尿毒癥患者群體反應(yīng)性抗體的種類(lèi)與頻率

婁小燕，梁 艷，王 皓，仲人前

尿毒癥患者群體反應(yīng)性抗體的種類(lèi)與頻率

婁小燕，梁 艷，王 皓，仲人前＊

（第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)征醫(yī)院實(shí)驗(yàn)診斷科，上海200003）

目的研究尿毒癥患者群體反應(yīng)性抗體（PRA）的種類(lèi)與頻率。方法分析2008－2013年本院門(mén)診及住院的2727例尿毒癥患者PRA檢測(cè)結(jié)果，血清樣本以ELISA方法檢測(cè)HLA I類(lèi)、Ⅱ類(lèi)混合抗原板。將檢測(cè)結(jié)果分為陰性組（PRA＜10%）和陽(yáng)性組（PRA≥10%），采用SPSS21.0軟件分析不同性別、年齡組患者PRA陽(yáng)性率的差異。結(jié)果2727例患者中，PRA陽(yáng)性組366例，PRA陰性組2361例，陽(yáng)性率13.4%。其中，男性1840例，陽(yáng)性率為10.1%（186／1840），女性887例，陽(yáng)性率為20.3%（180／887），男女陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝53.42，P＜0.01）；各年齡組陽(yáng)性率比較，結(jié)果顯示少年組為4.8%（4／83），青年組為10.0%（85／854），中年組為16.1%（268／1660），老年組為6.9%（9／130），各年齡組的陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝29.44，P＜0.01）。ELISA方法能檢出HLA－A、B、CW、DR、DQ位點(diǎn)特異性抗體20種、27種、5種、13種和7種。各位點(diǎn)出現(xiàn)頻率較高的抗體種類(lèi)分別是A2、A25、A23、A24、A66；B7、B13、B57、B44、B60；CW4、CW 6、CW 10、CW 7、CW8；DR11、DR1、DR7、DR9、DR12；DQ6、DQ5、DQ7、DQ8、DQ2，頻率分布與中國(guó)人群HLA抗原頻率分布不盡一致。結(jié)論尿毒癥患者PRA陽(yáng)性率女性顯著高于男性，不同年齡組陽(yáng)性率也有顯著差異，以少年組最低，中年組最高。針對(duì)不同等位基因的HLA抗體產(chǎn)生頻率不同。

群體反應(yīng)性抗體；尿毒癥；腎移植；HLA

（Chin J Lab Diagn，2014，18：1929）

群體反應(yīng)性抗體（panel reactive antibody， PRA）是指器官移植受者血清中的抗HLA抗體，用于判斷腎移植受者的免疫狀態(tài)和致敏程度。PRA可介導(dǎo)體液免疫，引起排斥反應(yīng)，對(duì)移植腎的存活率具有重要意義。腎移植術(shù)前檢測(cè)受者體內(nèi)預(yù)存的群體反應(yīng)性抗體水平可識(shí)別致敏患者，指導(dǎo)供受體HLA配型以避開(kāi)供者特異性抗原，提高腎移植手術(shù)的成功率和移植腎的長(zhǎng)期存活率。腎移植術(shù)后定期監(jiān)測(cè)群體反應(yīng)性抗體可以及時(shí)了解術(shù)后患者的免疫狀態(tài)，發(fā)現(xiàn)PRA值的升高可以預(yù)測(cè)和輔助診斷移植腎的排斥反應(yīng)、功能延遲，提示臨床盡早地采取抗排斥治療措施，以延長(zhǎng)移植腎的存活時(shí)間。本研究回顧性的分析了2008年至2013年長(zhǎng)征醫(yī)院2727例尿毒癥患者的群體反應(yīng)性抗體水平，比較不同性別組和年齡組之間陽(yáng)性率的差異，以及抗HLAI類(lèi)、Ⅱ類(lèi)抗體的種類(lèi)和頻率。

1 對(duì)象與方法

1.1對(duì)象連續(xù)納入2008年至2013年長(zhǎng)征醫(yī)院門(mén)診及住院的2727例尿毒癥患者，采集靜脈血3 ml，分離血清。其中男1840例，女887例，平均年齡41±12歲。

1.2PRA檢測(cè)采用美國(guó)萊姆德公司LATM混合抗原板定性篩選血清中的HLA－IgG抗體，對(duì)篩選結(jié)果陽(yáng)性樣本采用萊姆德公司LAT1240Ⅰ類(lèi)、Ⅱ類(lèi)混合抗原板定量檢測(cè)抗體陽(yáng)性率及其特異性位點(diǎn)。LAT1240板包被21種HLA－A抗原，42種B抗原，15種CW抗原，18種DR抗原，7種DQ抗原，Bio－Tek ELx 800NB型酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)630nm下讀取結(jié)果，以萊姆德公司PRA軟件分析陽(yáng)性率及抗體位點(diǎn)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理以PRA≥10%判斷為陽(yáng)性，PRA＜10%判斷為PRA陰性。用SPSS21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)表示，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1不同性別組PRA陽(yáng)性率的比較2727例患者中，男性1840例，陽(yáng)性186例，陽(yáng)性率為10.1%，女性887例，陽(yáng)性180例，陽(yáng)性率為20.3%，男女陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝53.42，P＜0.01）。

2.2不同年齡組PRA陽(yáng)性率的比較4－18歲為少年組，83例；19－35歲為青年組，854例；36－60歲為中年組，1660例；61－87歲為老年組，130例。少年組陽(yáng)性率為4.8%（4／83），青年組陽(yáng)性率為10.0%（85／854），中年組陽(yáng)性率為16.1%（268／1660），老年組陽(yáng)性率為6.9%（9／130），各年齡組的陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝29.44，P＜0.01），以少年組最低，中年組最高。

2.3PRA抗體類(lèi)型及致敏程度分析366例陽(yáng)性患者中，Ⅰ類(lèi)抗體陽(yáng)性163例，占44.5%（163／ 366）；Ⅱ類(lèi)抗體陽(yáng)性89例，占24.3%（89／366），Ⅰ類(lèi)抗體、Ⅱ類(lèi)抗體均陽(yáng)性114例，占31.1%（114／366）。

按致敏程度分類(lèi)：PRA＞0的致敏患者435例，PRA＜10%為輕度致敏，占15.9%（69／435）；10%－50%為中度致敏，占60.9%（265／435）；＞50%為高度致敏，占23.2%（101／435）。

2.4特異性抗體的種類(lèi)和頻率298例能分析出Ⅰ類(lèi)抗體的特異性位點(diǎn)，抗體種類(lèi)包括HLA－A抗體20種，HLA－B抗體27種，HLA－CW抗體5種；179例能分析出Ⅱ類(lèi)抗體的特異性位點(diǎn)，包括HLA－DR抗體13種，HLA－DQ抗體7種。Ⅰ類(lèi)、Ⅱ類(lèi)抗體頻率分別見(jiàn)表1、2。

表1 HLA－I類(lèi)特異性抗體頻率（n＝198）

表2 HLA－Ⅱ類(lèi)特異性抗體頻率（n＝179）

3 討論

PRA是腎移植配型中最重要的檢測(cè)項(xiàng)目之一，ELISA方法因其具有較高的敏感性成為檢測(cè)腎移植受者體內(nèi)抗HLA抗體的經(jīng)典方法［1，2］。導(dǎo)致PRA產(chǎn)生的因素之中，器官移植是最主要原因，其次是反復(fù)輸血、妊娠和感染。如果在同一患者體內(nèi)，幾種致敏因素同時(shí)作用，會(huì)導(dǎo)致致敏程度嚴(yán)重以及持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)［3］。在一些未曾經(jīng)歷過(guò)輸血，妊娠，或者器官移植的患者體內(nèi)也可能存在抗HLA抗體，這可能是由于IgM類(lèi)抗體引起的交叉反應(yīng)［4］。

女性患者的PRA陽(yáng)性率顯著高于男性，可能是由于懷孕這一過(guò)程增加了接觸外來(lái)抗原的機(jī)會(huì)，這與Lieber和Hyun的研究結(jié)果一致［5，6］。不同年齡組PRA陽(yáng)性率比較中，少年組最低，中年組最高的結(jié)果與賈保祥［7］的研究結(jié)果相符。少年組患者由于接受器官移植、輸血、妊娠和感染的機(jī)會(huì)較少，故接受同種異體抗原刺激的機(jī)會(huì)較少，從而陽(yáng)性率最低。中年組中相當(dāng)一部分是腎移植術(shù)后患者，再加上輸血、妊娠和感染等因素的共同作用，致使其陽(yáng)性率最高。

PRA抗體的存在對(duì)腎移植預(yù)后的影響報(bào)道不一。Huber［8］的研究表明術(shù)前PRA高致敏組相對(duì)于中低致敏組有更高的排斥率，高中致敏組相對(duì)于低致敏組更易發(fā)生移植物功能延遲。分別于術(shù)后1年、3年、5年測(cè)定腎小球?yàn)V過(guò)率發(fā)現(xiàn)，高致敏組低于中低致敏組。致敏組患者相對(duì)于非致敏患者更易發(fā)生移植物失功，但是在移植物存活時(shí)間上無(wú)差異。Meng［9］等對(duì)73例術(shù)前PRA陽(yáng)性腎移植患者和81例PRA陰性患者的術(shù)后2年腎存活率及腎功能情況做了比較，發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性患者的腎存活率及腎功能明顯低于PRA陰性患者，且術(shù)前抗HLA－I、Ⅱ類(lèi)抗體同時(shí)陽(yáng)性的患者移植腎存活率更低，Süsal C［10］也得出類(lèi)似結(jié)論。術(shù)前PRA陽(yáng)性患者移植的風(fēng)險(xiǎn)增加已得到臨床的廣泛認(rèn)可，但對(duì)于PRA＜10%的低致敏患者也應(yīng)引起充分重視，本研究的69例低致敏患者均有Ⅰ類(lèi)、Ⅱ類(lèi)抗體的特異性位點(diǎn)，有些特異性抗體的種類(lèi)如B13、B46、DR9、DR12，其HLA抗原在中國(guó)人群中出現(xiàn)頻率非常高，故避開(kāi)這些HLA抗原有一定困難，需要謹(jǐn)慎地選擇供腎者。

術(shù)后動(dòng)態(tài)檢測(cè)PRA同樣具有重要意義，抗體的出現(xiàn)早于腎臟的實(shí)質(zhì)性損害和肌酐的升高，故可發(fā)現(xiàn)早期排異反應(yīng)，提示臨床盡早地采取抗排斥治療措施，以延長(zhǎng)移植腎的存活時(shí)間。Ⅰ類(lèi)抗原存在于所有有核細(xì)胞表面，包括腎小管內(nèi)皮細(xì)胞，Ⅰ類(lèi)IgG抗體可直接損傷腎小管內(nèi)皮細(xì)胞，造成超急性排斥反應(yīng)；HLA－Ⅱ類(lèi)原僅表達(dá)于專(zhuān)職抗原遞呈細(xì)胞（B細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，樹(shù)突狀細(xì)胞）以及活化的T細(xì)胞和胸腺上皮細(xì)胞等表面，Ⅱ類(lèi)抗體與慢性移植腎腎病相關(guān)［11］。HLA－Ⅰ類(lèi)和HLA－Ⅱ類(lèi)抗體同時(shí)存在對(duì)移植腎有協(xié)同破壞作用，移植腎生存率最低。但Süsal C［10］提示如果提高此類(lèi)患者的HLA配合率（0－1抗原錯(cuò)配）則不會(huì)對(duì)移植腎生存率產(chǎn)生影響。

本研究總結(jié)的抗體種類(lèi)和頻率與以往的報(bào)道［12－14］不盡一致，這可能與樣本例數(shù)以及中國(guó)人群各地區(qū)之間HLA基因多態(tài)性和單倍型分布不同有關(guān)。某些HLA抗原與致敏狀態(tài)的關(guān)系較為密切，而某些HLA抗原卻相對(duì)不易產(chǎn)生特異性抗體［12］，如HLA抗原高頻位點(diǎn)A2、A24、B13、B60、DR9，其抗體頻率也很高，而高頻位點(diǎn)A11、B46、DR4、DR15，其抗體頻率卻很低。Fuller［15］也曾報(bào)道HLA－DR表位會(huì)影響所產(chǎn)生的Ⅰ類(lèi)、Ⅱ類(lèi)抗體的類(lèi)型。當(dāng)陽(yáng)性率大于50%時(shí)，由于交叉反應(yīng)廣泛，許多無(wú)法分析出抗體的特異性位點(diǎn)，得到的是抗體的大類(lèi)，如BW4（28例）、BW6（33例）、DR52（34例）、DR53（47例），這種抗體覆蓋面廣，是移植手術(shù)的禁忌。

綜上所述，術(shù)前及術(shù)后的PRA監(jiān)測(cè)對(duì)于腎移植患者具有重大的臨床意義。明確尿毒癥患者常見(jiàn)、頻發(fā)的抗HLA抗體，有助于在腎移植配型時(shí)有選擇性地避開(kāi)相應(yīng)HLA抗原，提高腎移植手術(shù)的成功率。術(shù)后動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)PRA有利于早期發(fā)現(xiàn)排異反應(yīng)，盡早地采取抗排斥治療措施，以延長(zhǎng)移植腎的存活時(shí)間。

［1］Kao KJ，Scornik JC，Small SJ.Enzyme－linked immunoassay for anti－HLA antibodies－an alternative to panel studies by lymphocytotoxicity［J］.Transplantation，1993，55：192.

［2］Buelow R，Chiang TR，Monteiro F，et al.Soluble HLA antigens and ELISA－a new technology for crossmatch testing［J］.Transplantation，1995，60：1594.

［3］Vaidya S.Synthesis of new and memory HLA antibodies from acute and chronic rejections versus pregnancies and blood transfusions［J］.Transplant Proc，2005，37：648.

［4］Ali H Hajeer.Panel Reactive Antibody test（PRA）in renal transplantation［J］.Saudi J Kidney Dis Transplant，2006，17（1）：1.

［5］Lieber SR，Perez FVT，Tabossi MR，et al.Effect of panel reactive antibody in predicting crossmatch selection of cadaveric kidney recipients［J］.Transplant Proc，2007，39：429.

［6］Hyun J，Park KD，Yoo Y，et al.Effects of different sensitization events on HLA alloimmunization in solid organ transplantation patients［J］.Transplant Proc，2012，44（1）：222.

［7］賈保祥，武俊杰，孫立寧，等.高、中、低齡腎移植患者術(shù)前抗HLA抗體產(chǎn)生的頻率比較［J］.中華微生物和免疫學(xué)雜志，2010，30（1）：80.

［8］Huber L，Niemann M，Lachmann N，et al.Pretransplant PRA and Long－Term Outcomes of Kidney Transplant Recipients［J］.Transplantation，2012，94（10s）：1619.

［9］Meng HL，Jin XB，Li XT，et al.Impact of human leukocyte antigen matching and recipients panel reactive antibodies on two－year outcome in presensitized renal allo－graft recipients［J］.Chin Med J（Engl）2009，122：420.

［10］Süsal C，D？hler B，Opelz G.Presensitized kidney graft recipients with HLA class I and II antibodies are at increased risk for graft failure：a Collaborative Transplant Study report［J］.Hum Immunol，2009，70（8）：569.

［11］Gerbase－DeLima M，Campos EF，Tedesco－Silva H，et al.Anti－HLA class II antibodies and chronic allograft nephropathy［J］.Clin Transpl，2006：201.

［12］傅 茜，王長(zhǎng)希，曾文濤，等.腎移植受者術(shù)前HLA特異性抗體篩查（附3500例報(bào)告）［J］.中國(guó)免疫學(xué)雜志，2009，2：143.

［13］賈保祥，張玉海，田 野，等.腎移植術(shù)前群體反應(yīng)性抗體分布和性質(zhì)［J］.中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志，2000，20（6）：556.

［14］曾文濤，傅 茜，劉龍山，等.尿毒癥患者體內(nèi)預(yù)存抗HLA抗體特點(diǎn)及致敏因素分析［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2010，20（8）：1973.

［15］Fuller TC，F(xiàn)uller A.The humoral immune response against an HLA class I allodeterminant correlates with the HLA－DR phenotype of the responder［J］.Transplantation，2009，68：173.

The Type and Frequency of Panel Reactive Antibody in Uremic Patients

LOU Xiao－yan，LIANG Yan，WANG Hao，et al.（Department of Laboratory Diagnostics，Changzheng Hospital，Second Military Medical University，Shanghai 200003，China）

ObjectiveTo investigate the type and frequency of panel reactive antibody in uremic patients.MethodsPanel reactive antibody of anti－HLA－I，II in serum were detected using ELISA method，and the PRA results from a total of 2727uremic patients from 2008to 2013were analyzed.According to the test results of panel reactive antibody，the cases were divided into PRA－negative group（PRA＜10%）and PRA－positive group（PRA≥10%）.The difference of PRA positive rate of different age，gender was analyzed by SPSS21.0software；and the type and frequency of panel reactive antibody of anti－HLA－I andⅡwere also observed.ResultsOf the 2727patients，2361cases were PRA－negative and 366cases were PRA－positive.The positive rates of male and female cases were 10.1%and 20.3%respectively，with statistical significance.（χ2＝53.42，P＜0.01）.The positive rate of PRA in juvenile group，young group，middle age group and old group was 4.8%，10.0%，16.1%and 6.9%，respectively.The difference of that was statistically significant（χ2＝29.44，P＜0.01）.Furthermore，multiple types of specific antibodies against HLA－A（20），B（27），CW（5），DR（13）and DQ（7）were determined by ELISA method.Some types of the antibodies presented higher frequencies，such as anti－HLA－A2，A25，A23，A24and A66；B7，B13，B57，B44and B60；CW4，CW 6，CW 10，CW 7and CW8；DR11，DR1，DR7，DR9and DR12；DQ6，DQ5，DQ7，DQ8and DQ2.The frequency of antibody was somewhat different from that of HLA antigen.ConclusionThe positive rate of PRA was higher in female than that in male.The difference of positive rate of all ages’patients was statistically significant，the juvenile group was the lowest and middle age group was the highest.These high frequencies of anti－HLA－I，II antibodies were somewhat different from the distribution of HLA antigens in Chinese population.

panel reactive antibody；toxuria；kidney transplant；HLA

R692

：A

2014－04－11）

1007－4287（2014）12－1929－04

國(guó)家自然科學(xué)基金（81072479和81102262）國(guó)家973計(jì)劃（2013CB531603）

＊通訊作者