重組雞干擾素α 注射液對雞人工感染新城疫病毒效果的研究

劉珂飛，孟鐵健，高應(yīng)瑞，徐 鑫

（天津生機(jī)集團(tuán)股份有限公司 300384）

雞新城疫是由新城疫病毒引起的一種急性、 高度接觸性傳染病，發(fā)病率和死亡率均很高。 由于新城疫病毒(NDV)毒力增強、基因類型變異，免疫方法不合理，導(dǎo)致ND 屢有發(fā)生，由于其早期癥狀與其他疾病難以區(qū)別，即便確診為新城疫病，緊急接種疫苗也難免造成巨大損失。 干擾素是在機(jī)體細(xì)胞受到病毒感染后誘導(dǎo)白細(xì)胞產(chǎn)生一種廣譜抗病毒的糖蛋白物質(zhì)。 干擾素與細(xì)胞表面特殊的受體結(jié)合而發(fā)揮其抗病毒的DNA 和RNA 合成的作用， 包括對某些酶的誘導(dǎo)作用、 阻止受感染的細(xì)胞中病毒的復(fù)制、抑制細(xì)胞繁殖。 由于IFN-α 廣譜的抗病毒活性，目前人用基因工程重組IFN-α 制劑已作為抗病毒生物制品而廣泛應(yīng)用于臨床。 我們在前期采用重組雞干擾素α 注射液抑制雞胚以及雞胚成纖維細(xì)胞上NDV 試驗取得良好效果的基礎(chǔ)上，為進(jìn)一步探討該藥在臨床上對新城疫的治效果，特進(jìn)行本試驗[1-2]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病毒

雞新城疫病毒NDV F48，臨床分離經(jīng)鑒定后保藏。

1.1.2 藥品與試劑

重組雞干擾素α 注射液，1×108IU/mL，天津生機(jī)集團(tuán)股份有限公司制備。

1.1.3 試驗動物

1 日齡白羽雞兩批，第一批40 只用于測定雞新城疫病毒的半數(shù)致死量（LD50），第二批100 只，隔離飼養(yǎng)，不接種疫苗。 血清學(xué)檢驗其沒有母源抗體后，選取90 只，然后將其隨機(jī)分成6 組，每組15 只。1 組為干擾素預(yù)防組，2 組為干擾素治療組，3 組為中藥預(yù)防對照組，4 組為中藥治療組對照組，5 組為攻毒對照組，6組為空白對照組。

1.2 試驗方法

1.2.1 半數(shù)致死量的測定（LD50）

常規(guī)飼養(yǎng)至1 日齡的白羽雞40 只，每隔三天采血，分離血清，測定血清中新城疫病毒的HI 效價，當(dāng)檢測到HI 變?yōu)榱銜r，選取一致的30 只雞，隨機(jī)分成6 組，每組5 只，用經(jīng)雞胚增殖的新城疫病毒F48 尿囊液進(jìn)行半數(shù)致死量的測定試驗，病毒稀釋梯度依次為10-1、10-2……10-6，共6 組，胸肌注射：1mL/只，連續(xù)觀察7d，記錄死亡結(jié)果，并通過Reed-Muench 法計算其LD50=10-3.32。

1.2.2 接種與給藥

試驗雞胸肌注射100LD50 稀釋的病毒尿囊液1mL； 試驗空白對照組雞胸肌注射1mL 滅菌生理鹽水[3]。 1 組為干擾素預(yù)防組為攻毒前3 天肌肉注射干擾素1×106IU/只，連續(xù)給藥3d。 2 組為干擾素治療組為，在攻毒后出現(xiàn)明顯癥狀時，肌肉注射干擾素1×106IU/只，連續(xù)給藥3d。3 組為中藥預(yù)防對照組，在攻毒前3d 口服中藥制劑（清瘟解毒口服液），連續(xù)給藥3d。 4 組為中藥治療對照組，在攻毒后在攻毒后出現(xiàn)明顯癥狀時，口服中藥制劑（清瘟解毒口服液），連續(xù)給藥3d。5 組為空白對照組，6 組為攻毒對照組。

1.2.3 臨床癥狀觀察

觀察記錄攻毒后各組雞的臨床癥狀和病理變化， 并比較其嚴(yán)重程度，記錄死亡數(shù)、存活數(shù)及各組攻毒后出現(xiàn)癥狀所需要的時間(即潛伏期)，攻毒14d 后結(jié)束觀察。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1 發(fā)病標(biāo)準(zhǔn)：精神沉郁，采食量減少，排黃綠色糞便

1.3.2 臨床癥狀判定

標(biāo)準(zhǔn)輕微：排黃綠色糞便，采食、精神正常；輕者：癥狀出現(xiàn)時間較遲，精神沉郁，采食量略減；重者：癥狀出現(xiàn)時間早，昏睡，呆立不動或臥地不起，采食量減少。

2 結(jié)果與分析

2.1 雞新城疫的預(yù)防與治療結(jié)果

攻毒后24h，2、4、5 組即排綠色糞便，72h 即發(fā)病。 病雞表現(xiàn)精神沉郁、羽毛松亂、垂頭縮頸、翅膀下垂，眼半閉或全閉，似昏睡狀態(tài)，排黃綠色和黃白色稀便，采食量減少。1、2 組防治率分別為93.3%和86.7%，3、4 組治愈率分別為66.7%和60.0%。 5 組為攻毒對照組72h 后雞出現(xiàn)癥狀，至第8d 全部死亡。 空白對照組雞全部正常，未出現(xiàn)死亡；具體見表1。可見干擾素組與中藥對照組相比差異顯著(P＜0.05)；干擾素組與攻毒對照組相比差異極顯著(P＜0.01)。

2.2 臨床癥狀與剖檢情況

2.2.1 臨床癥狀

表1 重組雞干擾素α 注射液對人工感染ND 的防治效果

攻毒后24h，2、4、5 組即排綠色糞便，72h 即發(fā)病。 病雞表現(xiàn)精神沉郁、羽毛松亂、垂頭縮頸、翅膀下垂，眼半閉或全閉，似昏睡狀態(tài)，排黃綠色和黃白色稀便，采食量減少。 攻毒對照組72h后雞出現(xiàn)癥狀，至第8d 全部死亡。 空白對照組雞全部正常，未出現(xiàn)死亡。

2.2.2 剖檢情況

對攻毒后死亡的雞隨時剖檢進(jìn)行觀察，可見腺胃乳頭充血、喉頭、氣管有大量黏液等典型的新城疫癥狀，對治療和預(yù)防組隨時剖檢進(jìn)行觀察，可見病變較攻毒對照組輕或無病變。

3 結(jié)論與討論

雞新城疫是由新城疫病毒引起的病毒性疾病。 干擾素具有廣譜抗病毒作用， 通過誘導(dǎo)細(xì)胞合成抗病毒蛋白而發(fā)揮抑制病毒的作用。 抗病毒蛋白包括蛋白激酶、2'，5' -腺嘌呤核苷合成酶以及磷酸二酯酶，這些酶可切割病毒mRNA，抑制病毒蛋白的合成，也可影響病毒的組裝與釋放，具有抗感染作用。 此外干擾素還能激活NK 細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，增強其對病毒感染細(xì)胞的殺傷作用[4]。

從試驗結(jié)果可以看出， 重組雞干擾素α 注射液預(yù)防組合對照組的保護(hù)率均顯著高于中藥對照組，與攻毒對照組相比差異性極其顯著，病雞的臨床癥狀及病變程度較輕微，尤其是預(yù)防組能延緩癥狀出現(xiàn)的時間和出現(xiàn)死亡的時間， 且保護(hù)率可以達(dá)到93.3%，這充分說明該藥具有較強的抗NDV 的作用。

從試驗結(jié)果可以看出， 重組雞干擾素α 注射液預(yù)防組合對照組的保護(hù)率均顯著高于中藥對照組，與攻毒對照組相比差異性極其顯著，病雞的臨床癥狀及病變程度較輕微，尤其是預(yù)防組能延緩癥狀出現(xiàn)的時間和出現(xiàn)死亡的時間， 且保護(hù)率可以達(dá)到93.3%，這充分說明該藥具有較強的抗NDV 的作用。

雞新城疫是由新城疫病毒引起的病毒性疾病。I 干擾素具有廣譜抗病毒作用，通過誘導(dǎo)細(xì)胞合成抗病毒蛋白而發(fā)揮抑制病毒的作用。 抗病毒蛋白包括蛋白激酶、2' ，5' - 腺嘌呤核苷合成酶(2' ，5' -A 合成酶)以及磷酸二酯酶，這些酶可切割病毒mRNA，抑制病毒蛋白的合成，也可影響病毒的組裝與釋放，具有抗感染作用。 此外干擾素還能激活NK 細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，增強其對病毒感染細(xì)胞的殺傷作用。