HIV/HBV/HCV共感染者CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的對(duì)比分析

陳尚良 李嘉琪 李結(jié)敏 余文潮 盧少芬 羅懷雪 肖素柳

1.廣東省肇慶市中心血站，廣東肇慶 526020；2.廣東省陽春監(jiān)獄醫(yī)院，廣東陽春 529600

HIV/HBV/HCV共感染者CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的對(duì)比分析

陳尚良1李嘉琪2李結(jié)敏1余文潮1盧少芬1羅懷雪1肖素柳2

1.廣東省肇慶市中心血站，廣東肇慶 526020；2.廣東省陽春監(jiān)獄醫(yī)院，廣東陽春 529600

目的 研究HIV/HBV/HCV共感染者外周血CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)變化，探討共感染對(duì)HIV感染進(jìn)程及患者機(jī)體免疫功能的影響。 方法 對(duì)75例HIV共感染樣本進(jìn)行外周血CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)測(cè)定并進(jìn)行分析。 結(jié)果4組的CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；4組的CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及CD4+/CD8+比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論 共感染會(huì)影響患者外周血CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及CD4+/CD8+比值，HIV/HBV/ HCV三重感染患者的CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)較其他組高。

HIV；HBV；HCV；共感染；CD4；CD8

艾滋病是一種嚴(yán)重危害人類健康的傳染病，目前該病已波及全球200多個(gè)國家和地區(qū)，感染者總數(shù)已超6000萬，主要傳播途徑包括性接觸、輸血、不潔注射等。HIV病毒進(jìn)入人體后，主要攻擊的靶標(biāo)為CD4+T淋巴細(xì)胞。CD4+T淋巴細(xì)胞的快速下降可迅速導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞免疫功能缺陷，同時(shí)會(huì)對(duì)CD8等亞群T淋巴細(xì)胞造成不同程度損害，導(dǎo)致嚴(yán)重的機(jī)會(huì)感染及惡性腫瘤的發(fā)生，最終使HIV感染者死亡。有文獻(xiàn)研究表明，HIV感染者經(jīng)常合并其他病原體感染，尤其與肝炎病毒共感染，但共感染的后果并非一致[1]。HBV或HCV共感染可增加HIV感染者的死亡率，GBV-C病毒血癥對(duì)HIV感染有積極的作用[2]，可以延緩HIV感染的疾病進(jìn)程，但可以確定，HIV共感染疾病進(jìn)程與人體免疫狀態(tài)緊密相連，故測(cè)定HIV感染者外周血CD4+、 CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)，在一定程度上可以判斷其進(jìn)程與預(yù)后。本研究測(cè)定不同共感染模式HIV感染者的CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)，探討共感染對(duì)HIV感染進(jìn)程以及患者機(jī)體免疫功能的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取廣東省某監(jiān)獄在押人員為研究對(duì)象，均為男性，年齡20～48歲，共獲取76份HIV感染者的樣本，其中1例樣本量不足，無法進(jìn)行外周血T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)，最終75份樣本納入研究，根據(jù)HIV共感染檢測(cè)結(jié)果，將其分為4組，A組為HIV感染，B組為HIV/ HBV感染，C組為HIV/HCV感染，D組為HIV/HBV/ HCV感染。A組12例，平均年齡（35.6±1.5）歲；B組7例，平均年齡（33.7±1.2）歲；C組49例，平均年齡（33.8± 0.8）歲；D組9例，平均年齡（31.8±0.6）歲。4組的年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.967），具有可比性。

1.2試劑與儀器

Tecan EVO全自動(dòng)加樣儀 （瑞士Tecan集團(tuán)公司），BEPⅢ全自動(dòng)酶免分析儀（德國西門子公司），流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（BD公司）；HIV抗原抗體檢測(cè)試劑盒（法國伯樂），HCV抗體檢測(cè)試劑盒（北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司），HBsAg檢測(cè)試劑盒（生物梅里埃），單克隆抗體：鼠抗人CD3-PC5/CD4-FITC/CD8-PE三色標(biāo)記及同型的IgG1-PC5/IgG1-FITC/IgG-PE（BD公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 血清學(xué)檢測(cè) 對(duì)所有在押人員采用ELISA進(jìn)行HIV初篩，初篩陽性送HIV確證實(shí)驗(yàn)室確證；HCV抗體、HBsAg檢測(cè)采用ELISA檢測(cè)。

1.3.2 外周血CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞檢測(cè) 靜脈采血5 ml，肝素抗凝，離心分離得外周淋巴細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度至105個(gè)/ml使用，取樣100 μl，加入三色標(biāo)記的鼠抗人CD3-PC5/CD4-FITC/CD8-PE，同時(shí)設(shè)立同型對(duì)照，室溫避光孵育30 min，上流式細(xì)胞儀檢測(cè)。計(jì)算CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)及CD4+/CD8+比值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，計(jì)量資料以±s表示，采用F檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

4組的CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05）；4組的CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及CD4+/CD8+比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。

表1 4組CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及CD4+/CD8+的比較（±s）

表1 4組CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及CD4+/CD8+的比較（±s）

組別 n C D4+（個(gè)/ m l） C D8+（個(gè)/ m l） C D4+/ C D8+A 組B 組C 組D 組1 2 7 4 7 9 P 值3 7 1 ± 6 7 3 1 8 ± 2 8 3 3 4 ± 7 9 2 6 4 ± 3 8 0 . 6 3 1 2 3 9 ± 1 8 2 7 5 3 ± 1 2 6 1 0 3 0 ± 5 9 1 4 0 4 ± 2 1 5 0 . 0 3 0 . 3 0 ± 2 . 8 0 . 4 2 ± 0 . 3 0 . 3 2 ± 0 . 5 0 . 1 9 ± 0 . 9 0 . 0 2

3 討論

HIV病毒感染后通常表現(xiàn)為獲得性免疫功能缺陷和機(jī)會(huì)性感染概率增大，外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)表現(xiàn)為CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)下降及CD4+/CD8+比例反轉(zhuǎn)，主要機(jī)制是HIV病毒在抗原提呈細(xì)胞的輔助下，通過抗原提呈細(xì)胞-T淋巴細(xì)胞的模式，在體內(nèi)蔓延感染CD4+T淋巴細(xì)胞，被感染的T淋巴細(xì)胞為自身免疫機(jī)制識(shí)別并被清除，導(dǎo)致CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量下降，從而導(dǎo)致獲得性免疫缺陷[3]。在臨床實(shí)踐中，測(cè)定HIV患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及CD4+/CD8+比值，有助于判定患者的病情進(jìn)展及療效評(píng)價(jià)。HIV病毒感染者通常伴有其他病毒感染，如梅毒螺旋體、HCV病毒等肝炎病毒，使HIV患者的感染進(jìn)程變得更加復(fù)雜，GBV-C與HIV的共感染是否能延緩HIV感染的進(jìn)程，各家學(xué)者持有不同意見[4-6]。研究HIV共感染病毒之間的相互作用及其機(jī)制，是目前HIV感染研究的熱點(diǎn)之一[7]。

本實(shí)驗(yàn)嘗試研究常見病毒HBV、HCV與HIV共感染的特征，檢測(cè)了75份共感染HIV患者的血清學(xué)指標(biāo)及外周血T淋巴細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)，結(jié)果顯示，HIV、HIV/HBV、HIV/HCV、HIV/HBV/HCV感染組別間的CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及CD4+/CD8+比值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與祝婷等[2]報(bào)道基本一致。本研究中的研究對(duì)象為監(jiān)獄在押人員，主要感染途徑是靜脈注射，且年齡大多集中在中青年，年齡比較均一，可排除年齡因素對(duì)機(jī)體免疫功能的影響，比較適合評(píng)估共感染HIV患者的免疫功能狀態(tài)。CD4+T淋巴細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的重要輔助手段，主要表達(dá)于輔助T淋巴細(xì)胞，可參與輔助T淋巴細(xì)胞識(shí)別抗原的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，同時(shí)CD4+是HIV的重要受體，也是HIV病毒攻擊的主要對(duì)象，CD4+的數(shù)量與功能是判斷HIV患者免疫功能的重要依據(jù)。正常人體的CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量為500～1600個(gè)/ml，HIV患者可能出現(xiàn)不規(guī)則的下降，當(dāng)降至200個(gè)/ml時(shí)，就可能導(dǎo)致機(jī)會(huì)性感染及惡性腫瘤，故臨床已將CD4+T淋巴細(xì)胞的計(jì)數(shù)水平作為HIV治療的重要指標(biāo)。HIV病毒特異攻擊CD4+T淋巴細(xì)胞，而HCV、HBV病毒等均沒有此特性，故可以很好地解釋各組CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)無差異。

CD8+T淋巴細(xì)胞是細(xì)胞免疫的效應(yīng)細(xì)胞，分泌多種細(xì)胞因子，最終通過細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞效應(yīng)殺死被感染的靶細(xì)胞，是機(jī)體抗HIV的最重要免疫細(xì)胞，其數(shù)量與功能同病毒量呈正相關(guān)。與HIV一樣，HBV、HCV均為胞內(nèi)感染寄生病毒，機(jī)體對(duì)其的清除主要依靠細(xì)胞免疫。HBV、HCV病毒等侵入人體內(nèi)，刺激T淋巴細(xì)胞增殖分化，使靜止T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為效應(yīng)T淋巴細(xì)胞，釋放多種細(xì)胞因子，通過細(xì)胞毒效應(yīng)產(chǎn)生殺傷作用，清除被感染細(xì)胞。正常機(jī)體內(nèi)各淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量與比例保持一定平衡，是維持人體正常免疫防疫功能的條件。HIV感染后，患者外周血CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量均顯著降低，CD4+/CD8+倒置明顯，且隨著HIV感染加重，CD4+數(shù)量顯著降低，CD4+/CD8+比值倒置更加顯著，CD8+及CD3+T淋巴細(xì)胞數(shù)量降低。本研究表明，在HIV感染患者不同的共感染模式中，CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)存在差異，在HIV/HBV/HCV三重共感染者中尤為明顯，可推測(cè)是否由于HBV、HCV的存在，增強(qiáng)了機(jī)體的免疫應(yīng)答，從而導(dǎo)致三重感染者比單純感染者的CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)更高。HIV/HBV/HCV共感染者體內(nèi)，HBV、HCV是否會(huì)對(duì)HIV自然史產(chǎn)生影響，是否加速了HIV向艾滋病及其相關(guān)疾病的發(fā)生，目前尚存在很大爭(zhēng)議[8]。K?rner等[9]研究認(rèn)為HIV/HCV混合感染可能增加免疫激活，導(dǎo)致未經(jīng)治療的HIV感染者體內(nèi)CD4+T淋巴細(xì)胞凋亡，使其更快速地進(jìn)展為嚴(yán)重的免疫缺陷。同時(shí)有文獻(xiàn)報(bào)道，病毒共感染對(duì)HIV感染者的免疫力影響，除了表現(xiàn)為CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)和功能異常外，還表現(xiàn)為對(duì)自然殺傷細(xì)胞數(shù)量和功能的影響，HCV/HIV病毒的共感染加劇了NK細(xì)胞的損害，從而影響HIV感染的進(jìn)程和預(yù)后[10-13]。

由于研究對(duì)象來源局限，樣本量尚未足夠大，如HIV/ HBV/HCV三重感染組僅有9例符合納入研究，這些因素均會(huì)影響研究結(jié)果，為了使研究結(jié)果更可靠，后續(xù)研究應(yīng)加大樣本量的篩選，進(jìn)一步研究HIV與HCV、HBV的相互作用機(jī)制，為將來更好地控制HIV/HBV/ HCV感染提供更加充分的理論依據(jù)。

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Comparative analysis of CD4+,CD8+T lymphocyte count in co-infected patient with HIV/HBV/HCV

CHEN Shang-liang1LI Jia-qi2LI Jie-ming1YU Wen-chao1LU Shao-fen1LUO Huai-xue1XIAO Su-liu2
1.Blood Center of Zhaoqing City in Guangdong Province,Zhaoqing 526020,China;2.Yangchun Prison Hospital in Guangdong Province,Yangchun 529600,China

ObjectiveTo study the change of of CD4+,CD8+T lymphocyte count in co-infected patient with HIV/HBV/ HCV and to investigate the influence of co-infection on HIV infection process and the immune function of patient.Methods75 peripheral blood samples with HIV co-infection were selected,CD4+,CD8+T lymphocyte count was tested and analysed.ResultsCD4+T lymphocyte count in four groups was compared,with no statistical difference(P＞0.05).CD8+T lymphocyte count and CD4+/CD8+ratio in four groups was compared respectively,with statistical difference(P＜0.05).ConclusionPeripheral blood CD8+T lymphocyte count and CD4+/CD8+ratio are changed in co-infected patient,CD8+T lymphocyte count of HIV/HBV/HCV co-infected group is highter than other three groups.

HIV;HBV;HCV;Co-infection;CD4;CD8

R512.91

A

1674-4721（2014）03（c）-0103-03

2014-02-20本文編輯：李亞聰）

廣東省肇慶市科技計(jì)劃項(xiàng)目（2013E2815）

陳尚良（1981-），男，碩士，主管技師，主要從事臨床輸血檢驗(yàn)工作和輸血安全研究