TYK2、SOCS7基因在急性白血病患者中的表達(dá)及臨床意義

劉金梅，朱桂梅，付 嶺，張 濤，劉俊敏

TYK2、SOCS7基因在急性白血病患者中的表達(dá)及臨床意義

劉金梅1＊，朱桂梅1，付 嶺1，張 濤1，劉俊敏2

（1.開灤總醫(yī)院血液科，河北唐山063000；2.唐山市豐潤(rùn)縣中醫(yī)院）

目的探討TYK2、SOCS7基因在白血病中的表達(dá)及臨床意義。方法將入院患者分為急性白血病（AL）初治組、AL緩解組和正常對(duì)照（NC）組，采用RT－PCR方法檢測(cè)白血病和NC組骨髓單個(gè)核細(xì)胞中TYK2、SOCS7mRNA的表達(dá)，及與侵襲性真菌感染的相關(guān)性。結(jié)果TYK2在初治AL患者高表達(dá)，緩解后表達(dá)減低（P＜0.05），且陽性病人易患侵襲性真菌感染。SOCS7在初治AL患者低表達(dá)，緩解后表達(dá)升高（P＜0.05），SOCS7表達(dá)與侵襲性真菌感染呈負(fù)相關(guān)。TYK2＋組的緩解率為40%（12／30），明顯低于TYK2－組（100%，4／4），兩組之間有差異（χ2＝3.96，P＝0.047）。SOCS7＋組的緩解率為31%（10／33），明顯低于SOCS7－的緩解率為100%（1／1），兩組之間有差異（χ2＝6.032，P＝0.014）。初治TYK2＋比TYK2－易患侵襲性真菌感染（χ2＝4.073 P＝0.044）。SOCS7－比SOCS7＋組亦易患侵襲性真菌感染（χ2＝4.331 P＝0.037）。結(jié)論TYK2的高表達(dá)及SOCS7低表達(dá)可能在白血病的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，且與侵襲性真菌感染有相關(guān)性。

TYK2；SOCS7；白血?。活A(yù)后；侵襲性真菌感染

白血病是造血系統(tǒng)的惡性腫瘤，治療困難，復(fù)發(fā)率高，早期預(yù)測(cè)白血病化療療效及盡早治療侵襲性真菌感染對(duì)提高白血病的緩解率和延長(zhǎng)患者的生命具有重要的意義。許多細(xì)胞因子和多數(shù)造血生長(zhǎng)因子均通過JAK／（信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子與轉(zhuǎn)錄激活子）STAT途徑傳導(dǎo)信號(hào)。TYK2和其他JAKS是FGF－2驅(qū)動(dòng)的細(xì)胞生存的調(diào)節(jié)器，并且抑制這些激酶很可能提高治療癌癥的有效性［1］。細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子（SOCS）是一類與廣泛的細(xì)胞因子和生長(zhǎng)相關(guān)因子信號(hào)有關(guān)的負(fù)性調(diào)節(jié)蛋白家族，特別是通過Ja－nus激酶／信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子（JAK／STAT）通路的信號(hào)分子，作為成員之一的SOCS7是否參與白血病發(fā)病及侵襲性真菌感染的負(fù)調(diào)控未見有報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用RT－PCR研究白血病患者在初治、化療緩解后TYK2、SOCS7基因水平的變化及與侵襲性真菌感染的相關(guān)性，探討TYK2、SOCS7基因在白血病中的表達(dá)，以期對(duì)白血病發(fā)病機(jī)制及復(fù)發(fā)耐藥等作初步的研究。

1 資料與方法

1.1臨床資料

選擇2012年8月－2013年3月唐山開灤醫(yī)院住院的急性白血病患者62例（包括42例白血病和20例緩解患者），30名健康人作為正常對(duì)照組（normal control，NC）。經(jīng)過骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、組織化學(xué)、免疫表型、融合基因、染色體等檢查確診，均符合MIC診斷標(biāo)準(zhǔn)。AL患者62例，其中男33例，女29例，中位年齡為34歲（14－70歲）。正常對(duì)照30名，男16名，女14名，中位年齡為35歲（18－48歲）。

1.2方法

1.2.1 治療方法 對(duì)于初治AML患者采用標(biāo)準(zhǔn)DA化療方案（阿糖胞苷、柔紅霉素）誘導(dǎo)緩解。M3患者采用全反式維甲酸（ATRA）或ATRA與三氧化二砷（As2O3）合用或以ATRA為主，聯(lián)合應(yīng)用小劑量DA（阿糖胞苷、柔紅霉素）、HA（阿糖胞苷、高三尖杉酯堿）方案誘導(dǎo)分化治療，復(fù)發(fā)、難治的M3應(yīng)用三氧化二砷治療。對(duì)于ALL患者選用化療方案VITP（長(zhǎng)春新堿、異環(huán)磷酰胺、吡喃阿霉素、潑尼松）。

1.2.2 檢測(cè)方法 病例組及對(duì)照組均采集新鮮骨髓液4ml，以100U／ml的肝素抗凝（肝素：骨髓液＝1∶4）。用淋巴細(xì)胞分離液分離出骨髓單個(gè)核細(xì)胞（MNC）備用，取MNC（1×106）Trizol提取細(xì)胞總RNA。用紫外透射儀證明提取的RNA完整性，用紫外分光光度計(jì)上用同體積水校零后，讀取總RNA的OD206、OD280值，計(jì)算RNA濃度后定量。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系在37℃中反應(yīng)60min，95℃反應(yīng)5 min后終止反應(yīng)。引物由北京賽百盛有限公司合成，TYK2的擴(kuò)增片斷長(zhǎng)度367bp，SOCS7的擴(kuò)增片斷長(zhǎng)度493bp。TYK2的擴(kuò)增條件為：95℃變性45s，56℃退火45s，72℃延伸60s，35循環(huán)，最后72℃延伸10分鐘。SOCS7擴(kuò)增條件為：94℃變性45s，56℃退火60s，72℃延伸60s，35循環(huán)。最后72℃延伸10分鐘。β－actin的擴(kuò)增條件：95℃變性60s，55℃退火60s，72℃延伸60s，30個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10分鐘。PCR擴(kuò)增后產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳（含EB），在紫外燈下觀察結(jié)果，并在讀膠儀AlphaImager1200上進(jìn)行掃描，應(yīng)用分析軟件，將TYK2、SOCS7mRNA的平均吸光度值除以β－actinmRNA的平均吸光度值表示進(jìn)行半定量。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用多個(gè)樣本非參數(shù)秩和檢驗(yàn)分析TYK2、SOCS7mRNA在急性白血病初治組、緩解組患者與正常對(duì)照組中的表達(dá)水平有無顯著性差異；采用χ2檢驗(yàn)對(duì)比TYK2、SOCS7mRNA陽性組、陰性組化療緩解率及侵襲性真菌感染是否有顯著性差異；采用非參數(shù)相關(guān)分析。所有數(shù)據(jù)用SPSS13統(tǒng)計(jì)軟件分析處理，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1各組TYK2、SOCS7mRNA基因表達(dá)水平

見圖1、2。初治組的TYK2mRNA基因表達(dá)平均水平和陽性率顯著高于緩解組（P＜0.05），緩解組的TYK2mRNA基因表達(dá)平均水平和陽性率高于對(duì)照組（P＜0.05），具體結(jié)果見表1；初治組的SOCS7mRNA基因表達(dá)平均水平顯著低于緩解組（P＜0.05），緩解組的SOCS7mRNA基因表達(dá)平均水平低于對(duì)照組（P＜0.05），初治組的SOCS7mRNA基因表達(dá)陽性率顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），而緩解組和對(duì)照組的SOCS7mRNA基因表達(dá)陽性率的差異無顯著性（P＞0.05），具體結(jié)果見表2。

表1 各組TYK2mRNA基因表達(dá)水平的比較

表2 各組SOCS7基因表達(dá)水平的比較

2.2兩種基因與臨床療效和侵襲性真菌感染的相關(guān)性的關(guān)系

見表3。

表3 初治患者化療緩解率、侵襲性真菌感染率

2.3緩解20例緩解期患者中，12例TYK2陽性中5例出現(xiàn)侵襲性真菌感染，8例TYK2陰性病人中均未出現(xiàn)真菌感染，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞ 0.05）。緩解組17例SOCS7陽性中2例出現(xiàn)侵襲性真菌感染，3例SOCS7陰性病人均出現(xiàn)真菌感染，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

圖1 TYK2在急性白血病病人和正常人中的表達(dá)

圖2 SOCS7在急性白血病病人和正常人中的表達(dá)

3 討論

造血細(xì)胞增殖與分化通過許多可溶性肽由Janus激酶－轉(zhuǎn)錄信號(hào)傳導(dǎo)和活化因子（JAK－STAT）信號(hào)途徑來實(shí)現(xiàn)。JAKS在腫瘤發(fā)生和自身免疫性疾病中起重要作用［2］。Heuser等［3］研究表明STAT信號(hào)途徑在白血病干細(xì)胞的自我更新中起一定的作用，在獲得性免疫的形成過程中也起重要作用［4］。JAK為非受體酪氨酸蛋白激酶，分子量120－140 kDa，迄今在哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)有四種家族成員：JAK1、JAK2、JAK3和TYK2，TYK2在多種細(xì)胞中表達(dá)，且能被多種細(xì)胞因子激活TYK2缺失與高IGE綜合征也有關(guān)［5］。

我們研究顯示TYK2在急性白血病中表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組，在緩解后表達(dá)降低但仍高于正常對(duì)照組，提示白血病發(fā)生機(jī)制不僅與JAKs信號(hào)通路的組成、激活有關(guān)，同時(shí)可能還存在JAKs基因表達(dá)的異常增高。TYK2在白血病中高表達(dá)［6］。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)TYK2＋組的緩解率為40%（12／30），明顯低于TYK2－組（100%，4／4兩組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示TYK2與白血病病人預(yù)后有關(guān)，細(xì)胞耐藥是白血病病人復(fù)發(fā)及死亡的主要原因，直接關(guān)系預(yù)后，此基因可導(dǎo)致細(xì)胞耐藥從而影響預(yù)后。Catanina R［7］等發(fā)現(xiàn)TYK2高水平與惡性腫瘤細(xì)胞耐藥有關(guān)，我們需要進(jìn)一步做此方面的研究。

正常機(jī)體有天然滅活JAK－STAT機(jī)制，如SOCS家族，目前它在惡性腫瘤中的作用受到廣泛關(guān)注，但目前國內(nèi)多限于SOCS1－3的研究。SOCS3直接抑制JAK1，JAK2and TYK2［8］.我們發(fā)現(xiàn)SOCS7在正常人中表達(dá)最高，復(fù)發(fā)者最低，提示SOCS7為抑癌基因，抑制JAK／STAT激活。Walid［9］等也發(fā)現(xiàn)SOCS7在惡性腫瘤中隨惡性程度及分期增高，表達(dá)減少，且表達(dá)高的預(yù)后好。

目前對(duì)于JAKS及SOCS的研究多限于在惡性腫瘤及免疫性疾病中的發(fā)病機(jī)制及靶向藥物治療，對(duì)于與真菌感染的相關(guān)性尚無研究，我們發(fā)現(xiàn)初治組（42例病人中，其中26例TYK2及SOCS7均陽性）TYK2及SOCS7陽性患者均易患侵襲性真菌感染，可能是SOCS7隨TYK2升高而升高從而發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，緩解期病人，TYK2表達(dá)與真菌感染無相關(guān)性，與樣本數(shù)少有關(guān)，SOCS7陰性病人易患侵襲性真菌感染。但由于我們研究樣本少，未能行TYK2與SOCS7相關(guān)性研究，真菌感染亦與化療后細(xì)胞低有關(guān)，在緩解期病人我們亦應(yīng)擴(kuò)大樣本量，對(duì)于大劑量化療后病人列為獨(dú)立研究對(duì)象。

本實(shí)驗(yàn)對(duì)AL治療前后病人TYK2及SOCS7基因表達(dá)及與侵襲性真菌感染的相關(guān)性進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示JAK－STAT通道的激活在急性白血病的發(fā)生發(fā)展中的作用且與細(xì)胞耐藥及侵襲性真菌有關(guān)。SOCS7為JAK－STAT信號(hào)傳導(dǎo)途徑的抑制因子，對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑及其抑制因子的研究為尋找AL的發(fā)生、發(fā)展及靶向治療提供了方向?qū)︻A(yù)后評(píng)估也有一定的實(shí)際意義，且可提前預(yù)知侵襲性真菌易感基因，在移植選擇供者和采取針對(duì)性的個(gè)體防治措施上有重要意義［10］。

［1］Carmo CR，Lyons－Lewis J，Seckl MJ，et al.A Novel Requirement for Janus Kinases as Mediators of Drug Resistance Induced by Fibroblast Growth Factor－2in Human Cancer Cells［J］.PLoS One，2011，6（5）：e19861.

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The Expression and Clinical significance of TYK2 and SOCS7 in Leukemia Patients

LIU Jin－mei，ZHU Gui－mei，F(xiàn)U Ling，et al.（Affiliated Kailuan General Hospital，Tangshan063000，China）

ObjectiveTo investigate the expression levels and the clinical significance of TYK2，SCOS7.MethodsThe enrolled subjects were divided into three groups including the de novo AL group，thecomplete remission（CR）group，and the normal control（NC）group（comprised by healthy volunteers）.semi－quantity reverse transcription polymerase chain reaction（RT－PCR）was applied groups，And was correlation with invasive fungal infections.ResultsTYK2mRNA expression was significantly higher in the de novo AL group than that in the CR group（P＜0.05），and higher in the CR group than that in the NC group（P＜0.05），The fequency of invasive fungal infections in TYK2＋patients was higher than that in TYK2－patients.SOCS7expression was lower in the de novo AL group than that in the CR group（P＜0.05）and lower in the CR group than that in the NC group（P＜0.05），SOCS7expression was negatively correlated with invasive fungal infections.The CR rate of TYK2negative is 100%，and 40%in positive patients.the CR rate of TYK2negative patients was significant higher than in positive patients（χ2＝3.96，P＝0.047）.The CR rate of SOCS7negative patients is 84%，and the CR rate of SOCS7positive patients is 31%.The CR rate of SOCS7negative patients was significant higher than in positive patients（χ2＝6.032，P＝0.014），TYK2positve de novo AL patients was more susceptible to have invasive fungal infection（χ2＝4.073，P＝4.073），SOCS7negtive AL patients was more susceptible to have invasive fungal infection（χ2＝4.331，P＝4.331）.ConclusionHigher TYK2expression and lower SOCS7expression may have played important roles in the pathogenesisand development of acute leukemia，And was correlation with invasive fungal infections

TYK2；SOCS7；Leukaemia；Prognosis Invasive fungal infection（Chin J Lab Diagn，2014，18：1966）

R551.3

：A

劉金梅（1978－），女，主治醫(yī)師，碩士學(xué)歷，研究方向：臨床血液學(xué)。

2014－02－15）

1007－4287（2014）12－1966－04

＊通訊作者