對《中國藥典》2010年版利巴韋林注射液有關(guān)物質(zhì)檢查方法的探討

王麗，申蘭慧，陳國清

江蘇省無錫藥品檢驗(yàn)所，無錫 214028

對《中國藥典》2010年版利巴韋林注射液有關(guān)物質(zhì)檢查方法的探討

王麗，申蘭慧，陳國清

江蘇省無錫藥品檢驗(yàn)所，無錫 214028

目的：對利巴韋林注射液有關(guān)物質(zhì)檢查方法進(jìn)行探討。方法：按照《中國藥典》2010年版二部利巴韋林注射液有關(guān)物質(zhì)檢查的方法，對利巴韋林注射液進(jìn)行破壞性試驗(yàn)，同時(shí)對利巴韋林的降解產(chǎn)物進(jìn)行考察。結(jié)果：利巴韋林雜質(zhì)峰與氯化鈉峰難以分開。因此，利巴韋林注射液處方中如有氯化鈉的存在，將干擾利巴韋林注射液有關(guān)物質(zhì)的檢查。結(jié)論：建議有關(guān)物質(zhì)檢測時(shí)扣除氯化鈉峰的影響，或者企業(yè)在利巴韋林注射液的處方中標(biāo)注氯化鈉的量或不加氯化鈉。

利巴韋林；有關(guān)物質(zhì)；氯化鈉

利巴韋林（三氮唑核苷病毒唑，Ribavirin，結(jié)構(gòu)式見圖1）是一種廣譜強(qiáng)效抗病毒藥物，廣泛用于治療呼吸道合胞病毒引起的病毒性肺炎與支氣管炎、皮膚皰疹病毒感染[1]?！吨袊幍洹?010年版二部收載了利巴韋林原料及利巴韋林注射液，標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定利巴韋林原料及其注射液中單個(gè)雜質(zhì)的峰面積應(yīng)不得大于對照溶液主峰面積的0.25倍（0.25%），各雜質(zhì)峰面積的和應(yīng)不得大于對照溶液的主峰面積（1.0%）[2]。但標(biāo)準(zhǔn)中沒有對利巴韋林注射液的處方進(jìn)行規(guī)定。市售的利巴韋林注射液處方不一，處方中除主藥利巴韋林和溶劑注射用水外，有的廠家處方標(biāo)示添加了氯化鈉，但未標(biāo)明氯化鈉的濃度。筆者對有關(guān)廠家生產(chǎn)的利巴韋林注射液進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)處方中若加有氯化鈉，因利巴韋林雜質(zhì)峰與氯化鈉峰難以分開，對有關(guān)物質(zhì)檢查干擾很大，故在有關(guān)物質(zhì)檢測時(shí)應(yīng)排除氯化鈉峰的影響，或者建議企業(yè)在利巴韋林注射液的處方中標(biāo)注氯化鈉的量或不加氯化鈉以利于檢測。

圖1 利巴韋林化學(xué)結(jié)構(gòu)

1 材料

1.1 藥品與試劑

利巴韋林注射液：①A廠，批號：120710；②B廠，批號：1303136411；③C廠，批號：1306016421；④D廠，批號：1201311；⑤E廠，批號：1308141；規(guī)格均為1 mL∶0.1 g，其中廠家D和廠家E的利巴韋林注射液標(biāo)明處方中含有氯化鈉；其余試劑均為分析純；試驗(yàn)用水為超純水。

1.2 儀器

安捷倫1200高效液相色譜儀，DAD檢測器（美國Agilent公司）；Milli-Q超純水器（美國Millopore公司）；Mettler AE 240電子天平（美國Mettler-Toledo公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：磺化交聯(lián)的苯乙烯二乙烯苯共聚物的氫型強(qiáng)陽離子交換樹脂柱（型號：Rezex，美國Phenomenex公司）；流動相：水（用稀硫酸調(diào)節(jié)pH值至2.5±0.1）；流速：0.6 mL·min-1；檢測波長：207 nm；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：20 μL。理論塔板數(shù)按利巴韋林峰計(jì)不得低于2000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液精密量取利巴韋林注射液1 mL，加流動相稀釋至250 mL，即得。

2.2.2 對照溶液精密量取供試品溶液1 mL，加流動相稀釋至250 mL，即得。

2.3 專屬性試驗(yàn)

在“2.1”色譜條件下，取供試品溶液（廠家A）的未破壞樣品和破壞性樣品（酸破壞：加入1 mol·L-1鹽酸，振搖，室溫放置2 h后，用1 mol·L-1氫氧化鈉中和；堿破壞：加入1 mol·L-1氫氧化鈉，振搖，室溫放置2 h后，用1 mol·L-1鹽酸中和；高溫破壞：90℃水浴放置4 h后，放冷至室溫），分別注入色譜儀，記錄色譜圖，見圖2。另取0.9%氯化鈉注射液1 mL，加流動相稀釋至250 mL，取20 μL注入色譜儀，記錄色譜圖，見圖2。供試品溶液未破壞樣品主要有兩雜質(zhì)峰即1和2，相對保留時(shí)間約為主峰的0.3與0.6。酸破壞后利巴韋林主峰面積顯著減小，雜質(zhì)1的峰面積顯著增大，且峰形分裂為雙峰。堿破壞后利巴韋林主峰面積同樣顯著減小，雜質(zhì)2峰面積顯著增大。高溫破壞后兩個(gè)雜質(zhì)的峰面積也有所增大。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，氯化鈉在利巴韋林的雜質(zhì)1處，也出現(xiàn)吸收峰，且保留時(shí)間非常接近，難以分開。

圖2 有關(guān)物質(zhì)檢查方法專屬性試驗(yàn)色譜圖

2.4 有關(guān)物質(zhì)檢查方法和結(jié)果

取各利巴韋林注射液對照溶液20 μL，分別注入色譜儀，調(diào)節(jié)儀器靈敏度，使主成分峰的峰高約為滿量程的25%。另取各供試品溶液20 μL，分別注入色譜儀，記錄供試品色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍，見圖3?？紤]到處方中含有氯化鈉的利巴韋林注射液未對氯化鈉的濃度進(jìn)行標(biāo)注，參照《中國藥典》2010年版二部葡萄糖氯化鈉注射液中氯化鈉含量測定的方法[3]，對廠家D和廠家E的利巴韋林注射液中氯化鈉的濃度進(jìn)行測定，結(jié)果均為0.9%。因此，配制相應(yīng)的氯化鈉溶液注入色譜儀，有關(guān)物質(zhì)考察時(shí)扣除氯化鈉的峰面積后進(jìn)行計(jì)算。采用不加校正因子的主成分自身對照法，供試品溶液中雜質(zhì)A量、其他雜質(zhì)量和雜質(zhì)總量見表1。

結(jié)果廠家C的利巴韋林注射液的單個(gè)雜質(zhì)的峰面積大于對照溶液主峰面積的0.25倍（0.25%），按照藥典規(guī)定可能判定有關(guān)物質(zhì)檢查不符合規(guī)定。廠家D和E的利巴韋林注射液在扣除氯化鈉峰后，有關(guān)物質(zhì)符合規(guī)定。

3 討論

圖3 利巴韋林注射液（廠家C）有關(guān)物質(zhì)色譜圖

表1 不同廠家生產(chǎn)的利巴韋林注射液有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果

3.1 利巴韋林在《歐洲藥典》5.0版中也有收載，采用同《中國藥典》2010年版二部利巴韋林檢查相同的色譜條件，對相對保留時(shí)間約為主峰0.3處的雜質(zhì)峰進(jìn)行了嚴(yán)格控制，限度為0.1%[4]。該雜質(zhì)峰與《中國藥典》2010年版二部方法測定的利巴韋林雜質(zhì)1的相對保留時(shí)間相同，故推測雜質(zhì)1為利巴韋林的5-O-乙?；a(chǎn)物，是化學(xué)合成利巴韋林的中間產(chǎn)物[5]。

3.2 苯乙烯系強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂，是通過在苯乙烯-二乙烯苯共聚物的苯環(huán)上引入磺酸基團(tuán)制備的，適用于陽離子的分離。利巴韋林為三氮唑核苷，在pH 2．5的流動相條件下呈質(zhì)子化堿，故可通過置換色譜柱上的氫離子而有所保留[6]。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采用《中國藥典》2010年版二部規(guī)定的方法檢查利巴韋林注射液的有關(guān)物質(zhì)時(shí)，對于加有氯化鈉的利巴韋林注射液而言，氯化鈉會在利巴韋林的雜質(zhì)峰處同樣出現(xiàn)吸收峰。文獻(xiàn)報(bào)道，氯離子在200～220 nm范圍內(nèi)有較弱的紫外吸收[7-8]，而且氯離子在磺酸型陽離子交換柱上存在離子排斥，故氯化鈉在色譜柱的接近死時(shí)間處出峰。從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，若不扣除氯化鈉色譜峰面積，有關(guān)物質(zhì)檢查難以判定是否符合規(guī)定。同時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)中未對處方中氯化鈉的濃度進(jìn)行規(guī)定或考察，而氯化鈉的濃度的高低與峰面積大小直接相關(guān)，故含有氯化鈉的利巴韋林注射液應(yīng)當(dāng)對氯化鈉的含量進(jìn)行標(biāo)注。

3.3 考慮到《中國藥典》2010年版利巴韋林測定所使用的流動相中未加甲醇一類的有機(jī)相，具有不可調(diào)節(jié)、選擇性差等缺點(diǎn)，筆者曾嘗試減低流動相的流速或選擇水作為溶劑稀釋供試品溶液，但是氯化鈉色譜峰仍難以與雜質(zhì)1的峰分開。有文獻(xiàn)采用常規(guī)C18柱，以水為流動相對利巴韋林注射液進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的檢查，氯化鈉同樣會干擾其有關(guān)物質(zhì)的檢查[9]。故建議將《中國藥典》利巴韋林有關(guān)物質(zhì)的規(guī)定進(jìn)行修訂，判定結(jié)果描述為供試品溶液的色譜圖中如有雜質(zhì)峰，扣除溶劑及輔料峰，單個(gè)雜質(zhì)峰面積應(yīng)不得大于對照溶液主峰面積的0．25倍（0．25%），各雜質(zhì)峰面積的和應(yīng)不得大于對照溶液的主峰面積（1．0%）?；蚪ㄗh企業(yè)在利巴韋林注射液處方中標(biāo)注氯化鈉的量或不加氯化鈉。

[1] 吳宏富，劉放．反相高效液相色譜法測定利巴韋林注射液的有關(guān)物質(zhì)[J]．藥物鑒定，2009，18（7）：17-8．

[2] 國家藥典委員會．中華人民共和國藥典：二部[S]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：353-4．

[3] 國家藥典委員會．中華人民共和國藥典：二部[S]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：929．

[4] Directorate for the quality of medicines of the council of Europe(EDQM)．European pharmacopoeia fifth edition[S]．2004:2364-5．

[5] 龍?zhí)?，湯芝平，廖洪，等．利巴韋林合成概述[J]．廣州化學(xué)，2008，33（3）：56-60．

[6] L．R．施奈德，J．L．格萊吉克．實(shí)用高效液相色譜方法的建立[M]．第2版：科學(xué)出版社，1998：360-1．

[7] 呂偉，吳介達(dá)．紫外光度檢測離子色譜法測定高濃度氯離子樣品中的痕量溴、碘離子[J]．色譜，1990，8（5）：333-5．

[8] 傅厚暾，趙俐敏，張艷麗．離子色譜法分析加碘食鹽中的微量碘[J]．分析化學(xué)研究簡報(bào)，1999，27（6）：684-6．

[9] 梁翠榮，畢同香，孫吉令．利巴韋林注射液中氯化鈉對有關(guān)物質(zhì)檢查的影響[J]．2000，1（2）：24-5．

Discussion of Related Substance Test Method for Ribavirin Injection in Chinese Pharmacopoeia VolumeⅡ(2010 Edition)

WANG Li,SHEN Lan-hui,CHEN Guo-qing
Wuxi Institute for Food and Drug Control of Jiangsu Province,Wuxi 214028

Objective：To discuss the related substance test method for ribavirin injections．Methods：The related substance test method for ribavirin injections in Chinese Pharmacopoeia VolumeⅡ(2010 Edition)was employed to determine the related substances in ribavirin injections of different manufacturers．Meanwhile,ribavirin injections were subjected to forced degradation studies under different conditions,and the degradation products of ribavirin were detected．Results：The HPLC of this related substance test method could not effectively separate the degradation product of ribavirin from sodium chloride．Conclusion：It is suggested that the peak area of sodium chloride should be deducted in the related substance test for ribavirin injections．In addition,the content of sodium chloride should be described in the prescriptions of ribavirin injections,or sodium chloride should not be included in ribavirin injections．．

Ribavirion;Related substance;Sodium chloride

R927.11

A

1673-7806（2014）06-506-03

王麗（1984-），女，碩士，主管藥師，從事質(zhì)量檢驗(yàn)和標(biāo)準(zhǔn)的研究 E-mail:wangli1984121@163.com

2014-04-14

2014-05-07