額敏縣弓形蟲病的血清學(xué)調(diào)查

【摘 要】本實(shí)驗(yàn)采用間接血疑實(shí)驗(yàn)（IHA）方法，對(duì)新疆額敏縣主要畜禽品種及犬和貓的弓形蟲感染情況進(jìn)行了調(diào)查。共采集血清樣品1085份，調(diào)查結(jié)果表明牛，羊，豬，蛋雞，肉雞，犬和貓弓形蟲病的感染陽性率分別為2.54%，5.62%，3.48%，0%，0%，4.17%和7.14%。

【關(guān)鍵詞】弓形蟲；間接血疑；感染率；血清學(xué)

弓形蟲病是由剛第弓形蟲（Toxoplasma gondii）引起的一種人畜共患原蟲性疾病。1908年法國(guó)學(xué)者Nicolle和Manceaux在北非剛第最早發(fā)現(xiàn)，蟲體呈弓形，敵命名為剛第弓形蟲。

弓形蟲的感染在人和動(dòng)物中很常見。家畜感染弓形蟲病后，一般無明顯的臨床癥狀，通常呈亞臨床癥狀，或隱性感染，但也可呈散發(fā)性發(fā)病或急性暴發(fā)流行。于恩遮于1955年在我國(guó)福建省首次發(fā)現(xiàn)該病。20世紀(jì)80年代，我國(guó)有多個(gè)省、市、自治區(qū)相繼報(bào)道了豬感染弓形蟲病的情況。新疆自1989年證實(shí)有弓形蟲病以來，1992年首次分離到3株弓形蟲，此后陸續(xù)開展了一些調(diào)查及研究工作，但調(diào)查工作大都局限于人，對(duì)畜禽的調(diào)查很少，為了摸清新疆額敏縣主要畜禽弓形蟲病的感染情況，我們采用了微量間接血疑實(shí)驗(yàn)（IHA），用于檢測(cè)牛，羊，豬，雞，犬和貓的動(dòng)物血清，定性測(cè)定其抗體效價(jià)，結(jié)果如下：

1 材料與方法

1.1 材料

額敏縣牛羊屠宰場(chǎng)，額敏縣獸醫(yī)站共采集各種動(dòng)物血樣1085份。

1.1.1 試劑及儀器

弓形蟲IHA抗原（批號(hào)：070618），稀釋液（批號(hào)：070613），陽性，陰性血清；購(gòu)于血清中國(guó)農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所。96（12×8）孔110。V形有機(jī)玻璃反應(yīng)辦，100ul微量加樣器，振蕩器，小型離心機(jī)，移液管等。

1.1.2 被檢血清牛血清：上戶86份，種羊場(chǎng)150份；

羊血清：突擊294份，二道橋30份，郊區(qū)85份。

豬血清：種羊場(chǎng)115份；

雞血清：蛋雞上戶50份，郊區(qū)137份（包括二道橋30份，突擊46份）；

犬血清：種羊場(chǎng)54份，二道橋42份；

貓血清：種羊場(chǎng)26份，二道橋16份。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 血清分離

無菌采取被檢動(dòng)物靜脈血3～5ml。將所采樣斜置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中1h，之后置于4℃冰箱中，待其折出血清；或1500～2000r/rain離心3min分離血清，凡有溶血者棄之不用。將分離血清-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 檢測(cè)方法

弓形蟲IHA診斷抗原按瓶上標(biāo)示毫升數(shù)加入滅菌蒸餾水稀釋液搖勻，1500刪miLL離心5～10win，棄上清液，加等量稀釋液搖勻，4℃靜置24h后使用。

用微量加樣器往96孔板每孔加75ul稀釋液。每個(gè)樣品加4孔。每塊板設(shè)陽性，陰性對(duì)照。對(duì)照均加8孔。

往各組第1孔加25ul的被檢血清，或陽性血清，或陰性血清。

用加樣器對(duì)每組進(jìn)行1∶4系列稀釋。被檢血清組稀釋至第3孔。陽、陰性對(duì)照組稀釋至第7孔。被檢血清組第4孔，陽，陰性對(duì)照組第8孔為稀釋液。將IHA診斷抗原搖勻，加25ul于每孔中。之后將反應(yīng)板置微型振蕩器上振蕩1～2s，直至診斷夜中的雪球分布均勻，用干凈的玻璃板或紙板蓋住反應(yīng)板，置22～37℃靜置2～3h后觀察結(jié)果。

1.2.3 判定方法

在陽性對(duì)照血清滴度不低于1∶1024（第5孔）；陰性對(duì)照血清除第1孔允許存在前滯現(xiàn)象（+）外，其余各孔均為（-）；稀釋液對(duì)照為（-）的前提下，對(duì)被檢血清進(jìn)行判定，否則應(yīng)重做。間接血凝試驗(yàn)的判定標(biāo)準(zhǔn)如下：

“++++”：100%紅細(xì)胞在孔壁下部呈均質(zhì)的膜樣凝集。邊緣整齊，致密。因重力關(guān)系，膜樣凝集的紅細(xì)胞有時(shí)出現(xiàn)下滑現(xiàn)象。

“+++”：75%的紅細(xì)胞在孔壁下部呈膜樣凝集，不凝集的紅細(xì)胞在孔低中央集中成很小的圓。

“++”：50%的紅細(xì)胞在孔壁更下部呈稀疏的凝集，不凝集的紅細(xì)胞在孔低中央集中成較大的圓點(diǎn)。

“+”：25%的紅細(xì)胞在孔低凝集，其余不凝集的紅細(xì)胞在孔低中央集中成大的圓點(diǎn)。

“-”：所有的紅細(xì)胞均不凝集。并集中于孔低中央呈規(guī)則的最大的圓點(diǎn)。

被檢血清第3孔（1∶64稀釋）達(dá)到“++”或以上，將被檢樣品判為陽性。被檢血清第3孔（1∶64）為“+”或“-”，將被檢樣品判為陰性。

2 結(jié)果

本次調(diào)查過程中，新疆額敏縣家畜中羊的感染率最高，其次是豬，再次是牛，陽性率分別為5.62%，3.48%和2.54%。種羊場(chǎng)的弓形蟲病陽性感染率性相對(duì)較高為7.14%。蛋雞和肉雞的弓形蟲病陽性感染率為0%。隨著寵物的興起，作為弓形蟲惟一終末宿主的貓以及起機(jī)械傳播作用的犬與人們的關(guān)系越來越密切，在弓形蟲病的傳播中起著尤為重要的作用，在本次調(diào)查中，貓和犬感染較高，陽性率分別為7.14%和4.17%。

新疆畜禽弓形蟲病陽性率低于國(guó)內(nèi)一些報(bào)道。王權(quán)2006年報(bào)道上海犬的陽性率為13%，陸艷2005年報(bào)道青海省豬，綿羊陽性率分別為7.19%和4.38%，王天奇2006年報(bào)道洛陽豬陽性率為16.5%，于詠蘭2006年研究報(bào)道北京地區(qū)犬和貓的感染率分別為13.21%和14.06%。其主要原因可能新疆屬于干旱地區(qū)，卵囊在干旱的土壤中不利于傳播有關(guān)，這也與李國(guó)清1990年德觀點(diǎn)相同；其次是由于新疆土地資源廣闊，飼養(yǎng)區(qū)域相對(duì)較大，感染弓形蟲病的幾率相對(duì)較小；再次是由于近15年來隨著畜禽規(guī)模化，集約化養(yǎng)殖逐漸增多，改變了以往家庭式的牛、羊、雞、豬、犬、貓混養(yǎng)的方式，減少了弓形蟲病的傳播機(jī)會(huì)。