蛋白質(zhì)組學(xué)在中醫(yī)證候?qū)W領(lǐng)域的研究

摘要：本文主要概述了中醫(yī)證候?qū)W與蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)合的原理，回顧了近5~10年來蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在中醫(yī)證候?qū)W中的應(yīng)用，并對未來中醫(yī)證候蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展進(jìn)行展望。拓展了蛋白質(zhì)組學(xué)在中醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用領(lǐng)域，從新的視角闡釋中醫(yī)理論的內(nèi)涵。

關(guān)鍵詞：中醫(yī)證候； 蛋白質(zhì)組學(xué)； 中醫(yī)基礎(chǔ)研究

Application of Proteomics in the Field of TCM Syndrome

HONG Ming-chao1，MAO Zhu-jun2

(1.Putuo District Shiquan Street Community Health Service Center，Shanghai 200061，China;2.Longhua Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 200033，China)

Abstract：This paper summarized the main TCM Syndromes of combination principle and proteomics， reviewed the application of proteomics technology in the TCM syndromes in 5~10 years， and the future development of Chinese medicine syndrome proteomics prospect. Expand the application fields of proteomics in medicine， explain the meaning of the theory of traditional Chinese medicine from a new perspective.

Key words：TCM syndromes; Proteomics;Basic research of traditional Chinese Medicine

證候是中醫(yī)學(xué)的重要內(nèi)容，指導(dǎo)著中醫(yī)對疾病發(fā)生、發(fā)展及其表現(xiàn)的認(rèn)識，是認(rèn)識疾病和辨證論治的主要依據(jù)。中醫(yī)證候研究的關(guān)鍵在于從不同的疾病或同一疾病的不同病理階段找出共同的病理環(huán)節(jié)，尋找證候的物質(zhì)基礎(chǔ)和發(fā)生機(jī)理。近年來，中醫(yī)證候?qū)W的發(fā)展和蛋白質(zhì)組學(xué)進(jìn)行交叉，以其獨(dú)特的理論與視角， 給中醫(yī)理論賦予現(xiàn)代最前沿的科學(xué)內(nèi)涵。

1理論基礎(chǔ)

在中醫(yī)學(xué)理論中，辨證論治是最顯著的特點(diǎn)之一，證候則是辨證論治的核心。所謂證候，是在廣泛收集臨床癥狀、體征的基礎(chǔ)上，對疾病過程中某一階段的病理概括。由于它包括了病變的部位、原因、性質(zhì)以及邪正關(guān)系，反映出疾病發(fā)展過程中某一階段的病理變化的本質(zhì)，因而它比癥狀更全面、更深刻、更正確地揭示了疾病的本質(zhì)，并可以表現(xiàn)出\"同病異證、異病同證\"。

證候研究是中醫(yī)基礎(chǔ)研究的一個關(guān)鍵的科學(xué)問題，它也是連接臨床和基礎(chǔ)理論的橋梁。在證候規(guī)范化研究中，證候的診斷標(biāo)準(zhǔn)的研究是一項主體工作，也是證候規(guī)范化研究的重點(diǎn)和難點(diǎn)。

隨著基因圖譜的完成 ，生物醫(yī)學(xué)研究進(jìn)入后基因組時代 ，蛋白質(zhì)作為生命活動的功能物質(zhì)成為人們的研究熱點(diǎn)[1]。蛋白質(zhì)組學(xué)的建立為中醫(yī)證本質(zhì)的研究提供了有效的研究手段。從中西醫(yī)結(jié)合的角度，中醫(yī)證本質(zhì)的含義是指引起證發(fā)生發(fā)展的物質(zhì)基礎(chǔ)，這些物質(zhì)決定著證發(fā)生發(fā)展的動態(tài)變化過程，是在證發(fā)生發(fā)展過程中產(chǎn)生的特殊物質(zhì)[2，3]。利用蛋白質(zhì)組學(xué)研究中醫(yī)的\"證\"，可以揭示與某一證候相關(guān)的所有蛋白質(zhì)及其特征，在分子水平上闡明證的本質(zhì)[4]。

2應(yīng)用研究

近年來應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)進(jìn)行的證候基礎(chǔ)研究主要有動物模型和臨床實(shí)驗兩方面。

2.1動物模型鐘小蘭等以束縛制動法制備肝郁證大鼠模型， 二維凝膠電泳(22DE) 分離大鼠血清蛋白質(zhì)， 獲得差異表達(dá)蛋白質(zhì)；利用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI2TOF2MS) 和數(shù)據(jù)庫分析鑒定差異表達(dá)蛋白質(zhì)，發(fā)現(xiàn)6個具有明顯表達(dá)差異的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，證實(shí)從蛋白質(zhì)組學(xué)的角度研究證實(shí)質(zhì)是可行的[5]。

2.2臨床實(shí)驗按照目前所臨床采集的研究標(biāo)本的種類分類，可分為血液及舌苔兩種類型。

2.2.1血清學(xué)研究劉希成等利用雙向電泳分析的老年體虛腎陽虛患者和正常人的血清樣本，對比分析pH4～7范圍的22DE譜圖，共鑒定出49種差異蛋白質(zhì)，其中有10 種在腎陽虛血清中特異表達(dá)，有6種在健康組血清中特異表達(dá)。蛋白功能分析發(fā)現(xiàn)，其中33種蛋白質(zhì)的差異表達(dá)與腎陽虛證密切相關(guān)，為闡明中醫(yī)腎陽虛證的機(jī)理提供了一條新途徑[6-7]。

曾星等應(yīng)用雙向電泳技術(shù)分析原發(fā)性高血壓肝陽上亢患者及正常對照者外周血單個核細(xì)胞的蛋白圖譜，結(jié)果發(fā)現(xiàn)高血壓肝陽上亢病例獨(dú)自所有的點(diǎn)有515個，可能與高血壓肝陽上亢證候相關(guān)。

王憶勤、李福鳳等采用表面增強(qiáng)激光解吸離子化蛋白質(zhì)芯片分析儀對例慢性胃炎濕證、例濕證治療患者及例正常人血清蛋白質(zhì)表達(dá)譜進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)慢性胃炎濕證患者蛋白質(zhì)質(zhì)譜出現(xiàn)高表達(dá)趨勢其波峰基本在10個單位以上，濕證治療患者與正常人上述波譜峰呈低表達(dá)趨勢濕證治療患者波峰基本在10個單位左右或以下，正常人波峰基本在5個單位以下，證實(shí)血清蛋白質(zhì)組學(xué)分析對探索慢性胃炎濕證的生物學(xué)理論基礎(chǔ)有一定意義。

何磊[8]等采用SELDI-TOF-MS蛋白芯片技術(shù)對慢腎衰患者濕證組與濕證治療組的血清蛋白質(zhì)表達(dá)譜峰進(jìn)行研究，并運(yùn)用層次聚類分析和主成分分析對濕證組和濕證治療組進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)的6個差異蛋白質(zhì)譜峰與這兩組相關(guān)聯(lián)系較密切的血清蛋白質(zhì)因子，且濕證組的差異蛋白質(zhì)譜峰表達(dá)值低于濕證治療組；中醫(yī)虛證各證型組之間的差異蛋白質(zhì)譜峰能在一定程度上區(qū)別各證型組。

2.2.2舌苔研究背景：舌診在中醫(yī)學(xué)中占有十分重要而獨(dú)特的地位。用現(xiàn)代科學(xué)方法闡明舌苔原理、實(shí)現(xiàn)舌苔的客觀化、微觀化，是中醫(yī)現(xiàn)代化基礎(chǔ)研究中的一個重要課題。近年來，也有研究者運(yùn)用現(xiàn)代生命科學(xué)前沿的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)探討舌苔原理及其現(xiàn)代生命科學(xué)本質(zhì)內(nèi)涵，拓展了蛋白質(zhì)組學(xué)在中醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用領(lǐng)域，從新的視角闡釋中醫(yī)理論的內(nèi)涵。

程亞偉等對慢性腎功能衰竭中醫(yī)濕證、濕證治療患者與正常對照組人群舌苔上清液樣本進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究，建立了基于蛋白芯片的舌苔上清液中蛋白的提取方法，應(yīng)用SELDI-TOF-MS技術(shù)篩選出慢性腎衰組與正常對照組舌苔樣本之間有13個差異蛋白質(zhì)譜峰有統(tǒng)計學(xué)意義，為慢性腎衰的早期診斷提供了客觀依據(jù)。并篩選出慢性腎衰中醫(yī)濕證組、濕證治療組及正常對照組之間有11個差異蛋白質(zhì)譜峰有統(tǒng)計學(xué)意義，并發(fā)現(xiàn)四個差異質(zhì)譜峰在慢性腎衰中醫(yī)濕證的發(fā)生發(fā)展中可能具有一定的意義。

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[8]何磊，等.基于SELDI蛋白芯片技術(shù)的慢性腎功能衰竭中醫(yī)濕證的血清蛋白組學(xué)研究[J].中華中醫(yī)藥雜志，2010，11:1892-1894.編輯/哈濤