī)體內(nèi)各種體液化學(xué)成份的含量，通過(guò)生物化學(xué)檢查，了解疾病的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后等情況。白內(nèi)障是影響人類(lèi)健康的常見(jiàn)病、多發(fā)病。研究白內(nèi)障的病因?qū)W及影響因素，是預(yù)防和治療該病的有力措施。然而迄今為止對(duì)白內(nèi)障的發(fā)病機(jī)制還未能完全達(dá)成共識(shí)，有晶狀體上皮細(xì)胞凋亡研究，有晶狀體蛋白研究，有晶狀體氧化損傷及生化研究，有遺傳性白內(nèi)障基因研究，有輻射性白內(nèi)障研究等等。

本實(shí)驗(yàn)用的白內(nèi)障大鼠是本科室自已培育繁殖的白內(nèi)障大鼠，表現(xiàn)為白內(nèi)障、小眼白內(nèi)障二種。實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示小眼白內(nèi)障雄性大鼠的血紅蛋白、白內(nèi)障組與小眼白內(nèi)障雄性大鼠的紅細(xì)胞數(shù)、MCHC和血小板比積及正常組雄性大鼠的MCHC均低于雌性；白內(nèi)障組、小眼白內(nèi)障雄性大鼠的平均紅細(xì)胞體積、血小板計(jì)數(shù)及白內(nèi)障組和正常組雄性大鼠的平均紅細(xì)胞體積、MCH均高于雌鼠。小眼白內(nèi)障大鼠的血紅蛋白雌性高于雄性，而血小板計(jì)數(shù)是雌性低于雄性，和田小蕓等的報(bào)道相一致［9］，血紅蛋白除能與氧結(jié)合形成氧鐵血紅蛋白外，尚能與二氧化碳結(jié)合形成血紅蛋白衍生物達(dá)到組織供氧及調(diào)節(jié)酸堿平衡的作用，血小板可保護(hù)毛細(xì)血管的完整性，參與機(jī)體的凝血過(guò)程；白內(nèi)障組和正常組卻沒(méi)有這種變化，是否是近交系與封閉群的區(qū)別還有待檢驗(yàn)。

白內(nèi)障、小眼白內(nèi)障和正常對(duì)照組雌性鼠的總蛋白、白蛋白和球蛋白值均高于雄性鼠，血清蛋白具有維持血液正常膠體滲透壓和PH，運(yùn)輸多種代謝物，調(diào)節(jié)被運(yùn)輸物質(zhì)的生理作用和解除其毒性，免疫作用以及營(yíng)養(yǎng)作用等多種功能。血清蛋白水平主要反映肝臟合成功能和腎臟病變?cè)斐傻鞍讈G失的情況。不僅存在于血清內(nèi)，也分部于各種細(xì)胞外液，并不斷進(jìn)行互相交換［10］。本實(shí)驗(yàn)無(wú)論是白內(nèi)障大鼠還是對(duì)照組大鼠均表現(xiàn)為雌性蛋白升高現(xiàn)象，這可能是雌性鼠的生理決定。白內(nèi)障組、小眼白內(nèi)障與正常對(duì)照組間球蛋白無(wú)組間差異，血清球蛋白是多種蛋白質(zhì)的混合物，包括具有防御作用的免疫球蛋白和補(bǔ)體等，說(shuō)明這方面的免疫功能無(wú)差異。白內(nèi)障、小眼白內(nèi)障鼠雌性組肌酐均高于雄性組，而對(duì)照組雖然從數(shù)字上看也是雌性高于雄性，但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，是否是白內(nèi)障基因和性別共同作用的結(jié)果還待探討；血肌酐濃度取決于機(jī)體產(chǎn)生和攝入與腎臟的排泄能力，基本不受飲食、高分解代謝等腎外因素影響，在外源性肌酐攝入量穩(wěn)定，體內(nèi)肌酐生成量恒定的情況下，其濃度主要取決于腎小球的濾過(guò)功能。因此，肌酐濃度可以在一定程度上準(zhǔn)確反映腎小球?yàn)V過(guò)功能的損害程度［10］。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果為白內(nèi)障與正常對(duì)照組肌酐無(wú)組間差異，說(shuō)明腎臟功能是好的，但白內(nèi)障組間存在性別差異而對(duì)照組沒(méi)有，這種差異是否是白內(nèi)障突變基因引起還有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

血液流變學(xué)是研究血液流變特異性在疾病的發(fā)生與發(fā)展及疾病的診治中作用的一門(mén)流體力學(xué)與醫(yī)學(xué)交叉的新型學(xué)科，血流流變學(xué)是從流體力學(xué)角度來(lái)評(píng)價(jià)血液的流動(dòng)性及影響流動(dòng)性的因素，為我們認(rèn)識(shí)血液拓展了新的視野，與血液流動(dòng)學(xué)相關(guān)的不僅僅是血液病，，同時(shí)與心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)等疾病也有密切的關(guān)系，因此通過(guò)血液流變學(xué)的研究和對(duì)其指標(biāo)的檢測(cè)可對(duì)多種疾病的病因，病理生理及臨床療效作出恰當(dāng)?shù)脑u(píng)價(jià)［11］。而中醫(yī)認(rèn)為白內(nèi)障多有陰陽(yáng)失調(diào)，氣血不足，氣滯血瘀，其血流變具有粘、濃、凝、聚之共性，尤其是對(duì)老年性白內(nèi)障，先天性白內(nèi)障多由于發(fā)育不良或胚胎時(shí)期感染、中毒、營(yíng)養(yǎng)不良等所致［12-13］，本實(shí)驗(yàn)中所測(cè)大鼠血流變各組間無(wú)差異，一方面是因?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)大鼠是先天性白內(nèi)障；另一方面也是因?yàn)樵摯笫蟛皇抢夏甏笫?，這在疾病研究機(jī)制、藥物治療及預(yù)防上就有別于其它類(lèi)型的白內(nèi)障，為該病的預(yù)防、治療及藥物篩選提供理想的模型動(dòng)物。

表1 先天性白內(nèi)障大鼠的血常規(guī)變化Tab.1 Blood routine values of the rats with congenital cataract

表2 白內(nèi)臟大鼠血生化檢測(cè)結(jié)果Tab.2 Blood biochemical parameters of the rats with congenital cataract

表3 白內(nèi)障大鼠血液流變情況Tab.3 Hemorheology levels of the rats with congenital cataract

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Analysis of the routine blood counts and blood biochem ical parameters and hemorheology in the rats w ith congenital cataract

TIAN Xiao-yun，YOU Jing-wei，Dong-Min，XU Long-xiang，ZHAO Zhi-gang，CHEN Li，YUN Shi-feng
（Department of Comparative Medicine，Nanjing General Hospital of Nanjing Military Command，Nanjing 210002，China）

Objective Tomeasure the range of routine blood counts and blood biochemical parameters，to analyze hemorheology of the rats with congenital cataract.Methods Blood samples were taken from 90 rats with congenital cataract weight about 185～211 g.Routine blood analysis was performed and blood biochemical and hemorheology paramenters were determind using an automatic blood biochemical and hemorheology analyzer.Results There were no significant difference（P ＞ 0.05）between the cataract rats and the normal rats in Blood test results；but there were significant difference between themicrophthalmos cataract rats and the normal same-sex rats（P ＜0.01 or P ＜0.05）.The biochemical results is the cataract rats and the normal rats were different significantly in ALB group（P ＜0.01 or P＜0.05），and the femalemicrophthalmos cataract rats compared with the control rats had significant difference in Ure（P＜0.01），the female cataract rats ompared with the normal ratswere very significant difference in Cr group（P ＜0.05 or P＜0.01）.The erythrocyte counts of themale cataract rats and malemicrophthalmos cataract ratswere significantly lower than that in the female ones，respectively（P ＜0.05，P ＜0.01）.The platelet counts of the male cataract rats and the malemicrophthalmos cataract ratswere significantly higher than that in the female ones，respectively（P＜0.01），and thecreatinine of themale cataract rats and themalemicrophthalmos cataract ratswere significantly lower then that in the female ones，respectively（P＜0.01）.Therewere no significantdifference in every group on hemorheology.Conclusions There were significant differences in some blood indexes between the congenital cataract rats and the normal rats.These datamay become useful reference for biomedical researcher in this field.

Congenital cataract；Rat；Routine blood counts；Blood biochemical parameters；Hemorheology

R319 R332

A

1671-7856（2014）03-0020-05

10.3969.j.issn.1671.7856.2014.003.005

南京總醫(yī)院基金（2011001）。

田小蕓（1965-），女，碩士，副主任技師，研究方向：醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育，tianxiaoyun838@sina.com。

惲?xí)r鋒（1965-），男，主任，博士，主任技師，研究方向：醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理。

2014-01-20

研究報(bào)告