鹽酸頭孢甲肟雜質(zhì)測定的方法學(xué)驗證

摘 要：對建立的鹽酸頭孢甲肟有關(guān)物質(zhì)測定的方法，進行方法學(xué)驗證。色譜柱：球狀蛋白色譜用親水硅膠為填料的色譜柱，流動相：pH6.5磷酸鹽緩沖液（55：45），檢測波長：231nm，進樣量：20μl。經(jīng)過實驗證明系統(tǒng)適用性：頭孢甲肟峰與其前雜質(zhì)峰分離度為1.95；對照溶液線性和范圍：頭孢甲肟在濃度1.66？滋g/ml～7.92？滋g/ml；檢測限與定量限：檢測限為0.21ng，定量限為0.55ng；溶液進樣精密度：連續(xù)進樣5次，峰面積值的相對標準偏差不大于2.0%，F(xiàn)值測定重現(xiàn)性：F值的日內(nèi)、日間的相對標準偏差均在5%以內(nèi)。綜上，建立的方法準確、可靠，能夠滿足實際生產(chǎn)要求。

關(guān)鍵詞：鹽酸頭孢甲肟；雜質(zhì)；方法學(xué)驗證

1 概述

鹽酸頭孢甲肟是第三代頭孢菌素，對革蘭氏陰性和陽性需氧菌和厭氧菌有抗菌作用。

MMT是由工藝引入的工藝雜質(zhì)，參考JP XVI中關(guān)于MMT的控制方法及限度，采用外標法對MMT進行定量控制，并將限度制訂為1.0%，列入質(zhì)量標準。在前期的實驗中已經(jīng)建立了相關(guān)的檢測方法如下：

儀器：Agilent 1200；色譜柱：球狀蛋白色譜用親水硅膠填料；流動相：pH6.5磷酸鹽緩沖液；檢測波長：231nm；流速：1.0ml/min；進樣量：20μl；分析步驟：精密量取供試品溶液與對照溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，以保留時間小于頭孢甲肟峰的各雜質(zhì)峰面積的和與對照溶液主峰面積做比較。

2 儀器與試劑

儀器：天平：Mettler XS205、高效液相色譜：Agilent1200。

試劑：磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉（分析純、天津市科密歐）。

3 實驗方法

3.1 系統(tǒng)適用性

取本品5.0mg，置于10ml量瓶中，加0.5mol/L的氫氧化鈉溶液1.0ml室溫放置5分鐘，再加0.5mol/L的鹽酸溶液1ml，搖勻，取20μl注入液相色譜儀，記錄結(jié)果。

3.2 對照溶液進樣精密度試驗

精密量取對照溶液20μl，連續(xù)進樣5次，記錄結(jié)果。

3.3 F值重現(xiàn)性考察

F值為對照溶液中的鹽酸頭孢甲肟濃度（mg/ml）與測得的峰面積的比值，每天稱取3份對照品（批號1296661），測定兩天結(jié)果。

3.4 檢測限與定量限

在本實驗條件下，以信噪比S/N=10計算定量限；以信噪比S/N=3計算檢測限。

3.5 有關(guān)物質(zhì)MMT低濃度線性

取鹽酸頭孢甲肟對照品（1296661）25.50mg，置50ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml至50ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，再分別精密量取0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml、1.6ml至10ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取20μl注入液相色譜儀。

4 實驗結(jié)果

4.1 系統(tǒng)適用性

頭孢甲肟峰與其前相鄰降解雜質(zhì)峰的分離度為1.95，分離度達到要求。

4.2 對照溶液進樣精密度試驗

對照溶液重復(fù)進樣峰面積的相對標準偏差不大于2.0%，進樣精密度較好（結(jié)果見表1）。

表1 對照溶液進樣精密度

4.3 F值重現(xiàn)性考察

F值的日內(nèi)、日間的相對標準偏差均在5%以內(nèi)，重現(xiàn)性較好（結(jié)果見表2）。

4.4 檢測限與定量限

在本實驗條件下，以信噪比S/N=10計算，定量限為0.55ng；以信噪比S/N=3計算，檢測限為0.21ng。

4.5 有關(guān)物質(zhì)MMT低濃度線性

試驗結(jié)果表明，鹽酸頭孢甲肟在濃度1.66？滋g/ml～7.92？滋g/ml范圍內(nèi)與峰面積線性相關(guān)性良好（結(jié)果見表3，圖1）。

表3 對照溶液濃度與峰面積線性試驗

圖1 有關(guān)物質(zhì)MMT低濃度線性

5 實驗結(jié)論

以上數(shù)據(jù)說明建立的相關(guān)物質(zhì)檢測方法，系統(tǒng)適用性、對照溶液線性和范圍、檢測限與定量限、溶液進樣精密度、F值測定重現(xiàn)性符合相關(guān)指標和要求，得出如下結(jié)論：建立的方法準確、可靠，能夠滿足實際生產(chǎn)要求。

6 結(jié)束語

鹽酸頭孢甲肟等β-內(nèi)酰胺類抗生素易降解產(chǎn)生雜質(zhì)，本實驗對制定了有關(guān)物質(zhì)MMT的檢測方法進行了系統(tǒng)驗證。經(jīng)典檢測聚合物的方法是采用葡聚糖凝膠G-10為色譜柱，檢測時間長，聚合物與樣品峰分離度差，柱效低，參考中國藥典2010年版二部頭孢地嗪鈉有關(guān)物質(zhì)MMT的檢測方法，以球狀蛋白色譜用親水硅膠為填充劑，主峰前雜質(zhì)與主峰的分離度較好，符合要求，且檢測靈敏度高，準確度好，可用于有關(guān)物質(zhì)的檢測。參考以上實驗，對前期建立的相關(guān)物質(zhì)檢測方法，經(jīng)過方法學(xué)的驗證證實方法的可重復(fù)性高，線性范圍較寬，能夠滿足日常生產(chǎn)的對產(chǎn)品含量測定的要求；回收率驗證體現(xiàn)出了較高的回收效果，能夠有效地提高該產(chǎn)品投產(chǎn)后的生產(chǎn)效率和經(jīng)濟效益。

參考文獻

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