消渴湯對(duì)大鼠類胰升血糖素肽—1和胰島素分泌的調(diào)控作用

摘要：目的 研究消渴湯對(duì)NIDDM鼠GLP-1和胰島素的調(diào)控作用。方法 用酶聯(lián)免疫對(duì)正常和NIDDM鼠，在給消渴湯后GLP-1和胰島素變化檢測(cè)。結(jié)果 消渴湯對(duì)正常鼠GLP-1和胰島素分泌無(wú)影響；可使NIDDM鼠口服葡萄糖后GLP-1和胰島素分泌水平增高。結(jié)論 消渴湯可增強(qiáng)NIDDM鼠GLP-1和胰島素分泌。

關(guān)鍵詞：消渴湯；Ⅱ型糖尿病大鼠；類胰升血糖素肽-1；胰島素

Ⅱ型糖尿?。∟IDDM）是中老年人常見(jiàn)病，隨著生活水平提高，發(fā)病率逐年上升。

類胰升血糖素肽-1（Glucagon-like peptide-1，GLP-1）是作用最強(qiáng)腸促胰島素[1]，其作用有很強(qiáng)糖依賴性，可以增加胰島素前體轉(zhuǎn)錄和刺激胰島素合成，是最安全降血糖物質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)用具有降糖作用消渴湯為處理因素。通過(guò)酶聯(lián)免疫對(duì)正常及Ⅱ型糖尿病大鼠在給消渴湯后空腹及口服葡萄糖后GLP-1和胰島素進(jìn)行研究。為臨床進(jìn)行GLP-1治療糖尿病提供新思路并為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。

1資料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及主要試劑

1.1.1健康3個(gè)月齡Wistar雄性大鼠30只，體重200～250 g（佳木斯大學(xué)動(dòng)物中心）。

1.1.2消渴湯（天花粉、山藥等）購(gòu)于佳木斯大學(xué)附屬一院，鏈尿佐菌素（STZ，Sigma公司），GLP-1和胰島素酶聯(lián)免疫測(cè)定盒（北京301放射免疫研究所）。

1.2動(dòng)物模型建立及成功判定標(biāo)準(zhǔn) 大鼠30只，隨機(jī)分成兩組。一組20只有尾靜脈注射25 mg/Kg STZ。2 w后測(cè)糖耐量，選15只異常者喂高脂、高糖、高熱量飼料，為Ⅱ型糖尿病模型組[2]。另一組10只大鼠不注射STZ，正常飲食，為正常對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)第8 w模型組與正常組動(dòng)物分別靜脈取血測(cè)空腹甘油三酯與膽固醇含量，并進(jìn)行葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)。以模型組中體重變化顯著，糖耐量異常，葡萄糖負(fù)荷后2 h血糖值≥11.1 mmol/L，甘油三酯、膽固醇濃度升高，與正常組存在顯著差異者為成功模型。

1.3藥物處理 模型組隨機(jī)分為二組：模型給藥組（A組）、模型對(duì)照組（B組）；正常組隨機(jī)分為二組：正常對(duì)照組（C組）、正常給藥組（D組）。A、D組給予消渴湯3～5 mL/Kg/d；B、C組每日按照同樣計(jì)算方法以蒸餾水灌胃；20 d后測(cè)定空腹、口服葡萄糖后30、60、120 min GLP-1和胰島素水平。

1.4標(biāo)本采集及測(cè)定 將1.5 mL試管預(yù)置0℃冰水中。乙醚淺麻醉，尾靜脈取血1.2 mL加入裝有40000 u/mL抑肽酶20 μL試管中混勻，4℃下4000 rpm離心10 min，分離血清，-80℃保存。

利用生物素和抗生物素蛋白高度結(jié)合后顯色原理進(jìn)行GLP-1（7-36）-amide和胰島素的濃度檢測(cè)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS10.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，在進(jìn)行組間兩兩比較時(shí)使用q檢驗(yàn)；在進(jìn)行多組比較時(shí)采用單因素方差分析；在進(jìn)行兩組比較時(shí)采用t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2結(jié)果

2.1尾靜脈注射STZ制作NIDDM大鼠動(dòng)物模型 模型組體重與正常組體重、血清甘油三酯、膽固醇水平比較有顯著差異（P<0.05）。

2.2消渴湯對(duì)模型組和正常組大鼠空腹及口服葡萄糖后GLP-1和胰島素的影響。A、B組空腹GLP-1和胰島素濃度無(wú)顯著差異（P>0.05）；口服葡萄糖后30 min、60 min、120 min GLP-1和胰島素差異顯著（分別為P<0.05，P<0.01，P<0.01）。C、D組在空腹及口服葡萄糖后GLP-1和胰島素水平無(wú)顯著差異（P>0.05），見(jiàn)表2。

3討論

GLP-1釋放的調(diào)節(jié)機(jī)制非常復(fù)雜，在食物攝入初期，遠(yuǎn)端L細(xì)胞快速釋放GLP-1的機(jī)制還未確定[3]，在此環(huán)路中最有可能發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的物質(zhì)是抑胃肽（GIP）和胃泌素釋放肽（GRP）。GLP-1能增強(qiáng)葡萄糖誘導(dǎo)的胰島素分泌，增強(qiáng)并且刺激胰島素基因表達(dá)與合成，GLP-1作用模式表明它可能用于糖尿病的治療。本實(shí)驗(yàn)中，模型給藥組較對(duì)照組表現(xiàn)為GLP-1和胰島素分泌增強(qiáng)。

消渴湯中天花粉[4]具有負(fù)向免疫調(diào)節(jié)作用，在體外抑制淋巴細(xì)胞對(duì)可溶性抗原的增殖，抑制PHA誘發(fā)淋巴細(xì)胞增殖；山藥能降低糖尿病小鼠組織內(nèi)過(guò)氧化脂質(zhì)含量，糖尿病小鼠體內(nèi)過(guò)氧化脂質(zhì)含量增高，反映小鼠體內(nèi)自由基大量產(chǎn)生和堆積使多器官遭到傷害。自由基對(duì)機(jī)體組織，尤其是對(duì)心臟、肝臟、胰臟和腎臟等器官損害，這可能是糖尿病并發(fā)癥重要原因。麥冬多糖可減弱四氧嘧啶對(duì)胰島B細(xì)胞損傷和改善受損傷的B細(xì)胞功能；藥理研究證實(shí)，人參總皂甙刺激動(dòng)物釋放胰島素作用；枸杞能提高體內(nèi)超氧化物歧化酶（SOD）活性及免疫機(jī)能，對(duì)抗氧化損傷。

消渴湯可能通過(guò)神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)等改善機(jī)體的糖代謝紊亂狀態(tài)，并可能通過(guò)非營(yíng)養(yǎng)因素調(diào)節(jié)提高GLP-1和胰島素水平，具有雙向調(diào)節(jié)作用。

參考文獻(xiàn)：

[1]Goke R， Fehmann HC， Goke B. Glucagon-like peotide （7-36） amide is a new incretin.Eur J Clin Invest，2009，21：135.

[2]于德民，吳銳，尹濰，等.實(shí)驗(yàn)性鏈脲佐菌素糖尿病動(dòng)物模型的研究[J].中國(guó)糖尿病雜志，1995，3（2）：105.

[3]Komats R， Matsuyama T， Namba M， et al. Glucagonostatic and insulinotropic action of glucagon-like peptide-1（7-36）amide[J].Diabetes，1989，38：902.

[4]王筠默，姜名瑛.中藥藥理學(xué)[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1983∶105-108.

編輯/張燕