羊血清防脫片在BENCHMARK?XT自動免疫組化儀上的應(yīng)用

沈洪武 沈靜華

【摘要】在BENCHMARK?XT自動免疫組化儀上，切片在脫蠟后的檢測過程中，覆蓋著輕脂油，用于防止試劑蒸發(fā)和確保試劑整片覆蓋[1]。使用國產(chǎn)防脫片，輕脂油會粘連在切片上，不能確保試劑整片覆蓋，而產(chǎn)生假陰性結(jié)果。羅氏診斷產(chǎn)品有限公司推薦切片烤片后浸泡10%雀巢牛奶水溶液10min，再上機檢測，仍有2.3%的假陰性結(jié)果。作者使用正常非免疫山羊血清涂抹整片防脫片，烤片，裱貼切片，再烤片，上機檢測，沒有假陰性結(jié)果。

【關(guān)鍵詞】羊血清；防脫片；BENCHMARK?XT

【中圖分類號】R4 【文獻標(biāo)識碼】A 【文章編號】1671-8801（2014）10-0014-01

免疫組化使用全自動免疫組化儀檢測與使用手工檢測比較，具有染色結(jié)果穩(wěn)定，顯色定位準(zhǔn)確，背景清楚，重復(fù)性好，解放勞動力等優(yōu)勢。羅氏診斷產(chǎn)品有限公司的BENCHMARK?XT自動免疫組化儀具有上述特點的優(yōu)勢。但是，BENCHMARK?XT自動免疫組化儀對粘附載玻片的要求特別高，目前國產(chǎn)防脫片達不到它的要求。在BENCHMARK?XT自動免疫組化儀上，切片在脫蠟后的檢測過程中，覆蓋著輕脂油，用于防止試劑蒸發(fā)和確保試劑整片覆蓋[1]。使用國產(chǎn)防脫片，輕脂油會粘連在切片上，不能確保試劑整片覆蓋，而產(chǎn)生假陰性結(jié)果。羅氏診斷產(chǎn)品有限公司推薦切片烤片后浸泡10%雀巢牛奶水溶液10min，再上機檢測，仍有2.3%的假陰性結(jié)果。作者使用正常非免疫山羊血清涂抹整片防脫片，烤片，裱貼切片，再烤片，上機檢測，沒有假陰性結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 材料

BENCHMARK?XT自動免疫組化儀（羅氏診斷產(chǎn)品有限公司），20種第一抗體（ER，PR，C-erbB-2，EMA，CEA，CKp，CKh，CK7，Vimentin，S100，SMA，Desmin，CD20，CD79a，CD3，CD43，CD34，Ki67，p53，LCA，福州邁新公司），第二抗體及其它試劑（羅氏診斷產(chǎn)品有限公司），正電荷防脫片（上海太陽公司，T-005-2），正常非免疫山羊血清（福州邁新公司，SP KIT-B3），10%雀巢全脂奶粉水溶液，20種第一抗體的陽性質(zhì)控蠟塊（本實驗室）。

1.2 對照組

待檢測蠟塊和對應(yīng)陽性質(zhì)控蠟塊切片，裱貼于同一張正電荷防脫片上，65℃烤片2h，室溫浸泡10%雀巢全脂奶粉水溶液10min，擦干切片背面，上機檢測。

1.3 實驗組 羊血清防脫片的制作：正常非免疫山羊血清涂抹整片正電荷防脫片，65℃烤片2h。待檢測蠟塊和對應(yīng)陽性質(zhì)控蠟塊切片，裱貼于同一張羊血清張防脫片上，65℃烤片2h，上機檢測。

2 結(jié)果

對照組檢測826片，有19個假陰性片，假陰性率為2.3%。實驗組檢測1488片，沒有假陰性片，假陰性率為0。對照組和實驗組陽性定位準(zhǔn)確，背景清晰，沒有脫片。

3 討論

3.1 在BENCHMARK?XT自動免疫組化儀上，切片在脫蠟后的檢測過程中，覆蓋著輕脂油，用于防止試劑蒸發(fā)和確保試劑整片覆蓋。其前提是切片在脫蠟后必須形成整片的水膜，使輕脂油浮于水膜上，不與切片粘連。因此，該儀器對防脫片的質(zhì)量要求較高。

3.2 事實證明，使用國產(chǎn)防脫片，切片在脫蠟后，組織周圍的烤蠟區(qū)常常會形成疏水區(qū)，引起輕脂油粘連在疏水區(qū)上，不能形成整片的水膜，不能確保試劑整片覆蓋，而產(chǎn)生假陰性結(jié)果。羅氏診斷產(chǎn)品有限公司推薦切片烤片后浸泡10%雀巢牛奶水溶液10min，再上機檢測，仍有2.3%的假陰性結(jié)果。其原因是牛奶不能浸及烤蠟覆蓋的玻璃，烤蠟區(qū)同樣會形成疏水區(qū)，同樣不能形成整片的水膜，不能確保試劑整片覆蓋，而產(chǎn)生假陰性結(jié)果。

3.3 正常非免疫山羊血清含有羊血清蛋白，與牛奶蛋白的作用相同，能使防脫片變成親水性，形成水膜。因為防脫片整片涂抹羊血清，所以能形成整片的水膜，確保試劑整片覆蓋，而不會產(chǎn)生假陰性結(jié)果。同時，正常非免疫山羊血清具有封閉非特異性吸附的作用，能消除因非特異性吸附而引起的非特異性染色，因而，防脫片整片涂抹羊血清不會產(chǎn)生額外的背景。另外，實驗證明，涂抹羊血清不影響防脫片的防脫功能。因此，羊血清防脫片適合在BENCHMARK?XT自動免疫組化儀上應(yīng)用。

參考文獻：

[1]BENCHMARK?XT使用手冊。