薰衣草提取物對小鼠H22移植瘤的抑制作用

宋曉琳，彭瀛，沈明花

（延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院，吉林延吉133000）

薰衣草（Lavender angustifolia）為唇形花科薰衣草屬多年生常綠亞灌木，因氣味芳香，常用作芳香劑、驅(qū)蟲劑及配制香精的原料。研究表明它具有抗氧化[1]、抗真菌[2]、抗炎止痛[3]、保肝[4]、抗焦慮[5]等功效，并有鎮(zhèn)靜作用，對老年性癡呆有治療效果[6]。但是，對腫瘤方面的研究很少。我們曾研究薰衣草的體外抗腫瘤作用，發(fā)現(xiàn)薰衣草提取物對A549、SMMC7721細(xì)胞體外抗增殖作用[7]。在此基礎(chǔ)上本文進(jìn)一步研究薰衣草對移植性實體瘤H22的抑制作用，并初步探討其抗腫瘤機(jī)制。

1 材料與試劑

1.1 樣品的制備

熏衣草購置韓國相洙香草企業(yè)。稱取100 g粉碎后的熏衣草中加入80%乙醇溶液500 ml，浸泡72 h后將上清液過濾，殘渣重復(fù)以上操作一次。合并兩次所得萃取，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，將濃縮液冷凍干燥制得熏衣草乙醇提取物樣品。

1.2 實驗動物

昆明種雄性小鼠，體重為18 g～22 g。

1.3 試劑

蛋白質(zhì)測定試劑盒購于南京建成科技有限公司，TNF－α、IL－6和VEGF試劑盒購于北京博雅祥達(dá)科貿(mào)有限責(zé)任公司。

1.4 瘤株

小鼠肝癌H22瘤株，由本校預(yù)防醫(yī)學(xué)教研室提供。

2 方法

2.1 實驗分組及模型制備

將60只小鼠按體重隨機(jī)分為六組，設(shè)正常組、模型組、環(huán)磷酰胺組、薰衣草低、中、高劑量組（50、100、200 mg/kg）。無菌條件下抽取傳代7 d的H22荷瘤小鼠腹水，臺酚藍(lán)染色后光鏡下觀察活瘤細(xì)胞數(shù)，選取活細(xì)胞數(shù)大于95%的進(jìn)行動物實驗。腹水用生理鹽水稀釋，調(diào)整細(xì)胞濃度為5×105個/mL。常規(guī)皮膚消毒后，除正常組外，每只小鼠的右前肢腋部皮下接種0.2 mL瘤液。接種次日起，用藥組每日灌胃1次，連續(xù)10 d，給藥劑量分別為50、100、200 mg/kg體質(zhì)量；陽性對照組以20 mg/kg體質(zhì)量隔日腹腔注射環(huán)磷酰胺；正常組和模型組每日灌胃等容積0.9%氯化鈉溶液。

2.2 抑瘤實驗

末次給藥后次日稱取小鼠體重，摘眼球取血，脫椎處死小鼠。剝離腫瘤組織，精密稱定重量。按下列公式計算抑瘤率。抑瘤率（%）=（模型組平均瘤重－用藥組平均瘤重）/模型組平均瘤重×100%。

2.3 臟器指數(shù)分析

處死動物，剖取胸腺和脾臟，按下式計算臟器指數(shù)：臟器指數(shù)（mg/g）=臟器重量/體重

2.4 白細(xì)胞數(shù)的測定

每只小鼠取血20 μL，加入180 μL的白細(xì)胞計數(shù)液，混勻，計白細(xì)胞數(shù)。

2.5 血清白蛋白、TNF－α、IL－6和VEGF的測定

眼球取血后以2 500 r/min，離心15 min，分離出血清。按試劑盒說明書進(jìn)行操作。

2.6 統(tǒng)計學(xué)處理

用SPSS統(tǒng)計軟件處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x，s）表示，組間均數(shù)比較行單因素方差分析。

3 結(jié)果

3.1 薰衣草對荷瘤小鼠的抑瘤作用

如表1所示，環(huán)磷酰胺和薰衣草中劑量組明顯抑制腫瘤的生長；各劑量用藥組與環(huán)磷酰胺組相比，體重明顯增加。陽性對照組雖然腫瘤的抑制作用顯著，但同時伴有動物體重的下降。

表1 薰衣草對體重及瘤重的影響Table 1 Effect of Lavender angustifolia on the body weight and tomor weight

3.2 薰衣草對白細(xì)胞數(shù)及免疫器官的影響

如表2所示，環(huán)磷酰胺組胸腺指數(shù)和白細(xì)胞數(shù)顯著降低（P＜0.01），而薰衣草用藥組明顯提高胸腺指數(shù)和白細(xì)胞數(shù)。

表2 薰衣草對H22荷瘤小鼠免疫器官及白細(xì)胞的影響Table 2 Effect of Lavender angustifolia on the WBC，thymus and spleen indexes

3.3 薰衣草對細(xì)胞因子的影響

模型組和環(huán)磷酰胺組白蛋白水平下降明顯，薰衣草高劑量組可提高白蛋白水平。中、低劑量用藥組上調(diào)TNF-α和IL-6水平，而對白蛋白含量的影響不明顯。高、中劑量用藥組顯著下調(diào)VEGF水平。在所用實驗濃度范圍內(nèi)環(huán)磷酰胺對3種細(xì)胞因子的作用不明顯，結(jié)果見表3。

表3 薰衣草對荷瘤小鼠血清白蛋白和細(xì)胞因子的影響Table 3 Effect of Lavender angustifolia on serum albumin and cytokines in mice

4 討論

實驗結(jié)果顯示環(huán)磷酰胺和薰衣草不同程度地抑制實體瘤的生長。本實驗所設(shè)的劑量范圍內(nèi)薰衣草的最大抑瘤率為42.6%，不如環(huán)磷酰胺的抑瘤率高（85.7%），但無環(huán)磷酰胺組小鼠的體重減輕、白細(xì)胞數(shù)和胸腺指數(shù)下降等明顯的副反應(yīng)。模型組小鼠白蛋白水平明顯下降，而薰衣草高劑量組白蛋白水平升高，與模型組相比有顯著性差異。這些結(jié)果可以說明，在本實驗條件下薰衣草無明顯副作用。

免疫功能的衰退或失調(diào)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。大量研究表明，多種細(xì)胞因子影響免疫功能。本實驗中我們觀察了用藥后血清TNF-α和IL-6水平的變化。實驗結(jié)果表明，薰衣草中、低劑量組提高血清TNF-α、IL-6水平。中草藥的抗腫瘤作用機(jī)理除了直接殺傷腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用以外，還通過促進(jìn)宿主的免疫反應(yīng)而間接發(fā)揮作用。有些中藥成分的抗腫瘤作用與它的免疫調(diào)節(jié)功能有關(guān)。如，克癌新能升高細(xì)胞因子IL-2、IL-6 IL-12和TNF-α水平，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖[8]。也有研究報道，IL-6抑制人乳腺癌細(xì)胞（MCF-7）的增生，并具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用[9]。由此可推斷，薰衣草通過誘生TNF-α、IL-6等細(xì)胞因子，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的壞死或凋亡而達(dá)到抗腫瘤效果。

血管生成是腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的必要條件之一。因此，抑制腫瘤區(qū)血管的生成能顯著地抑制腫瘤的生長。VEGF是促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)激活、增殖，促進(jìn)血管形成的最主要的調(diào)控因子。大量研究表明，VEGF在腫瘤組織中大量表達(dá)，而正常組織極少表達(dá)。本實驗中我們觀察了血清VEGF水平。結(jié)果顯示，薰衣草高、中劑量組小鼠血清VEGF水平顯著低于模型組，這就提示薰衣草通過抑制或減少腫瘤組織新生血管的生成而起到抗腫瘤作用。

在本實驗中環(huán)磷酰胺對上述3種細(xì)胞因子的影響不明顯，這可能與我們所用的環(huán)磷酰胺的劑量、用藥次數(shù)（本實驗中隔日注射）以及實驗周期有關(guān)。另外，本實驗中沒有觀察到薰衣草的量效關(guān)系，產(chǎn)生這一現(xiàn)象的原因有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，薰衣草對移植瘤有較好的抑制作用，其作用機(jī)制可能是調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能或下調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子水平有關(guān)。

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[5]Bradley B F,Starkey N J,Brown S L,et al.Anxiolytic effects of Lavandula angustifolia odour on the Mongolian gerbil elevated plus maze[J].Journal of ethnopharmacolog,2007,111(3):517-525

[6]Lin P W,Chan W C,Ng B F,et al.Efficacy of aromatherapy(Lavandula angustifolia）as an intervention for agitated behaviours in Chinese older persons with dementia：a cross-over randomized trial[J].International journal of geriatric psychiatry,2007,22(5):405-410

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