高效液相色譜法測定唇齒清胃丸中梔子苷含量

楊慈海 ，譚忠軍 ，楊春麗 ，劉 斌

（1.湖北省荊門市食品藥品監(jiān)督檢驗所，湖北 荊門 448124； 2.湖北百科亨迪藥業(yè)有限公司，湖北 荊門 448124；3.湖北省荊門市皮膚病防治院，湖北 荊門 448000）

唇齒清胃丸由大黃、黃芩、龍膽、黃柏、陳皮等組方，具有清胃火的功效，用于由胃火引起的牙齦腫痛、口干唇裂、咽喉痛。現(xiàn)行藥品標(biāo)準(zhǔn)[1]中無含量測定方法。梔子為方中主藥，梔子苷是梔子的主要有效成分。本試驗中以梔子苷為含量指標(biāo)成分，建立了測定唇齒清胃丸中梔子苷的高效液相色譜（HPLC）法，為該制劑提供了有效的含量評價方法。

1 儀器與試藥

DIONEX Ultimate 3000型高效液相色譜儀；Mettler Toledo AL 204型電子天平；AS51050A型超聲波清洗儀。梔子苷對照品（供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所，批號為110749－200512）；唇齒清胃丸（長春人民藥業(yè)集團有限公司，批號為20100302，20120308，20121111）；陰性樣品（自制）；水為純化水，其他試劑均為分析純或色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[2]

色譜柱：Kromasil－C18色譜柱(250mm × 4.6mm，5 μm)；流動相：乙腈－水（10 ∶90）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：238 nm；柱溫：室溫；進樣量：10 μL。

2.2 溶液制備

精密稱取梔子苷對照品 7.14mg，置 100 mL容量瓶中，用50%甲醇溶解并稀釋至刻度，即得質(zhì)量濃度為0.071 4 g/L的對照品溶液。取裝量差異項下的樣品內(nèi)容物，碾細，混勻，取1.8 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，取出，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，即得供試品溶液。按處方比例制備缺梔子藥材的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗：分別精密吸取對照品、供試品、陰性對照品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1?？梢?，陰性對照無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：分別精密吸取對照品溶液 2，4，8，16，32，64 μL，注入高效液相色譜儀，測定峰面積積分值，以進樣量(X)為橫坐標(biāo)、峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸曲線方程 Y＝1.753 5 X－0.087 1（r＝0.999 9，n＝6）。結(jié)果表明，梔子苷進樣量在0.142 8～4.569 6 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液10 μL，重復(fù)進樣 6次，測定峰面積。結(jié)果梔子苷峰面積的 RSD為 0.632%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：精密吸取同一供試品溶液，分別于 0，4，8，16，24 h時各進樣10 μL，測定峰面積。結(jié)果梔子苷峰面積的 RSD為1.12%(n＝5)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗：取同一批樣品（批號為20100302）6份，依法制備供試品溶液，并進樣測定。結(jié)果梔子苷平均含量為1.18mg/g，RSD為0.735%(n＝6)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的同一批樣品（含量1.18mg/g）粉末0.6 g，共6份，精密稱定，分別精密加入梔子苷對照品溶液（0.071 4 g/L）各 10 mL，按含量測定方法進行操作，測定含量并計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 梔子苷加樣回收試驗結(jié)果(n＝6)

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，測定并計算含量。結(jié)果批號為20100302，20120308，20121111的樣品中梔子苷的含量分別為 1.18， 1.05，1.22mg/g（n ＝ 3）。

3 討論

參考文獻[3],對提取溶劑進行篩選，分別用甲醇、50%甲醇、70%甲醇提取，結(jié)果以50%甲醇超聲提取30 min效果最好。比較了樣品超聲處理15，30，60 min的提取液，結(jié)果超聲處理30 min可提取完全，故選30 min為宜。參照2010年版《中國藥典（一部）》中梔子含量測定項下方法以乙腈－水（10∶90）為流動相，并對比例進行了適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，結(jié)果分離度更好。

參考文獻：

[1] YBZ17312006，國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）[S].

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:231.

[3] 陳艷霞，宮立孟.HPLC測定護肝寧丸中梔子苷的含量[J].中國藥師，2012，15（7）:1 037－1 038.