四種常見瘦肉精檢測方法比較分析

摘 要：本文對“瘦肉精”常見四種檢測方法進行了闡述，對比分析其應(yīng)用優(yōu)缺點，為“瘦肉精”檢測及監(jiān)管提供借鑒，以期更好的維護公共衛(wèi)生安全。

關(guān)鍵詞：瘦肉精；膠體金免疫層析法；酶聯(lián)免疫吸附法；高效液相色譜法；色譜質(zhì)譜串聯(lián)法

中圖分類號：S851 文獻標識碼：A 文章編號：1001-0769（2014）10-0065-01

“瘦肉精”是一類藥物的統(tǒng)稱，主要是腎上腺類、β激動劑、β-興奮劑[1]。我國所說的“瘦肉精”是指克倫特羅，對大多數(shù)動物具有促生長作用，增加動物的瘦肉量，提高飼料轉(zhuǎn)化率，使動物及其肉品提早上市而降低成本、增加利潤。據(jù)報道，使用“瘦肉精”的生豬平均每100 kg可多獲利40～60元。但人食用了含有較高殘留量的“瘦肉精”動物產(chǎn)品后，會出現(xiàn)心跳加快、頭暈、心悸、呼吸困難、肌肉震顫、頭痛等中毒癥狀。同時“瘦肉精”還可通過胎盤屏障進入胎兒體內(nèi)產(chǎn)生蓄積，從而對子代產(chǎn)生嚴重的危害[2]?！笆萑饩睔埩魧θ梭w危害的典型案例就是西班牙克倫特羅牛肝中毒事件。我國政府早在1997年《關(guān)于嚴禁非法使用獸藥的通知》（農(nóng)牧發(fā)【1997】3號）文件中明確禁止“瘦肉精”在飼料和畜牧生產(chǎn)中使用。然而，近幾年國內(nèi)屢屢出現(xiàn)非法使用“瘦肉精”飼喂食豬、羊、牛等牲畜事件，嚴重危害了社會公共衛(wèi)生安全。在對于畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)控過程中，檢測則成為最重要的環(huán)節(jié)之一，目前常用“瘦肉精”檢測方法主要有四種，即膠體金免疫層析法、酶聯(lián)免疫吸附法、高效液相色譜法及色譜質(zhì)譜串聯(lián)法。這四種檢測方法在實際應(yīng)用中各有其優(yōu)缺點，本文結(jié)合“瘦肉精”監(jiān)管工作實際，予以對比分析。

1 膠體金免疫層析法（GICT）

膠體金免疫層析法是以膠體金作為示蹤標志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術(shù)[3]。檢測卡含有被事先固定于NC膜檢測區(qū)（T）的抗原和控制區(qū)（C）Ⅱ抗以及固定于結(jié)合墊上的金標抗體。當樣品中的“瘦肉精”抗原在流動的過程中與膠體金標記的抗體結(jié)合，阻止了抗體和NC膜T線上的抗原結(jié)合，從而導(dǎo)致檢測線顏色深淺的變化。當樣本中沒有“瘦肉精”或“瘦肉精”濃度低于檢測限時，T線顯色，檢測結(jié)果為陰性：當樣本中的“瘦肉精”濃度等于或高于檢測限時，T線不顯色，檢測結(jié)果為陽性；而無論樣本中是否含有“瘦肉精”，C線都會顯色，以示檢測有效。該檢測方法是一種快速定性的檢測方法，其特點是成本低，檢測流程簡單，不需要儀器設(shè)備，使用便捷，結(jié)果易于判讀，可以用于現(xiàn)場檢測，因此基層監(jiān)督檢測人員一般采用該檢測法對活體動物進行大量篩查，檢測樣本一般為尿液或血液。但該檢測方法的靈敏度低，檢測限相對較高，約3 ng/mL，檢測結(jié)果易受人為、環(huán)境等因素的影響而存在一定的誤差，實驗重復(fù)性差，檢測結(jié)果只能作為一種初步判定，如出現(xiàn)陽性樣品，需按照國家檢測標準的法定程序進一步確證。

2 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）

酶聯(lián)免疫吸附法是采用抗原與抗體的特異性反應(yīng)將待測物與酶連接，然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)的一種免疫測定技術(shù)[4]。ELISA檢測方法有雙抗體夾心法測抗原、間接法測抗體、競爭法測抗體等，其基本原理是“瘦肉精”抗體或者抗原以物理性吸附于固象載體表面，并保持其免疫活性，抗體或抗原可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，此種酶結(jié)合物仍保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性。加入待測樣品中的“瘦肉精”與酶結(jié)合物競爭性與固相載體上的“瘦肉精”抗體結(jié)合，酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，洗滌后加底物，根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判斷是否有免疫反應(yīng)的存在，若待測樣本中“瘦肉精”含量高，則被結(jié)合的酶結(jié)合物少，顯色就淺[5]。加入終止液后在酶標儀上450 nm波長處讀取結(jié)果測定樣品中“瘦肉精”的含量。該檢測方法操作方法簡單，對設(shè)備的要求不高，成本較低，靈敏度較高，檢測限較低，一般尿液0.1 μg/L，肉類0.3 μg/kg～0.5 μg/kg，適用于大批量樣品的初步篩查，但不適用于現(xiàn)場檢測。此方法雖然靈敏度較高，但特異性較高效液相色譜法差，不能同時分析多種成分，對有相似結(jié)構(gòu)的物質(zhì)具有一定的交叉反應(yīng)，易出現(xiàn)假陽性，如出現(xiàn)陽性樣品，需按照國家檢測標準的法定程序進一步確證。推薦性檢測標準主要有豬肝中克倫特羅檢測方法—酶聯(lián)免疫測定法（NY/XQ 430-2003）、動物性食品中克倫特羅殘留量的測定酶聯(lián)免疫吸附法（GB/T 5009.192-2003）、農(nóng)牧發(fā)[2001]38號文件“豬尿中克倫特羅檢測方法-酶聯(lián)免疫測定法”、動物性食品中萊克多巴胺殘留檢測酶聯(lián)免疫吸附法（農(nóng)業(yè)部1025公告-6-2008）等。

3 高效液相色譜法（HPLC）

高效液相色譜法又叫高壓或高速液相色譜、高分離度液相色譜或近代柱色譜，以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，是色譜法的一個重要分支。其原理是溶于流動相中的各組分經(jīng)過固定相時，由于與固定相發(fā)生作用的大小、強弱不同，在固定相中滯留的時間也就不同，從而先后從固定相中流出而分離[6]。HPLC是我國檢測“瘦肉精”的半確證法，適合測定熱不穩(wěn)定和強極性的β-激動劑及其代謝產(chǎn)物。該檢測方法速度快，特異性強，分辨率高，靈敏度高，檢測限低，一般尿液、肉類大約為0.5 μg/L，且假陽性率低，可一次檢測多種參數(shù)[7]。但不足之處是步驟多、耗時長、費用高，對儀器設(shè)備及檢測人員的專業(yè)水平要求較高，難以在基層檢測部門推廣應(yīng)用。推薦性檢測標準主要有飼料中鹽酸克倫特羅的測定方法NY 438-2001、飼料中萊克多巴胺的測定高效液相色譜法GB/T 20189-2006等。

4 色譜質(zhì)譜串聯(lián)法

色譜質(zhì)譜串聯(lián)法分為氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）和液相色譜-質(zhì)譜法（LC-MS），其原理是樣品經(jīng)氣相或液相分離的分子受離子源轟擊，電離裂解成分子離子，并進一步碎裂為碎片離子，在電場和磁場綜合作用下，按照M/Z大小進行分離，到達檢測器檢測、記錄和整理，得到質(zhì)譜圖，實現(xiàn)樣品定性定量分析[8]。它的優(yōu)點是把色譜高效快速的分離效果和質(zhì)譜高靈敏度的定性分析有機合起來，能在多種殘留物同時存在的情況下，對某種特定的殘留物質(zhì)進行定性、定量分析。與HPLC法相比，它具有更高的靈敏度和檢測線，最低檢測限可達到0.025 ng，假陽性率更低，因此我國將GC-MS/LC-MS法定為檢測“瘦肉精”的確證方法。但它的缺點同樣是操作步驟多、耗時長、費用高，對儀器及檢測人員檢測水平要求更高，在基層檢測部門基本無法推廣應(yīng)用。推薦性檢測標準主要有豬肝和豬尿中β-受體激動劑殘留檢測氣相色譜—質(zhì)譜法（農(nóng)業(yè)部1031號公告-3-2008）、飼料中13種β-受體激動劑的檢測液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法（農(nóng)業(yè)部1063號公告-6-2008）、豬尿中β-受體激動劑殘留檢測液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法（農(nóng)業(yè)部1025號公告-11-2008）、動物源性食品中β-受體激動劑殘留檢測液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法（農(nóng)業(yè)部1025號公告-18-2008）等。

5 結(jié)語

以上四種檢測方法是目前畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管部門檢測“瘦肉精”殘留最常用的檢測方法，各有特點和不足之處，使用者應(yīng)根據(jù)實際情況適時性選擇合適本部門的檢測方法，以實現(xiàn)畜產(chǎn)品中“瘦肉精”殘留的有效監(jiān)測，進而杜絕“瘦肉精”的非法使用，提高畜產(chǎn)品食用品質(zhì)，保障公共衛(wèi)生安全?！酢?/p>

參考文獻：（8篇，略）