大腸桿菌檢驗(yàn)法分析

大腸桿菌能產(chǎn)生B-葡萄糖醛酸昔酶，能把4-甲基散形酮-葡萄糖醛酸昔酶（MUG）分解為4-甲基散形酮，該分解產(chǎn)物在366 nm紫外光激發(fā)下，產(chǎn)生灰藍(lán)色熒光，即為大腸桿菌陽(yáng)性反應(yīng)；如果沒(méi)有產(chǎn)生灰藍(lán)色熒光，則為陰性反應(yīng)?；诖?，采用MUG試劑為底物制成培養(yǎng)基，以快速檢查大腸桿菌，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組，并與部頒方法進(jìn)行比較。

1檢驗(yàn)方法

1.1菌株大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株（44102）由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，其余7株大腸桿菌由長(zhǎng)春市藥品檢驗(yàn)所提供。

1.2供試品六味地黃丸、百合固金丸、益坤丸、牛黃上清丸、牛黃清胃丸、金匾腎氣丸、銀翹解毒丸、人參歸脾丸、舒肝丸共9種，均由本院藥房提供[1]。

1.3培養(yǎng)基肉湯、肉湯瓊脂、膽鹽乳糖（BL）增菌液、伊紅美藍(lán)（EMB）瓊脂等，均按《藥品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法》制備。MUG培養(yǎng)基：pH 7.6～7.8，MUG 0.075 g，氯化鈣0.05 g，硫酸胺5 g，磷酸二氫鉀0.9 g，硫酸錳0.005 g，硫酸氫二鈉6.2 g，硫酸鋅0.005 g，亞硫酸鈉0.04 g，硫酸鎂0.1 g，蒸餾水1000 mL，氯化鈉10 g，瓊脂（斜面培養(yǎng)基用）15 g。制法：除MUG外，各成分溶解于1000 mL水中，校正pH，加人MUG溶解后，每管分裝5 mL，115℃滅菌15 min。

1.4菌液配制取經(jīng)36℃培養(yǎng)18～24 h大腸桿菌肉湯培養(yǎng)物，稀釋成10-7（含菌50～100個(gè)/mL）備用[2]。

1.5供試液制備按部頒方法制成1∶10供試液備用。

1.6部頒方法分別加供試液各10 mL于2瓶膽鹽乳糖（BL）增菌液中，其中一瓶菌液（10-7）而混勻，同置36℃培養(yǎng)24 h，按部頒方法檢查大腸桿菌，見(jiàn)表1。

1.7取上述2種培養(yǎng)物搖勻分別取0.2 mL，接種在MUG斜面培養(yǎng)基和MUG液體培養(yǎng)基中，同置36℃培養(yǎng)，觀察培養(yǎng)3、5、10、解h后的熒光反應(yīng)，見(jiàn)表1。

2討論

采用MUG液體培養(yǎng)基，較固體斜面培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)反應(yīng)靈敏，對(duì)認(rèn)為染菌的檢品，一般5～24 h能在紫外光（366 nm）下觀察到很強(qiáng)的灰藍(lán)色熒光，即為陽(yáng)性反應(yīng)，本次式樣認(rèn)為污染大腸桿菌的8只檢品，MUC法均呈陽(yáng)性，經(jīng)部頒法確認(rèn)無(wú)誤。除大腸桿菌外，沙門(mén)氏菌，志賀氏菌株也能產(chǎn)生葡萄糖醛酸昔酶，能水解MUG試劑，出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)。

參考文獻(xiàn)：

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].2版.南京：東南大學(xué)出版社，1997.

[2]周道銀.胸腔積液的細(xì)胞學(xué)檢查進(jìn)展[J].上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，1999.

編輯/肖慧