IL－17和IL－22水平與2型糖尿病腎病關(guān)系的研究

沈紅艷，鄧演超，徐 湛，鹿 璐，梁 軍

IL－17和IL－22水平與2型糖尿病腎病關(guān)系的研究

沈紅艷1，鄧演超1，徐 湛1，鹿 璐1，梁 軍2＊

（1.徐州市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所，徐州市中心醫(yī)院，徐州市糖尿病研究所檢驗科，江蘇徐州221006；2.徐州市中心醫(yī)院內(nèi)分泌科，徐州市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所，徐州市糖尿病研究所，江蘇徐州221006）

目的研究2型糖尿病患者腎臟不同病變時期血清IL－17和IL－22水平，并分析糖尿病腎病患者IL－17和IL－22水平與腎功能關(guān)系。方法實驗包括60名伴有或不伴有腎臟損傷的2型糖尿病患者和20名正常對照者（NC），根據(jù)尿白蛋白肌酐比值（ACR），糖尿病患者分三組：無蛋白尿組（NA，n＝22）、微量白蛋白尿組（MA，n＝18）和腎病組（DN，n＝20）。常規(guī)方法檢測血清生化指標(biāo)和尿蛋白含量，ELISA方法檢測IL－17和IL－22水平。分析各組血清IL－17和IL－22水平差異，腎病組血清IL－17、IL－22水平與腎功能血清學(xué)指標(biāo)肌酐、尿素的關(guān)系。結(jié)果DN組IL－17和IL－22水平顯著高于MA組、NA組和CT組（P＜0.05和P＜0.01），差異有統(tǒng)計學(xué)意義；MA、NA和CT三組之間IL－17和IL－22差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。腎病組血清IL－17、IL－22水平與血清尿素、肌酐水平之間沒有發(fā)現(xiàn)相關(guān)性（P＞0.05）。結(jié)論在2型糖尿病腎病中血清IL－17和IL－22水平升高，IL－17和IL－22可能對糖尿病腎病的致病起促進(jìn)作用，但是它們并不能反映腎功能狀態(tài)。

白介素－17；白介素－22；糖尿病腎病

糖尿病腎?。―iabetic nephropathy，DN）是2型糖尿病并發(fā)癥的一個常見類型，是導(dǎo)致慢性腎病、終末腎病的原因之一。糖尿病腎病的發(fā)展是一個緩慢的過程，從早期可逆轉(zhuǎn)的的微量白蛋白尿，逐漸發(fā)展為大量蛋白尿、不可逆腎臟纖維化病變，最后可發(fā)展為終末期腎病。近年來，糖尿病腎病被認(rèn)為是一個炎癥參與的過程，它的發(fā)生與細(xì)胞因子介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)關(guān)系密切。白介素－17（interleukin 17，IL－17）和白介素－22（interleukin 22，IL－22）是Th17細(xì)胞和Th22細(xì)胞分泌的主要細(xì)胞因子，它們在多種炎癥性疾病中起重要作用，但是在2型糖尿病腎病中作用還不清楚。本文研究在糖尿病腎臟病變不同時期——微量白蛋白尿期和腎病期，患者血清IL－17、IL－22水平，并分析腎病期IL－17、IL－22水平與腎功能血清學(xué)指標(biāo)肌酐、尿素含量的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1一般資料選取2013年6月——2013年12月經(jīng)徐州市中心醫(yī)院確診的2型糖尿病患者60例，包括無白蛋白尿（NA）組（ACR＜30mg／g，ACR：尿白蛋白與肌酐比值）20例、微量白蛋白尿（MA）組（30mg／g＜ACR＜300mg／g）18例、腎?。―N）組（ACR＞300mg／g，尿蛋白定性試驗陽性）22例，同時選取20名健康體檢者作為正常對照（NC），上述受試者均無其他腎臟疾病、炎癥性或免疫性疾病。所有受試者簽署知情同意書，并經(jīng)徐州市中心醫(yī)院倫理委員會同意。各組基本指標(biāo)：采用HT－2000尿液化學(xué)分析儀進(jìn)行尿蛋白初篩試驗，奧林巴斯640生化分析儀檢測血清生化指標(biāo)（葡萄糖（GLU）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL－C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL－C）、尿素（U－rea）、肌酐（Cr））、糖化血紅蛋白（HbA1c）及尿微量白蛋白肌酐比值（ACR）（試劑來自上海華氏亞太生物），各組基本指標(biāo)見表1。

1.2IL－17和IL－22檢測采集受試者空腹全血5 ml，全血室溫凝固，1 000g離心5min，分離血清，－80℃保存。血清IL－17和IL－22檢測采用生物素鏈霉親和素系統(tǒng)標(biāo)記的雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗，人IL－17ELISA試劑盒和人IL－22ELISA試劑盒來自美國R＆D公司。按說明書要求把血清標(biāo)本和試劑恢復(fù)至室溫，按操作步驟進(jìn)行操作，最后用Authos 2010酶標(biāo)儀（奧地利）450nm波長測OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出IL－17和IL－22的含量。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法根據(jù)數(shù)據(jù)是否滿足正態(tài)性和方差齊性要求采用One－Way ANOVA或Kruskal－Wallis（Mann－Whitney兩兩比較）檢驗進(jìn)行組間差異性比較，用Pearson correlation進(jìn)行相關(guān)性分析，所有數(shù)據(jù)在SPSS16.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 腎病組、微量白蛋白尿組、無白蛋白尿組、正常對照組基本指標(biāo)

2 結(jié)果

2.1各組血清IL－17和IL－22水平腎病組（DN）、微量白蛋白尿（MA）組、無白蛋白尿（NA）組、正常對照（NC）組血清IL－17和IL－22水平見圖1，各組IL－17和IL－22水平Kruskal－Wallis分析，結(jié)果分別為：χ2＝10.948，P＝0.01和χ2＝20.687，P＜0.01，經(jīng)Mann－Whitney兩兩比較，DN組IL－17和IL－22水平顯著高于MA組、NA組和NC組（分別是P＜ 0.05和P＜0.01），差異有統(tǒng)計學(xué)意義；MA、NA和NC三組之間IL－17和IL－22差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2腎病組血清IL－17、IL－22水平與Urea、Cr關(guān)系

糖尿病腎病患者腎功能異常，血清學(xué)指標(biāo)主要表現(xiàn)為血Urea和Cr不同程度的升高，Pearson相關(guān)分析顯示：血清IL－17、IL－22水平與Urea、Cr之間沒有相關(guān)性（P＞0.05）見圖2。

圖1 各組血清IL－17和IL－22水平

圖2 腎病組血清IL－17和IL－22水平與Urea、Cr關(guān)系

3 討論

糖尿病腎病是終末期腎病常見原因，病理特征是腎小球結(jié)構(gòu)肥大，基底膜增厚，細(xì)胞外基質(zhì)積累，臨床上可表現(xiàn)在大量蛋白尿及腎功能障礙。近年來，炎癥學(xué)說在糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制中的作用備受關(guān)注，糖尿病腎病被認(rèn)為是一個炎癥過程，它的發(fā)生與細(xì)胞因子介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)關(guān)系密切［1］。研究發(fā)現(xiàn)，在糖尿病腎病的進(jìn)展過程中，常伴有大量淋巴細(xì)胞、DCs、單核細(xì)胞／巨噬細(xì)胞、浸潤［2］，在損傷部位，活化的浸潤細(xì)胞能合成和分泌一些炎癥性細(xì)胞因子及纖維化形成細(xì)胞因子，在損傷部位引起成纖維細(xì)胞生成，誘導(dǎo)小管上皮細(xì)胞表型轉(zhuǎn)變成間充質(zhì)樣表型，產(chǎn)生大量促纖維化胞外基質(zhì)形成，導(dǎo)致正常組織結(jié)構(gòu)和功能的丟失［3，4］。

IL－17和IL－22是Th17細(xì)胞和Th22細(xì)胞分泌的主要細(xì)胞因子，研究報道，它們在炎癥性疾病中起重要作用［5－7］。IL－17的促進(jìn)炎性反應(yīng)主要表現(xiàn)在，能夠廣泛地誘生出T細(xì)胞和單核細(xì)胞產(chǎn)生其他炎性細(xì)胞因子如IL－6、IL－8、IL－1β、TNF－α等［8］，并能促進(jìn)補(bǔ)體C3等急性期反應(yīng)蛋白的產(chǎn)生，誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)［9］。IL－22是IL－10細(xì)胞因子家族的一員，在動物和人類研究中證實，IL－22和IL－22R相互作用，可激活I(lǐng)FN－γ、IL－1β、TNF－α和IL－6基因表達(dá)，在炎癥性疾病中發(fā)揮作用［10］。另外，IL－22還與組織增生和重塑有關(guān)。在銀屑病和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎研究中發(fā)現(xiàn)IL－22能誘導(dǎo)人角蛋白細(xì)胞和成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞增生［11］；在哮喘的支氣管上皮細(xì)胞，IL－22可以促進(jìn)TGF－β1介導(dǎo)的上皮細(xì)胞－間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)換［12］。

我們實驗結(jié)果顯示，在糖尿病患者中，腎病組血清中IL－17和IL－22水平顯著高于微量白蛋白尿組、尿白蛋白正常組及正常對照組，而微量白蛋白尿組、尿白蛋白正常組及正常對照組之間IL－17和IL－22水平無顯著差異。這種現(xiàn)象說明，在糖尿病患者中，IL－17和IL－22水平不是在腎小球屏障功能輕度受損時升高，而是在腎小球屏障功能嚴(yán)重?fù)p傷時升高，提示IL－17和IL－22并不是腎臟損傷的始發(fā)因素，而是在糖尿病腎病的進(jìn)展過程中發(fā)揮作用。

血尿素和肌酐主要反應(yīng)腎臟的濾過功能，并且當(dāng)腎小球率過濾降低到正常50%以下時，血尿素和肌酐水平可出現(xiàn)增高，在腎功能衰竭時，血尿素和肌酐顯著升高。我們實驗結(jié)果顯示，糖尿病腎病期患者血清IL－17和IL－22水平與血尿素和肌酐含量沒有相關(guān)性，這說明，腎功能損傷還受其他因素作用的影響，血清IL－17和IL－22水平不能反應(yīng)腎功能狀況。

總之，我們數(shù)據(jù)顯示，2型糖尿病患者中，血清IL－17和IL－22水平在腎病期高于微量白蛋白尿期，IL－17和IL－22可能對糖尿病腎病的進(jìn)展起促進(jìn)作用，但I(xiàn)L－17和IL－22水平并不能反應(yīng)腎功能損傷狀況。在腎病的進(jìn)展過程中，IL－17和IL－22升高原因及其作用還需要進(jìn)一步研究。

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Correlation between levels of IL－17 and IL－22 and diabetic nephropathy in type 2 diabetes patients

SHEN Hong－yan，DENG Yan－chao，XU Zhan，et al.（1.Department of Clinical Laboratory，Xuzhou Institute of Medical Sciences，Xuzhou Central Hospital，Xuzhou Institute of Diabetes Mellitus；2.Department of Endocrinology，Xuzhou Central Hospital，Xuzhou Institute of Medical Sciences，Xuzhou Institute of Diabetes mellitus，Xu zhou 221006，China）

ObjectiveTo investigate serum levels of IL－17and IL－22in type 2diabetes patients with the different stages of kidney injury，and the relationship between levels of IL－17，IL－22and renal function in patients with diabetic nephropathy.MethodsSubjects included 60type 2diabetes patients with or without kidney injury and 20normal controls（NC）.Diabetes patients were divided into 3groups by level of urinary albumin to creatinine ratio（ACR）：no proteinuria group（NA，ACR＜30mg／g），microalbuminuria group（MA，30mg／g＞ACR＞300mg／g）and diabetic nephropathy group（DN，ACR＞300mg／g）.Routine biochemical methods were applied to detect serum biochemistry markers and urine albumin levels，ELISA was used to detect IL－17and IL－22levels.Analysis differences of IL－17and IL－22among NA MA，DN and NC groups and correlation between levels of IL－17，IL－22and urea，creatinine in DN group respectively.ResultsThe levels of IL－17and IL－22were significantly higher in DN group than that in MA，NA and NC group（P＜0.05and P＜0.01，respectively），However，there were not significant difference among MA，NA and NC group（P＞0.05）.No correlations Lied between serum level of IL－17，IL－22and urea，creatinine in DN group（P＞0.05）.ConclusionLevels IL－17and IL－22were increased in serum of type 2diabetes patients with nephropathy.IL－17and IL－22may play role in the pathogenicity of diabetic nephropathy，but they don’t reflect the status of renal function.

interleukin 17；interleukin 22；diabetic nephropathy（Chin J Lab Diagn，2014，18：1999）

R587.1

：A

沈紅艷（1976－），女，碩士，副主任技師，主要研究方向：分子免疫診斷。

2014－04－17）

1007－4287（2014）12－1999－04

徐州市中心醫(yī)院博士（碩士）創(chuàng)新團(tuán)隊科技項目（項目編號：XZS2012090）

＊通訊作者