色譜法測定人血漿中萬古霉素的濃度

姜慧婷，陳冰，楊婉花

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院藥劑科，上海 200025

色譜法測定人血漿中萬古霉素的濃度

姜慧婷，陳冰，楊婉花*

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院藥劑科，上海 200025

目的：建立HPLC法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）法檢測人血漿中萬古霉素的濃度，并分別與FPIA法進(jìn)行比較。方法：HPLC法：100 μL血漿樣品加入等體積10%的高氯酸沉淀，振蕩離心后取上清液進(jìn)樣。采用Agilent Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫為35℃，流動相為0.05 mol·L-1KH2PO4（pH=3.2）-甲醇（74∶26，v/v），流速為1 mL·min-1，檢測波長為230 nm。LC-MS/MS法：100 μL血漿樣品用300 μL乙腈沉淀，振蕩離心后取上清液進(jìn)樣。色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18（100 mm×2.1 mm，3.5 μm），柱溫為40℃，流動相為水（含0.1%甲酸）-乙腈（90∶10，v/v），流速為0.20 mL·min-1。采用電噴霧化離子源（ESI），多離子反應(yīng)模式（MRM）檢測，萬古霉素和內(nèi)標(biāo)去甲萬古霉素的監(jiān)測離子對分別為m/z 725.0→144.0和718.5→144.0。采用建立的HPLC法和LC-MS/MS法測定95份臨床樣本，并與FPIA法進(jìn)行相關(guān)性和測定方法的偏倚分析。結(jié)果：HPLC法和LC-MS/MS法測定萬古霉素的線性范圍分別為1.2～96 μg·mL-1和0.4～96 μg·mL-1，低、中、高三種濃度質(zhì)控品日內(nèi)和日間相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）均＜15%。兩種方法與FPIA法有很強(qiáng)的相關(guān)性（r=0.9621，P＜0.0001和r=0.9466，P＜0.0001），無明顯偏倚。結(jié)論：建立的HPLC和LC-MS/MS法快速、靈敏、準(zhǔn)確，樣本測定結(jié)果與FPIA法無顯著差異，適用于萬古霉素的常規(guī)血藥濃度監(jiān)測及人體藥物代謝動力學(xué)研究。

萬古霉素；高效液相；液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜；熒光偏振免疫法

萬古霉素（vancomycin）是一種糖肽類抗生素，對革蘭陽性菌有較強(qiáng)的殺菌作用，尤其適用于耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的感染[1]。以往的研究發(fā)現(xiàn)，老年人、長療程和萬古霉素谷濃度過高（30～65 μg·mL-1）是萬古霉素引起腎毒性的危險(xiǎn)因素，并且合用氨基糖苷類抗生素后腎毒性的發(fā)生率大大提高，因此建議長療程、高濃度藥物維持的患者，合并其他耳腎毒性藥物和腎功能不全患者，老年、新生兒等特殊群體患者須進(jìn)行常規(guī)血藥濃度監(jiān)測。實(shí)施個(gè)體化用藥，以保證用藥的安全性和有效性，同時(shí)減少耐藥菌產(chǎn)生的幾率[2]。

目前國內(nèi)外對萬古霉素的血藥濃度監(jiān)測方法有微生物法、熒光偏振免疫（FPIA）法、高效液相色譜（HPLC）法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）法等[3]。臨床多采用基于免疫原理的FPIA法，但是需要專門儀器，且專用試劑盒需從國外進(jìn)口，若供應(yīng)中斷的情況下，臨床萬古霉素血藥濃度監(jiān)測無法正常進(jìn)行。國內(nèi)已有較多采用HPLC法測定萬古霉素血藥濃度的文獻(xiàn)報(bào)道。而LC-MS/MS法則有檢測食品中萬古霉素的殘留量的報(bào)道，樣品處理需經(jīng)過萃取和凈化過程，時(shí)間過長且步驟繁瑣，不適用于臨床樣本的測定[4-5]。本文參考了相關(guān)文獻(xiàn)[6-9]，建立了HPLC法和LC-MS/MS法快速準(zhǔn)確測定血漿中萬古霉素的濃度。

1 材料

1.1 儀器

Aglient 1100系列高效液相色譜儀（美國Aglient公司）；API4000型三重四級桿質(zhì)譜儀（美國Applied Biosystems公司），配備電噴霧離子化源（ESI）以及Analyte 1．5．1數(shù)據(jù)處理軟件；Prominence 20A液相色譜儀（日本Shimadzu公司）；TDL-5型低速大容量離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；BS224S型精密天平（德國賽多利斯公司）；XW-80A型漩渦混合器（上海醫(yī)大儀器廠）；Milli-Q超純水系統(tǒng)（美國Millipore公司）。

1.2 藥品和試劑

萬古霉素對照品（純度＞90%，大連美倫生物技術(shù)有限公司，批號：20120601）；內(nèi)標(biāo)去甲萬古霉素（純度＞95%，華北制藥股份有限公司，批號：12070202）；磷酸二氫鉀（上海振欣試劑廠，批號：20120305）；乙腈和甲醇（色譜純，美國Tedia公司）；其余試劑均為分析純；試驗(yàn)用水為純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 HPLC法

2.1.1 色譜條件色譜柱：Agilent Eclipse XDBC18（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流動相：0．05 mol·L-1KH2PO4（pH=3．2）-甲醇（74∶26）；流速：1 mL·min-1；柱溫：35℃；檢測波長：230 nm。

2.1.2 對照品血漿和內(nèi)標(biāo)溶液的配制精密稱取萬古霉素對照品4．8 mg，加入1 mL純水溶解，依次用純水稀釋成以下濃度：960、480、240、120、60、30、12、4．0 μg·mL-1作為工作液。再分別取對照品工作液各10 μL，加入空白血漿90 μL，稀釋成濃度分別為96、48、24、12、6．0、3．0、1．2、0．4 μg·mL-1的對照品血漿。

精密量取內(nèi)標(biāo)去甲萬古霉素8．0 mg，加1 mL純水溶解使?jié)舛葹?．0 mg·mL-1去甲萬古霉素標(biāo)準(zhǔn)儲備液，將儲備液用純水稀釋至150．0 μg·mL-1。

以上儲備液及內(nèi)標(biāo)溶液均保存在4℃冰箱內(nèi)備用。

2.1.3 血漿樣品處理精密吸取血漿樣品100 μL，加入20 μL內(nèi)標(biāo)溶液（150．0 μg·mL-1去甲萬古霉素），混勻后加入10%高氯酸100 μL進(jìn)行沉淀，渦旋振蕩30 s，13000 r·min-1離心10 min，取上層20 μL進(jìn)樣。

2.1.4 方法專屬性考察分別取空白血漿、標(biāo)準(zhǔn)品血漿（加入內(nèi)標(biāo)）以及患者用藥后血漿（加入內(nèi)標(biāo)），按“2．1．3”項(xiàng)處理，進(jìn)樣分析得色譜圖（見圖1）。萬古霉素和內(nèi)標(biāo)去甲萬古霉素保留時(shí)間分別為14．2 min和18．9 min，峰形良好，萬古霉素和內(nèi)標(biāo)能完全分離，血漿中內(nèi)源性物質(zhì)和患者使用的其它藥物均不干擾萬古霉素和內(nèi)標(biāo)的測定。

2.1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量下限按照“2．1．2”項(xiàng)下方法配制不同濃度的系列對照品血漿。按“2．1．3”項(xiàng)方法處理標(biāo)準(zhǔn)品血漿，以血漿中待測物濃度與內(nèi)標(biāo)物濃度的比值為橫坐標(biāo)X，以待測物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值為縱坐標(biāo)Y，用加權(quán)最小二乘法進(jìn)行回歸運(yùn)算，求得的直線回歸方程：Y=4．526X＋13．52（r=0．998，n=7）

圖1 萬古霉素和去甲萬古霉素（內(nèi)標(biāo)）的典型色譜圖

結(jié)果表明，萬古霉素血藥濃度在1．2～96 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。萬古霉素的定量下限為1．2 μg·mL-1（n=5，相對標(biāo)準(zhǔn)差RSD=7．35%，準(zhǔn)確度RE= 98．67%）。

2.1.6 精密度與準(zhǔn)確度試驗(yàn)按照“2．1．2”項(xiàng)下方法配制低、中、高（5．75、23．0、92．0 μg·mL-1）3種濃度的萬古霉素標(biāo)準(zhǔn)品血漿，每種濃度5份，再按“2．1．3”項(xiàng)方法處理后同日內(nèi)測定，依據(jù)當(dāng)日各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算萬古霉素的血漿濃度，考察日內(nèi)精密度；連續(xù)3天同法操作，考察日間精密度，結(jié)果見表1。

表1 HPLC法的準(zhǔn)確度與精密度（±s，n=5）

表1 HPLC法的準(zhǔn)確度與精密度（±s，n=5）

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2.1.7 提取回收率試驗(yàn)按照“2．1．2”項(xiàng)下方法配制低、中、高（5．75、23．0、92．0 μg·mL-1）3種濃度的萬古霉素標(biāo)準(zhǔn)品血漿，每種濃度5份，再按“2．1．3”項(xiàng)方法處理后進(jìn)樣分析。另用等量純水代替空白血漿配置對照品溶液，每種濃度5份，按“2．1．3”項(xiàng)方法處理后進(jìn)樣分析。以每一濃度前者峰面積與后者峰面積之比計(jì)算提取回收率，結(jié)果低、中、高三種濃度的血漿樣品的提取回收率分別為68．68%、54．52%、58．34%。

2.1.8 樣品穩(wěn)定性考察

凍融穩(wěn)定性：血漿樣品經(jīng)歷3次冰凍-解凍循環(huán)后測定，萬古霉素低、中、高3種濃度的RSD分別為7．69%、3．57%、5．89%。

冷凍樣品的穩(wěn)定性：血漿樣品在-40℃放置20 d后處理測定，萬古霉素低、中、高3種濃度的RSD分別為10．25%、4．78%、4．94%。

室溫放置6 h穩(wěn)定性：在室溫放置6 h后處理測定，萬古霉素低、中、高3種濃度的RSD分別為8.64%、5.83%、7.38%。

血漿樣品進(jìn)樣器穩(wěn)定性：血漿樣品處理后置于進(jìn)樣器24 h后，用當(dāng)日處理的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算，萬古霉素低、中、高3種濃度的RSD分別為13.25%、11.49%、6.30%。

結(jié)果表明，在上述穩(wěn)定性考察條件下，萬古霉素均保持穩(wěn)定，未出現(xiàn)明顯變化。符合生物樣品分析要求。

2.2 LC-MS/MS法

2.2.1 色譜條件色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18（100 mm×2.1 mm，3.5 μm）；流動相：水（含0.1%甲酸）-乙腈（90∶10，v/v）；流速：0.20 mL·min-1；柱溫：40℃。

2.2.2 質(zhì)譜條件采用電噴霧離子化電離源（ESI），多離子反應(yīng)模式（MRM）檢測：源電壓：5.5 kV，源溫度：500℃，GS1氣體流速：25 psi，GS2氣體流速：25 psi，簾氣流速：10 psi。測定萬古霉素和去甲萬古霉素的離子對分別為m/z 725.0→144.0，m/z 718.5→144.0；兩者的解簇電壓（DP）和碰撞能量（CE）分別為：53.6 eV和58.5 eV；27.3 eV和29.4 eV。

2.2.3 對照品血漿和內(nèi)標(biāo)溶液的配制對照品血漿的配制同“2.1.2”。將8.0 mg·mL-1去甲萬古霉素標(biāo)準(zhǔn)儲備液用乙腈稀釋至4.0 μg·mL-1，以此作為含內(nèi)標(biāo)的沉淀劑。以上儲備液及內(nèi)標(biāo)溶液均保存在4℃冰箱內(nèi)備用。

2.2.4 血漿樣品處理精密吸取血漿樣品100 μL，加入300 μL內(nèi)標(biāo)溶液（4.0 μg·mL-1去甲萬古霉素）進(jìn)行沉淀，渦旋振蕩1 min，置于高速離心機(jī)中13000 r·min-1離心10 min，取50 μL上清液，加入50 μL純水混勻，取5 μL進(jìn)樣分析。

2.2.5 質(zhì)譜分析和特異性分別取空白血漿、對照品血漿（加入內(nèi)標(biāo)溶液）和患者用藥后血漿（加入內(nèi)標(biāo)溶液）樣本，按“2.2.3”項(xiàng)方法處理，其典型色譜見圖2。萬古霉素和內(nèi)標(biāo)去甲萬古霉素的保留時(shí)間均為1.6 min，峰形良好，血漿中內(nèi)源性物質(zhì)和患者使用的其他藥物均不干擾萬古霉素和內(nèi)標(biāo)的測定。

圖2 萬古霉素和去甲萬古霉素的典型色譜圖

2.2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線及定量下限按照“2.2.3”項(xiàng)下方法配制不同濃度的系列對照品血漿。按“2.2.4”項(xiàng)方法處理后進(jìn)行分析，記錄萬古霉素和內(nèi)標(biāo)去甲萬古霉素色譜峰面積。以待測物濃度為橫坐標(biāo)X（μg· mL-1），以待測物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值為縱坐標(biāo)Y，用加權(quán)（W=1/X）最小二乘法進(jìn)行回歸運(yùn)算，求得的直線回歸方程Y=0.103X+0.0222（r=0.9997，n=8）。結(jié)果顯示，萬古霉素在0.4～96 μg·mL-1的范圍線性關(guān)系良好。最低定量限0.4 μg·mL-1濃度水平上，連續(xù)測定5份最低定量限樣本，準(zhǔn)確度為104.9%，精密度為4.9%。

2.2.7 精密度和準(zhǔn)確度按照“2.2.3”項(xiàng)下方法，分別配制含萬古霉素低、中、高（0.958、5.75、92.0 μg·L-1）3種濃度的質(zhì)控血漿樣本。按照“2.2.4”項(xiàng)下方法處理樣本，每一濃度均為5份進(jìn)樣分析，連續(xù)測定3天。根據(jù)當(dāng)日標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算質(zhì)控樣本的測定濃度，計(jì)算日內(nèi)、日間精密度和準(zhǔn)確度，結(jié)果見表2。

表2 LC-MS/MS法的精密度、準(zhǔn)確度、提取回收率與基質(zhì)效應(yīng)（±s，n=5）

表2 LC-MS/MS法的精密度、準(zhǔn)確度、提取回收率與基質(zhì)效應(yīng)（±s，n=5）

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2.2.8 提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)按照“2.2.4”項(xiàng)下方法處理低、中、高（0.958、5.75、92.0 μg·L-1）3種濃度的質(zhì)控血漿樣本，每一濃度均為5份，進(jìn)樣分析后獲得峰面積A；取空白血漿若干，加入3倍體積乙腈沉淀處理后獲得上清液，另取10 μL低、中、高3種濃度的工作液各5份，分別加入390 μL的此上清液，渦旋振蕩1 min，置于高速離心機(jī)中以13000 r·min-1離心10 min，取50 μL上清液，加入50 μL純水混勻，取5 μL進(jìn)樣分析后獲得相應(yīng)的峰面積B；取10 μL低、中、高3種濃度的工作液各5份，分別加入90 μL的純水配置成對照品溶液，并按照“2．2．4”項(xiàng)下方法處理，進(jìn)樣分析后獲得相應(yīng)的峰面積C。提取回收率為峰面積A與峰面積B之比，基質(zhì)效應(yīng)為峰面積B與峰面積C之比：血漿樣本的提取回收率為（47．06±6．34）%，基質(zhì)效應(yīng)為（52．47± 5．51）%，其他結(jié)果見表2。

2.2.9 穩(wěn)定性考察按照“2．2．4”項(xiàng)下方法處理質(zhì)控樣本，每一濃度5份進(jìn)樣分析，考察了血漿樣本經(jīng)歷3次冷凍-解凍循環(huán)穩(wěn)定性、-40℃冷凍放置20 d穩(wěn)定性、室溫放置6 h穩(wěn)定性以及處理后室溫放置24 h穩(wěn)定性，其中血漿樣品經(jīng)歷3次冰凍-解凍循環(huán)后萬古霉素低、中、高3種濃度的RSD分別為9．03%、4．17%、1．52%；血漿樣品在-40℃放置20 d后處理測定萬古霉素低、中、高3種濃度的RSD分別為11．38%、5．40%、4．54%；血漿樣品室溫放置6 h后處理測定萬古霉素血漿樣品低、中、高3種濃度的RSD分別為8．64%、5．83%、7．39%；處理后置于進(jìn)樣器24 h后，用當(dāng)日處理的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算萬古霉素低、中、高3種濃度的RSD分別為13．32%、5．51%、2．41%。結(jié)果表明，在上述穩(wěn)定性考察條件下，萬古霉素均保持穩(wěn)定，未出現(xiàn)明顯變化。符合生物樣品分析要求。

3 樣本檢測結(jié)果與比較

分別采用HPLC法、LC-MS/MS法和FPIA法檢測95份臨床使用萬古霉素進(jìn)行血藥濃度監(jiān)測的樣本，并采用SPSS 11．5軟件對測定結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析和偏倚分析，發(fā)現(xiàn)HPLC法和LC-MS/MS法分別與FPIA法測定結(jié)果具有顯著相關(guān)性，r=0．9621，P＜0．0001和r=0．9466，P＜0．0001（見圖3），Bland-Altman偏倚分析發(fā)現(xiàn)只有95%的樣本都在Mean± 1．96SD范圍內(nèi)，所以認(rèn)為HPLC法和LC-MS/MS法與FPIA法的偏倚不顯著。

圖3 HPLC法、LC-MS/MS法與FPIA法測定萬古霉素血藥濃度的相關(guān)性（n=95）

4 討論

目前對萬古霉素進(jìn)行常規(guī)血藥濃度監(jiān)測，應(yīng)用最多的方法是FPIA法，具有較為快速、經(jīng)濟(jì)、結(jié)果準(zhǔn)確的特點(diǎn)；但是基于免疫學(xué)原理的眾多監(jiān)測方法其共同缺點(diǎn)是易受到其它藥物或代謝物的干擾，若商品化的試劑盒的供應(yīng)不及時(shí)可能影響臨床的監(jiān)測，同時(shí)專用的檢測設(shè)備及每個(gè)監(jiān)測品種的專用試劑盒也不夠靈活?；谏V的方法具有特異性好、使用靈活的特點(diǎn)：其中HPLC法使用尤其廣泛，但也有操作繁瑣、分析時(shí)間長、靈敏度達(dá)不到要求的缺點(diǎn)；LC-MS/MS法具有靈敏、快速、簡便、準(zhǔn)確的優(yōu)勢，已有很多實(shí)驗(yàn)室用于基礎(chǔ)研究和臨床研究，但儀器昂貴，基質(zhì)效應(yīng)大。3種方法各有優(yōu)劣，我們分別采用3種方法檢測了95例萬古霉素血藥濃度，兩種方法與FPIA法較為一致，經(jīng)Passing-Bablok分析，分別僅有5個(gè)標(biāo)本偏差＞1．96 SD，不存在顯著偏倚。

萬古霉素和去甲萬古霉素均為雙電荷母離子[M＋2H]2＋，因此選擇m/z 725．0→144．0和718．5→144．0作為定量離子對。萬古霉素屬于水溶性分子，所以本文建立的HPLC和LC-MS/MS測定法均采用耗時(shí)較短的蛋白沉淀法處理血漿樣品。目前，酸、鹽、有機(jī)溶劑等都可用作沉淀劑，其中強(qiáng)酸高氯酸，可在較少用量時(shí)較為完全地沉淀血漿，從而較少地稀釋樣本，適用于靈敏度較低的HPLC法。而乙腈的沉淀效率高，能夠完全沉淀蛋白并對殘余雜質(zhì)起稀釋作用，所以適用于靈敏度較高的LC-MS/MS法，整個(gè)處理過程中8倍稀釋工作液后的最低檢測限仍然達(dá)到0．4 μg·mL-1，可以滿足人體藥物代謝動力學(xué)研究的要求。但兩種方法的提取回收率均不高，且LC-MS/MS法存在較強(qiáng)的基質(zhì)效應(yīng)，在其他文獻(xiàn)[4]中也存在此現(xiàn)象。推測原因可能是萬古霉素在沉淀劑中的低溶解度導(dǎo)致沉淀過程中產(chǎn)生較大損耗，特別是有機(jī)溶劑（乙腈）能更大程度地降低萬古霉素的溶解度，進(jìn)而降低其回收率[10]。徐冰等用HPLC法測定血漿中萬古霉素濃度時(shí)的提取回收率為68%～72%[6]，焦志鐵等用HPLC法測定血漿中去甲萬古霉素濃度時(shí)的提取回收率為53%～57%[11]，冼燕萍等建立的UPLC-MS/MS法測定豬肉中萬古霉素與去甲萬古霉素時(shí)認(rèn)為其方法存在較大的基質(zhì)效應(yīng)[4]。雖然采用液液萃取和固相萃取[12]等多種手段聯(lián)合的方法可將提取回收率提高至70%以上，并一定程度上降低基質(zhì)效應(yīng)[5]，但卻大大延長了樣品處理時(shí)間。因此考慮多次測定同一批樣本結(jié)果未出現(xiàn)較大波動，及與FPIA法測定結(jié)果具有較強(qiáng)的相關(guān)性和較小偏倚，本研究仍然采用沉淀法處理血漿樣品，確保測定方法準(zhǔn)確而快速。

本文建立了HPLC法和LC-MS/MS法用于監(jiān)測血漿中萬古霉素血藥濃度，方法與FPIA法結(jié)果一致，均可替代FPIA法進(jìn)行萬古霉素的血藥濃度監(jiān)測及人體藥物代謝動力學(xué)的研究。

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Establishment of Chromatographic Methods for the Determination of Vancomycin in Human Serum

JIANG Hui-ting,CHEN Bing,YANG Wan-hua*
Department of Pharmacy,Ruijin Hospital,Shanghai JiaoTong University School of Medicine,Shanghai 200025,China

Objective：To establish an HPLC and LC-MS/MS method for determining vancomycin in humanserumandtocomparewithFPIA．Methods：SerumsamplesforHPLCwereextractedby sedimentation with 10%perchloric acid．The chromatographic column of NovaPak C18was used and the column temperature was kept at 35℃．The mobile phase was composed of KH2PO4buffer solution-methanol (85∶15,v/v,pH=3．2),the flow rate was 1 mL·min-1and the UV detection was performed at 230 nm．Serum samples for LC-MS/MS were precipitated by acetonitrile and the supernatants were used．The separations were performed on an Agilent Eclipse XDB-C18analytical column(100 mm×2．1 mm,3．5 μm)at 40℃with the mobile phase composed of water(0．1%formic acid)-acetonitrile(90∶10,v/v)at a flow rate of 0．2 mL· min-1．ESI was used which was performed in the multiple reaction monitoring mode(MRM)using target ionsm/z725．0→144．0(vancomycin)andm/z718．5→144．0(IS)．Then the HPLC and LC-MS/MS methods were used to determine 95 clinical samples comparing with FPIA．Results：The linear range of the two methods were 0．4～96 and 1．2～96 μg·mL-1,respectively,with LLOQ at 0．4 and 1．2 μg·mL-1．The intra-and inter-day RSD were within 15%．The HPLC and LC-MS/MS methods strongly correlated with FPIA without significantdifferences．Conclusion：TheHPLCandLC-MS/MSmethodsweestablishedwererapid, sensitive,precise and reliable for the determination of vancomycin in human serum,which can be applied in the study of human vancomycin pharmacokinetics and the practice of therapeutic drug monitoring．

Vancomycin;HPLC;LC-MS/MS;FPIA

R969.1

A

1673-7806（2014）06-509-05

姜慧婷，女，碩士研究生 E-mail:jianghuiting0227@163.com

*通訊作者 楊婉花，女，主任藥師，碩士生導(dǎo)師 E-mail:yangwanhuaxy@163.com

2014-04-10

2014-06-16