P27KIP1、P21WAF1、Bax在胃腸道間質(zhì)瘤中的表達(dá)及臨床意義

黃 昕，吳云濤，冉龍艷，成元華

(1.貴州電力職工醫(yī)院病理科，貴州 貴陽 550002；2.貴州電力職工醫(yī)院信息中心，貴州 貴陽 550002；3.貴陽醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，貴州 貴陽 550004)

·臨床病理·

P27KIP1、P21WAF1、Bax在胃腸道間質(zhì)瘤中的表達(dá)及臨床意義

黃 昕1，吳云濤2，冉龍艷1，成元華3

(1.貴州電力職工醫(yī)院病理科，貴州 貴陽 550002；2.貴州電力職工醫(yī)院信息中心，貴州 貴陽 550002；3.貴陽醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，貴州 貴陽 550004)

目的探討P27KIP1、P21WAF1和Bax在胃腸道間質(zhì)瘤中的表達(dá)及其與臨床生物學(xué)行為的相關(guān)性。方法采用免疫組化法檢測(cè)P27KIP1、P21WAF1和Bax在胃腸道間質(zhì)瘤中的陽性表達(dá)情況，并在良性組、潛在惡性組、惡性病例組之間進(jìn)行比較。結(jié)果55例胃腸道間質(zhì)瘤中，P27KIP1、P21WAF1和Bax的陽性表達(dá)率分別為36.3%、54.5%、60%。P21WAF1、Bax在良性組的表達(dá)分別為21.4%、28.6%，而在潛在惡性組、惡性組明顯增高。P27KIP1在良性組的表達(dá)率為64.3%，明顯高于潛在惡性組、惡性組(21.4%、29.6%)。P27KIP1、P21WAF1和Bax三者在潛在惡性組、惡性組的表達(dá)與良性組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而潛在惡性組與惡性組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。P27KIP1、P21WAF1和Bax的表達(dá)與胃腸道間質(zhì)瘤患者的性別、年齡、部位、腫瘤大小、有無壞死、組織學(xué)分型無關(guān)，而與其惡性潛能分級(jí)相關(guān)。結(jié)論P(yáng)27KIP1的低表達(dá)、P21WAF1和Bax的高表達(dá)與胃腸道間質(zhì)瘤臨床惡性潛能密切相關(guān)。

胃腸道間質(zhì)瘤；P27KIP1；P21WAF1；Bax；免疫組織化學(xué)

胃腸道間質(zhì)瘤(Gastrointestinal stromal tumor，GIST)是一種胃腸道最常見的間葉性腫瘤，典型的免疫組化為KIT酪氨酸激酶受體陽性。但從臨床表現(xiàn)而言，從良性，小至中等大小，到明確的肉瘤，其生物學(xué)行為難以準(zhǔn)確預(yù)測(cè)，因此，尋找能判斷GIST生物學(xué)行為的客觀指標(biāo)仍然是臨床關(guān)注以及病理研究的熱點(diǎn)。本研究通過檢測(cè)P27KIP1、P21WAF1、Bax在GIST中的表達(dá)，以求探討其與臨床病理特征及生物學(xué)行為的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料 整理貴陽醫(yī)學(xué)院附院1995-2006年間術(shù)后診斷為胃腸道間葉源性腫瘤的病例，經(jīng)CD117、CD34、Desmin、SMA、S-100蛋白篩選，結(jié)合組織形態(tài)學(xué)特點(diǎn)，從中確定GIST 55例，其中男性29例，女性26例，中位年齡54.8歲(24～77歲)；病變部位：食管1例，胃23例，小腸10例，結(jié)腸6例，直腸8例，盆腔2例，腹壁1例，腹膜后4例。按照Emory等[1]提出的標(biāo)準(zhǔn)將GIST進(jìn)行分級(jí)，其中良性14例，潛在惡性14例，惡性27例。

1.2 檢測(cè)方法 (1)取上述存檔的石蠟包埋組織塊，3μm連續(xù)切片，常規(guī)HE染色和免疫組化染色。(2)檢測(cè)P27KIP1、P21WAF1和Bax蛋白采用免疫組織化學(xué)—SP法。即用型鼠抗人P27KIP1單克隆抗體(克隆號(hào)：ZM-0340)、鼠抗人P21WAF1單克隆抗體(克隆號(hào)：ZM-0206)、鼠抗人 Bax單克隆抗體(克隆號(hào)ZM-0300)；即用型SP免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒，以上試劑均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。(3)對(duì)照設(shè)立。用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作陰性對(duì)照。P27KIP1陽性對(duì)照為肺鱗癌上皮、P21WAF1陽性對(duì)照為乳腺浸潤(rùn)型導(dǎo)管癌腺上皮；Bax陽性對(duì)照為胃腺癌上皮。

1.3 結(jié)果判斷 陽性定位為胞核及胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒，且著染細(xì)胞數(shù)＞10%判斷為陽性，P27KIP1和P21WAF1陽性均定位為細(xì)胞核，Bax定位為細(xì)胞質(zhì)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料兩樣本率比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

55例GIST組織中，P27KIP1、P21WAF1和Bax的陽性表達(dá)率分別為36.3%、54.5%、60%，與臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表1。通過χ2檢驗(yàn)，不同性別、不同年齡、不同部位、組織學(xué)分型、有無壞死之間、腫瘤大小之間，P27KIP1、P21WAF1和Bax的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。良性與潛在惡性之間、良性與惡性之間的陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，潛在惡性與惡性之間的陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 P27KIP1、P21WAF1和Bax在胃腸道間質(zhì)瘤中的陽性表達(dá)[例(%)]

3 討論

P27KIP1通常被認(rèn)為是一種抑癌基因，具有誘導(dǎo)分化、促進(jìn)凋亡和抑制增殖的作用。近年研究發(fā)現(xiàn)，P27KIP1作為抑癌基因的作用并不表現(xiàn)為基因的缺失或突變，而是以蛋白表達(dá)水平的變化起作用，其在蛋白表達(dá)水平及活性的改變上與腫瘤形成有關(guān)。馮愛強(qiáng)等[2]采用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈方法檢測(cè)了乳腺癌組織得出結(jié)論P(yáng)27KIP1的陽性率為51.9%，其表達(dá)水平與組織學(xué)分級(jí)、淋巴轉(zhuǎn)移程度呈負(fù)相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：P27KIP1的表達(dá)隨著惡性程度的增加，P27KIP1蛋白表達(dá)明顯降低，由64.3%降為21.4%，36.3%，良性組與潛在惡性組、惡性組之間陽性表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果證實(shí)P27KIP1蛋白的低表達(dá)提示GIST惡性潛能的增加，應(yīng)用免疫組化技術(shù)測(cè)定GIST中P27KIP1蛋白的表達(dá)情況，可作為判斷腫瘤的惡性程度的參考指標(biāo)。

P21WAF1作為腫瘤抑制基因，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。其與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有關(guān)，但P21WAF1的表達(dá)在不同組織表達(dá)有所差異。李蓉等[3]報(bào)道P21在非萎縮胃炎、萎縮胃炎、疣狀胃炎及胃癌組織的表達(dá)分別為0、22.5%、35%、60%，金建云等[4]報(bào)道結(jié)直腸癌中正常、癌前、癌旁、癌分別為23.43%、21.78%、26.91%和12.82%。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：P21WAF1表達(dá)與GIST患者性別、年齡、腫瘤部位、組織學(xué)分型、大小、有無壞死無關(guān)，隨著惡性程度的增加，P21WAF1蛋白表達(dá)增高，由良性的21.4%增為潛在惡性的64.2%，惡性的66.7%。在良性和潛在惡性或惡性GIST之間P21WAF1的陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P21WAF1表達(dá)高可能有助于遏制GIST中腫瘤細(xì)胞的無限增生。因此，檢測(cè)GIST組織中P21WAF1表達(dá)水平有助于了解GIST的生物學(xué)行為。

Bax作為促細(xì)胞凋亡基因蛋白，既可以直接影響線粒體功能，又可以間接通過降低某些化療藥物對(duì)細(xì)胞凋亡的耐受力，而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。盧明書等[5]報(bào)道胃癌組織中高分化腺癌的細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著高于低分化腺癌和黏液癌，胃癌組織中Bax表達(dá)為35.1%，明顯低于非癌組織。本研究表明，Bax的表達(dá)與胃腸道間質(zhì)瘤患者的性別、年齡、部位、腫瘤大小、有無壞死、組織學(xué)分型無關(guān)，隨著惡性程度的增加，表達(dá)增高，其表達(dá)率在良性組和潛在惡性、惡性組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這對(duì)我們判斷惡性潛能有輔助意義，因此檢測(cè)GIST組織中Bax表達(dá)水平有助于了解GIST的生物學(xué)行為。

通過本研究，我們發(fā)現(xiàn)隨著胃腸道間質(zhì)瘤惡性潛能的增加，P27KIP1的表達(dá)會(huì)明顯減少、P21WAF1和Bax的表達(dá)會(huì)顯著增加，而且其蛋白水平的改變與GIST患者的性別、年齡、部位、腫瘤大小、有無壞死、組織學(xué)分型無相關(guān)性，這對(duì)日常臨床病理診斷工作判斷其生物學(xué)行為、評(píng)估預(yù)后有較好的提示作用，并且對(duì)實(shí)驗(yàn)室而言，免疫組織化學(xué)染色方法容易開展，臨床病理診斷中可通過免疫組化測(cè)定其表達(dá)情況，作為判斷惡性潛能的輔助指標(biāo)。

[1]Emory TS,Sobin LH,Lukes L,et al.Prognosis of gastrointestinal smooth muscle(stromal)tumors:dependence on anatomic site[J]. Am J Surg Pathol,1999,23(1):82-87

[2]馮愛強(qiáng),李蕾蕾.SKP2和P27KIP1在乳腺癌組織中的表達(dá)及其相關(guān)性的研究[J].天津醫(yī)藥,2012,40(5):424-426.

[3]李 蓉,趙夢(mèng)云,張永紅,等.不同類型的胃炎和胃癌組織中p21、p16蛋白的表達(dá)及臨床意義[J].海南醫(yī)學(xué),2013,24(20):2968-2969.

[4]金建云,王海波.Cyclin D1、P21WAF1在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其臨床意義[J].山東醫(yī)藥,2011,51(49):82-83

[5]盧書明,張竹青,潘 科,等.胃癌組織p57kip2和Bax蛋白的表達(dá)及其凋亡的關(guān)系[J].臨床腫瘤學(xué)雜志,2011,16(12):1084-1087.

Expression and significance of P27KIP1,P21WAF1,Bax in gastrointestinal stromal tumors.

HUANG Xin1,WU Yun-tao2,RAN Long-yan1,CHEN Yuan-hua3.
1.Department of Pathology,Guizhou Hospital of Electricity Power,Guizhou 550002,Guiyang,CHINA;2.Information Center,Guizhou Hospital of Electricity Power,Guizhou 550002,Guiyang, CHINA;3.Department of Pathology,Guiyang Medical School,Guizhou 550004,Guiyang,CHINA

ObjectiveTo investigate the correlation between biological behavior and expression of P27KIP1, P21WAF1and Bax in gastrointestinal stromal tumors.MethodsImmunohistochemical method was used to detect P27KIP1,P21WAF1and Bax expression in 55 cases of GIST,which were compared among benign GIST,potential malignant GIST,and malignant GIST.ResultsIn 55 cases of GIST,the positive expression rates of P27KIP1,P21WAF1and Bax were 36.3%,54.5%,60%.The expression rate of P21WAF1and Bax were 21.4%,28.6%in benign GIST,which were significantly increased in potential malignant GIST and malignant GIST.The expression rate of P27KIP1in benign GIST(64.3%)was significantly higher than that in potential malignant GIST(21.4%)and malignant GIST(29.6%). The expression rate of P27KIP1,P21WAF1and Bax showed statistically significant difference between benign GIST and potential malignant GIST,malignant GIST,but showed no statistically significant difference between potential malignant GIST and malignant GIST.The expressions of P27KIP1,P21WAF1and Bax showed no correlation with age,sex,location, size,necrosis and histological scheme,but they were related with the malignant progression.ConclusionThe low expression of P27KIP1,the high expression of P21WAF1and Bax are closely related to clinical malignant potential of GIST.

Gastrointestinal stromal tumors;P27KIP1;P21WAF1;Bax;Immunohistochemistry

R735

A

1003—6350（2014）24—3717—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.24.1448

2014-05-14)

黃 昕。E-mail：380666970@qq.com