薄層掃描法測定梔子中梔子苷的含量

彭金年 程庚金生 張付遠(yuǎn) 李丹丹

摘要[目的]建立利用薄層掃描法測定梔子中梔子苷含量的方法。[方法]樣品經(jīng)超聲提取，采用硅膠G高效薄層板條帶點樣，以氯仿-乙酸乙酯-無水甲醇（3∶2∶1，V/V/V）為展開劑上行展開，在240 nm波長進(jìn)行掃描檢測。[結(jié)果]在0.240～0.640 μg/ml范圍內(nèi)，梔子苷濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=0.999 54，平均回收率為100.45%，RSD為1.69%。[結(jié)論]該方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于贛南野生黃梔子中梔子苷的含量測定。

關(guān)鍵詞薄層掃描法；梔子（FRUCTUS GARDENIAE）；梔子苷

中圖分類號S567.2文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號0517-6611（2014）01-00061-02

作者簡介彭金年（1976- ），女，湖北洪湖人，副教授，博士，從事中藥成分與活性研究，Email：pengjinnian2007@126.com。

收稿日期20131210梔子（FRUCTUS GARDENIAE）為茜草科（Rubiaceae）植物梔子（Gardenia jasminoides Ellis）的干燥成熟果實[1]，具有瀉火除煩、清熱利尿和涼血解毒作用，主治熱病心煩、黃疸尿赤、血淋澀痛、血熱出衄、目赤腫痛、火毒瘡傷和外治扭挫傷痛等[2]。梔子中主含梔子苷（Geniposide）[3]，具有利膽和降壓作用。梔子在許多中成藥配伍中均有應(yīng)用，如黃連解毒湯、龍膽瀉肝丸、復(fù)方梔子沖劑、清淋沖劑、梔子金花丸、牛黃上清軟膠囊、三子散、金花消痤膠囊、石淋止痛劑、六味木香膠囊和小兒退熱軟膏等[4-6]。

在梔子及含梔子制劑分析中，常以梔子苷進(jìn)行質(zhì)量控制和含量測定。近些年來，國內(nèi)外對梔子中梔子苷含測的研究頗多[7-8]，但有關(guān)采用高效薄層色譜法測定梔子中梔子苷含量的研究鮮有報道。筆者采用高效薄層色譜單波長掃描法，建立一種操作方便、快捷，結(jié)果準(zhǔn)確，穩(wěn)定性好梔子中梔子苷含量測定的新方法，以期為梔子中梔子苷的質(zhì)量控制和含量測定提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1研究對象。梔子，于2012年11月中旬采摘于贛南醫(yī)學(xué)院黃金校區(qū)，經(jīng)贛南醫(yī)學(xué)院中藥教研室老師鑒定為茜草科植物黃梔子果實（贛南野生黃梔子）。

1.1.2主要儀器。AB135S型電子分析天平，購自瑞士梅特勒-托利多集團(tuán)；DZF605真空干燥箱，購自上海一恒科學(xué)儀器有限公司；數(shù)控超聲波清洗機(jī)，購自上海聲彥超聲波儀器有限公司；WS701遠(yuǎn)紅外快速干燥器，購自上海景凱科學(xué)儀器有限公司；ADS4C自動點樣儀、ADC2C自動展開儀和Scanner3薄層掃描儀，購自瑞士CAMAG。

1.1.3主要試劑。梔子苷對照品，購自北京世紀(jì)賽科生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)批號為MUST12041808；硅膠G高薄層板（10 cm×10 cm），由青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)；氯仿，乙酸乙酯和甲醇等試劑均為分析純，市售。

1.2方法

1.2.1對照品溶液制備。精密稱取梔子苷2.00 mg，置于25 ml容量瓶中，用無水甲醇定容至刻度，作為對照品溶液。

1.2.2供試品溶液制備。取試驗材料，研碎成粉末，遠(yuǎn)紅外干燥至恒重，精密稱取干燥、粉碎的梔子粉末0.502 4 g，置具塞錐形瓶中，50 ml加入無水甲醇，超聲提取40 min，濾過，取濾液定容至100 ml，作為供試品溶液。

1.2.3薄層層析及薄層掃描條件。硅膠G高效薄層板（10 cm×10 cm），試驗前置電熱干燥箱中110 ℃活化40 min，在干燥環(huán)境中放冷，備用。以氯仿-乙酸乙酯-甲醇（3∶2∶1，V/V/V）為展開劑上行展開70 mm；波長掃描240 nm；狹縫寬度為6.0 mm×0.3 mm。

1.2.4方法學(xué)考察。（1）線性關(guān)系的考察。用卡瑪全自動點樣儀精密吸取上述制備好的對照品溶液（0.08 mg/ml）于同一硅膠G高效薄層板上條帶點樣，點樣量分別為3、4、5、6、7和8 μl，以梔子苷峰面積為縱坐標(biāo)（Y），梔子苷濃度為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算線性回歸方程。（2）穩(wěn)定性試驗。準(zhǔn)確吸取對照品溶液4 μl，自動點樣與展開，對同一硅膠G高效薄層板的同一斑點每隔60 min掃描一次，計算峰面積值的RSD。（3）同板精密度試驗。精密吸取對照品溶液2 μl，在同一硅膠G高效薄層板上平行點樣5次，按色譜條件及掃描條件對樣品進(jìn)行測定，計算各斑點峰面積的RSD。（4）加樣回收率試驗。取5份已知梔子苷含量的梔子提取液400 μl，各加入梔子苷對照品溶液400 μl，混合均勻。分別精密吸取上述混合液2 μl，點于同一硅膠G高效薄層板上，按色譜條件及掃描條件對樣品進(jìn)行測定，計算平均回收率和RSD。

1.2.5樣品的含量測定。精密吸取供試品溶液4 μl，在同一硅膠G高效薄層板上平行點樣4次，按色譜條件及掃描條件對樣品進(jìn)行測定，根據(jù)回歸方程計算樣品中梔子苷的量，再根據(jù)稀釋倍數(shù)及樣品質(zhì)量換算出樣品中梔子苷的百分含量，計算梔子苷平均含量。

2結(jié)果與分析

2.1方法學(xué)考察（1）線性關(guān)系的考察。計算得線性回歸方程為Y=216.700+7.728X，r=0.999 54。試驗結(jié)果表明，在0.240～0.640 μg/ml范圍內(nèi)，梔子苷濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。（2）穩(wěn)定性試驗。計算得峰面積值的RSD為0.74%，表明5 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。（3）同板精密度試驗。計算得各斑點峰面積的RSD為0.91%，表明精密度良好。（4）加樣回收率試驗。計算得平均回收率為100.45%，RSD為1.69%（n=4），表明該方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于贛南野生黃梔子中梔子苷的含量測定。

2.2樣品的含量測定根據(jù)回歸方程計算樣品中梔子苷的量，再根據(jù)稀釋倍數(shù)及樣品質(zhì)量換算出樣品中梔子苷的百分含量，計算得梔子苷平均含量為1.564 0%，RSD為2.62%。

3結(jié)論與討論

（1）試驗所用供試品的處理方法操作簡單、效率高，樣品薄層掃描測定條件適宜，梔子苷分離良好，雜質(zhì)對測定無干擾。檢測方法誤差小、精度高，可用于梔子中梔子苷的含量測定。

（2）展開劑是影響試驗結(jié)果準(zhǔn)確性的一個重要因素。試驗選擇了多種展開劑對供試品與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行展開，包括乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶5∶1∶1，V/V/V/V）、氯仿-乙酸乙酯-無水甲醇（3∶2∶1，V/V/V）和石油醚-乙酸乙酯-甲酸（35∶10∶0.5，V/V/V），結(jié)果表明第2種展開劑的展開效果最好，斑點清晰、Rf值適宜。所以試驗采用氯仿-乙酸乙酯-甲醇（3∶2∶1，V/V/V）為展開劑。

（3）掃描波長的選擇。試驗對梔子苷標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行了光譜掃描，測得梔子苷在240和238 nm處都有最大吸收，進(jìn)而在238、240 nm波長處分別對梔子供試品進(jìn)行掃描，發(fā)現(xiàn)在240 nm處基線平整、沒有小峰、不拖尾，所以選擇波長為240 nmwe梔子苷的測定波長。

參考文獻(xiàn)

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