禽蛋卵黃抗體檢測(cè)中影響血凝抑制試驗(yàn)結(jié)果的因素分析

莊金秋等

摘 要：血凝抑制試驗(yàn)是檢測(cè)有血凝性的家禽疾病抗體效價(jià)最常用的一種方法，具有簡(jiǎn)便、快速、靈敏、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于各獸醫(yī)檢測(cè)機(jī)構(gòu)和基層養(yǎng)禽場(chǎng)，但是由于試驗(yàn)操作過(guò)程中的不規(guī)范操作和細(xì)節(jié)注意不夠，導(dǎo)致不正確檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，筆者結(jié)合工作實(shí)踐現(xiàn)將禽蛋卵黃抗體檢測(cè)過(guò)程中影響血凝抑制試驗(yàn)結(jié)果的影響因素進(jìn)行分析歸納總結(jié)，以期能對(duì)生產(chǎn)應(yīng)用提供參考。

關(guān)鍵詞：卵黃抗體；血凝抑制試驗(yàn)；檢測(cè)；影響因素

母雞被特定抗原免疫后，產(chǎn)生的特異性抗體除主要以IgG的形式存在于血清中，還可以儲(chǔ)存在卵黃中，被稱為卵黃抗體（IgY）。研究表明，新城疫或禽流感疫苗二免21d后（在有基礎(chǔ)免疫的情況下）卵黃抗體水平與血清抗體水平接近，卵黃抗體水平的大小直接反映了血清抗體水平的高低。在蛋禽疾病防治中，為了及時(shí)掌握禽流感、新城疫、產(chǎn)蛋下降綜合征等疫苗的免疫效果，了解產(chǎn)蛋家禽抗體水平的高低以便制定正確的免疫程序，臨床上需要對(duì)免疫家禽的卵黃抗體水平進(jìn)行多次監(jiān)測(cè)。這在一定程度上避免了因采血測(cè)定血清抗體給家禽造成的應(yīng)激反應(yīng)，不致引起家禽產(chǎn)蛋量的下降。應(yīng)用血凝抑制試驗(yàn)（HI試驗(yàn)）檢測(cè)禽蛋卵黃抗體水平是最簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、準(zhǔn)確的血清學(xué)檢測(cè)方法。但在實(shí)際操作過(guò)程中，由于種種原因，常有檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確或試驗(yàn)失敗的現(xiàn)象發(fā)生，造成不能及時(shí)向送檢單位及時(shí)提供檢驗(yàn)數(shù)據(jù)，進(jìn)而給蛋雞生產(chǎn)但來(lái)不必要的損失。筆者結(jié)合工作實(shí)踐現(xiàn)將禽蛋卵黃抗體檢測(cè)過(guò)程中影響血凝抑制試驗(yàn)結(jié)果的影響因素分析歸納總結(jié)如下，以期為臨床抗體檢測(cè)工作者提供參考。

1 試劑的配制與貯存

1.1 抗凝劑 抗凝劑可選用阿氏液或3.8%的枸櫞酸鈉（檸檬酸鈉）。阿氏液含有枸櫞酸鈉和細(xì)胞需要的養(yǎng)分葡萄糖，配制方法為：稱取葡萄糖2.05g，檸檬酸鈉0.8g，檸檬酸0.055g，氯化鈉0.42g，加超純水至100ml，加熱溶解后將pH值調(diào)到6.1，經(jīng)116℃、20min的高壓滅菌，于4℃保存?zhèn)溆?。阿氏液pH過(guò)低會(huì)引起紅細(xì)胞凝固。3.8%的枸櫞酸鈉配制簡(jiǎn)單，高壓滅菌后同樣置于4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 稀釋液 常用的稀釋液為滅菌的磷酸鹽緩沖液（0.01mol/L，pH7.2 PBS）和生理鹽水（0.85%NaCl溶液），其pH值應(yīng)控制在7.0～7.2。PBS對(duì)其它酸堿物質(zhì)具有較強(qiáng)的緩沖能力，可以維持反應(yīng)體系的酸堿度，提高試驗(yàn)的準(zhǔn)確性。病毒的血凝性一般在pH4.5～7.8較穩(wěn)定，最適pH范圍為6.0～7.2。PBS的pH在5.8以下，紅細(xì)胞易自凝；pH在7.8以上，吸附于紅細(xì)胞上的病毒易脫落，導(dǎo)致凝集圖像不穩(wěn)定，容易消失，對(duì)照有可能不成立；而pH為7.0時(shí)紅細(xì)胞沉淀最充分，圖形最清晰，紅細(xì)胞對(duì)照成立，出現(xiàn)的結(jié)果易判讀。PBS盡可能現(xiàn)用現(xiàn)配，保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，pH會(huì)發(fā)生變化。采用生理鹽水做稀釋液時(shí)，生理鹽水應(yīng)無(wú)菌、無(wú)雜質(zhì)，自制的生理鹽水pH值應(yīng)保持在7.0，如有偏差，可用磷酸二氫鉀調(diào)節(jié)。鹽濃度亦不能過(guò)高，否則NaCl在一定濃度時(shí)會(huì)發(fā)生鹽類凝集現(xiàn)象。用PBS做稀釋液比生理鹽水測(cè)出的抗體效價(jià)要高，可提高檢出率。如果試驗(yàn)結(jié)果要求嚴(yán)格，盡量不要使用生理鹽水，因?yàn)樯睇}水不具備酸堿緩沖能力。

1.3 1%紅細(xì)胞懸液

1.3.1 紅細(xì)胞的宿主來(lái)源 同種禽血清或卵黃抗體與不同種禽紅細(xì)胞之間會(huì)出現(xiàn)非特異性凝集，有時(shí)會(huì)掩蓋特異性抗體血凝抑制，導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)假陰性。如用雞紅細(xì)胞檢測(cè)水禽禽流感抗體時(shí)就可能會(huì)出現(xiàn)非特異性凝集現(xiàn)象，而用水禽紅細(xì)胞檢測(cè)同種水禽的禽流感血清抗體，則可以有效去除血清非特異性凝集的影響，且能更準(zhǔn)確地反映疫苗接種后水禽體內(nèi)的抗體水平。因此，試驗(yàn)中應(yīng)盡可能選擇與宿主來(lái)源相同的紅細(xì)胞懸液檢測(cè)家禽抗體水平。

1.3.2 紅細(xì)胞的宿主要求 來(lái)源于不同個(gè)體的紅細(xì)胞對(duì)病毒的敏感程度會(huì)有所不同，有的個(gè)體紅細(xì)胞有自凝現(xiàn)象，從而影響HI效價(jià)，所以配制雞紅細(xì)胞最好選取2～4只健康、未經(jīng)過(guò)疫苗免疫的成年SPF公雞的混合紅細(xì)胞。條件不足的可選用無(wú)禽流感和新城疫等抗體的健康公雞。另外大型養(yǎng)雞場(chǎng)淘汰的健康公雞，在專用的飼養(yǎng)室飼養(yǎng)6個(gè)月左右，確保體內(nèi)的禽流感和新城疫等抗體水平降低后也可采用。如果用免疫公雞代替SPF公雞，在洗滌紅細(xì)胞時(shí)須增加洗滌次數(shù)和時(shí)間，否則將影響紅細(xì)胞的敏感性。

1.3.3 紅細(xì)胞的采集和制備 采血前先將注射器內(nèi)吸入3.8%枸櫞酸鈉（1份抗凝劑可抗凝4份血液）或阿氏液（抗凝劑和血液等體積）再翅下靜脈采血。采完后將注射器反復(fù)顛倒幾次以充分混勻，防止血液凝固。將所采雞血注入大離心管，加入PBS液或新鮮生理鹽水混勻，1500～2000r/min離心10min，重復(fù)洗滌3～5次，每次離心后用滅菌吸管吸棄掉上清液和白細(xì)胞層，保留紅細(xì)胞層。對(duì)于免疫狀況不明的雞全血，最少洗滌5次，以減少血液中抗體對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。最后一次洗滌離心后，吸去上清液，沿管底部吸取一定量的紅細(xì)胞泥用稀釋液稀釋成1%的紅細(xì)胞懸液，置4℃可保存3～5d。

要控制好配制的紅細(xì)胞濃度，因?yàn)殡S紅細(xì)胞濃度增加，血凝（HA）滴度下降，HI滴度有所上升，而且紅細(xì)胞的濃度越高，出現(xiàn)結(jié)果的時(shí)間越短。配好的紅細(xì)胞懸液要進(jìn)行標(biāo)定：取紅細(xì)胞懸液60ml，自然沉淀后，吸棄稀釋液50ml，混勻后裝入刻度離心管內(nèi)，以10000r/min離心5min，紅細(xì)胞壓積應(yīng)為6%，否則應(yīng)適當(dāng)調(diào)整標(biāo)定。紅細(xì)胞要做沉淀檢查：取96孔V型板一塊，滴一滴紅細(xì)胞懸液到任意孔內(nèi)，室溫靜置20～40min，查看血細(xì)胞沉淀情況，決定是否能用。要想長(zhǎng)期保存可使用紅細(xì)胞醛化法：將離心處理好的紅細(xì)胞加入8倍量體積的冷至4℃的36%甲醛溶液混合均勻，置4℃作用24h，期間不斷輕搖震蕩；2000r/min離心10min，將紅細(xì)胞加入2倍量體積的冷至4℃的30%甲醛溶液混勻，4℃作用24h，離心后紅細(xì)胞用PBS液洗滌5次，最后配成0.75%醛化紅細(xì)胞液，加入終濃度0.1%疊氮納4℃?zhèn)溆谩?.75%醛化紅細(xì)胞懸液可完全替代1%新鮮紅細(xì)胞，并可保存紅細(xì)胞2個(gè)月以上。紅細(xì)胞的洗滌和貯存很關(guān)鍵，如果紅細(xì)胞沒(méi)有洗凈或保存不好，則會(huì)嚴(yán)重干擾試驗(yàn)結(jié)果，出現(xiàn)紅細(xì)胞始終不沉淀或沉淀過(guò)快、部分凝集等。進(jìn)行紅細(xì)胞懸液配制吸取沉淀的紅細(xì)胞時(shí)，要在離心管最底部吸取進(jìn)行稀釋配制，如隨意從沉淀的紅細(xì)胞上層吸取將會(huì)導(dǎo)致配制的紅細(xì)胞懸液濃度偏低，因?yàn)樽詈笠淮坞x心洗滌紅細(xì)胞后棄去的PBS液會(huì)有一些殘留在沉淀的紅細(xì)胞上層。注意紅細(xì)胞在使用時(shí)一定要把沉積的紅細(xì)胞吹散，充分混合均勻。另外，不可使用破裂溶血的紅細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)。

2 試驗(yàn)前準(zhǔn)備

2.1 V型微量反應(yīng)板的選擇 用于血凝抑制試驗(yàn)的微量血凝板一般分為一次性使用的聚苯乙烯塑料反應(yīng)板和可重復(fù)使用的有機(jī)玻璃反應(yīng)板（主要成分為聚甲基丙烯酸甲酯），每種又有96孔和72孔兩種規(guī)格，按孔型又可分為V型和U型兩種。V型具有更典型的凝集模型，U型有時(shí)比V型的血凝效價(jià)高1～2孔。有機(jī)反應(yīng)板因清洗不凈和過(guò)度磨損會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果，因此如果使用有機(jī)反應(yīng)板的話，要注意清洗程序，一定要徹底清洗干凈，磨損嚴(yán)重的有機(jī)反應(yīng)板要及時(shí)淘汰，而使用一次性塑料反應(yīng)板能夠避免清洗不凈和過(guò)度磨損而影響試驗(yàn)結(jié)果的問(wèn)題。試驗(yàn)建議使用一次性96孔V型優(yōu)質(zhì)塑料反應(yīng)板。使用一次性凝集板，要求試驗(yàn)前檢查凝集板，剔除有漏洞、形狀不規(guī)則、板面有褶皺、有接口、板面和板孔不干凈、不光滑的凝集板。根據(jù)不同試驗(yàn)對(duì)反應(yīng)板的要求進(jìn)行選擇，口蹄疫血凝試驗(yàn)要求110°V型反應(yīng)板，而對(duì)新城疫、禽流感等的檢測(cè)，國(guó)標(biāo)中則無(wú)特定要求。有研究證實(shí)，禽流感血凝抑制試驗(yàn)中使用110°和90°兩種V型血凝板，其檢測(cè)結(jié)果無(wú)差異，可以任選一種進(jìn)行試驗(yàn)。使用不合格的反應(yīng)板會(huì)嚴(yán)重影響結(jié)果。反應(yīng)板整包開(kāi)封后，若一次使用不完，應(yīng)保持包裝完整，確保剩余反應(yīng)板的清潔無(wú)磨損。

2.2 微量移液器、槍頭和離心管的選擇與準(zhǔn)備 根據(jù)試驗(yàn)需要選擇合適量程范圍的8道、12道或單道微量移液器及相匹配的槍頭，忌用大量程的移液器移取小體積樣品，否則會(huì)影響移液器的準(zhǔn)確性，槍頭必須安裝牢固，防止漏氣和掉落。移液器吸取液體時(shí)遵循“緩吸快打”原則，使用時(shí)不要用力過(guò)猛，浸入液體深度要合適，不要過(guò)深，角度保持豎直為佳。移液前應(yīng)先預(yù)濕槍頭，按一檔，停留片刻后緩慢平穩(wěn)地吸取液體，絕不能突然松開(kāi)，以防溶液吸入過(guò)快而沖入移液器內(nèi)而產(chǎn)生氣泡。排出樣品時(shí)按二檔徹底排出槍頭內(nèi)的液體。必要時(shí)可采用反向移液法，二檔吸液，一檔排液，將殘余液體隨槍頭棄去，這種方法精確性更高。加樣完畢，把移液器的量程調(diào)至最大值的刻度，使彈簧處于松弛狀態(tài)，利于移液器的保養(yǎng)。使用一段時(shí)間后，要及時(shí)請(qǐng)微量移液器的生產(chǎn)廠家進(jìn)行校正，避免產(chǎn)生錯(cuò)誤或不精確的結(jié)果。

移液器盡量使用高質(zhì)量的、一次性的槍頭，經(jīng)高壓滅菌后備用。如果反復(fù)使用，在使用后應(yīng)立即在消毒液中浸泡，然后經(jīng)超聲波清洗、高壓滅菌后方可反復(fù)使用，使用3～5次后要及時(shí)淘汰，及時(shí)更新。如果質(zhì)量不太好的話，在用多道移液器時(shí)一定要注意安裝上槍頭后管嘴能夠并齊。槍頭一定要與移液器上槍頭套管密封完好，防止由于空氣泄露而造成加樣精度或準(zhǔn)確度的誤差。

離心管可選用1.5ml或2ml的一次性離心管，經(jīng)高壓滅菌后備用。

2.3 抗原和陽(yáng)性血清的制備與貯存 抗原和陽(yáng)性血清一般為凍干制品，應(yīng)-20℃保存。在進(jìn)行抗原效價(jià)的測(cè)定時(shí)，同一種抗原最好兩瓶以上混合后使用，并做重復(fù)試驗(yàn)，取其平均值，減少誤差?？乖哪瘍r(jià)在外界不穩(wěn)定，冷藏保存或反復(fù)凍融時(shí)其效價(jià)降低，因此應(yīng)盡量減少反復(fù)凍融次數(shù)。測(cè)定好效價(jià)的抗原如果一次不能用完時(shí)應(yīng)分裝到滅菌離心管內(nèi)，管上標(biāo)注分裝日期和效價(jià)，每管的分裝量最好是一次使用量，避免反復(fù)凍融。每次試驗(yàn)前必須檢測(cè)抗原的血凝價(jià)，以確定4單位抗原的配制。如果發(fā)現(xiàn)抗原效價(jià)過(guò)低則不能使用。

3 樣品的采集和處理

3.1 雞蛋的選擇 如果檢測(cè)禽群疫苗免疫后的的卵黃抗體水平，應(yīng)隨機(jī)抽取一定數(shù)量的各個(gè)禽群所產(chǎn)禽蛋，兼顧異常蛋與正常蛋。如果用于禽群疾病的檢測(cè)，可選擇異常蛋（白皮、軟皮、畸形蛋，恢復(fù)期產(chǎn)的小蛋，瀕死或死亡雞剖檢的變形卵泡）進(jìn)行抗體檢測(cè)。

3.2 卵黃抗體的提取 由于卵黃萃取方法比直接卵黃稀釋所得檢測(cè)結(jié)果更直觀、準(zhǔn)確且易于判斷，因此建議采用氯仿萃取法提取禽蛋卵黃抗體。將收集的禽蛋應(yīng)用75%酒精消毒蛋殼后，打開(kāi)蛋殼棄去蛋清，用1ml注射器（去掉針頭）或者1ml槍頭（適當(dāng)減掉頭部少許）插入蛋黃內(nèi)部吸取0.4ml蛋黃，置入預(yù)先準(zhǔn)備好的裝有0.4ml PBS的2ml離心管并充分混勻，混合后每管加入0.8ml氯仿，置振蕩器充分混勻后室溫靜置1h，然后4000r/min離心10min，溶液分為3層，吸取上清液備用或置4℃保存（氯仿體積不計(jì)，待檢樣品按被稀釋2倍計(jì)算）。

4 4個(gè)血凝單位（HAU）抗原的制備與貯存

4.1 血凝試驗(yàn) 配制4HAU抗原前需先對(duì)抗原做血凝試驗(yàn)，以抗原與紅細(xì)胞完全凝集的最高稀釋孔作為抗原效價(jià)。應(yīng)按照國(guó)標(biāo)進(jìn)行HA試驗(yàn)操作。先在96孔微量板每排1～12孔內(nèi)加25μl，每種抗原至少加3排，然后在每排第1孔加入25μl準(zhǔn)備好的抗原液，棄掉槍頭后，換新槍頭進(jìn)行1～11孔的倍比稀釋，第11孔稀釋完后吸取25μl棄掉，第12孔為細(xì)胞對(duì)照。為確保配置好的4HAU與HI試驗(yàn)結(jié)果吻合，需每孔補(bǔ)加25μl稀釋液，然后再加入充分混勻的25μl 1%的紅細(xì)胞懸液，確保每孔總體積與HI試驗(yàn)相一致為75μl。置振蕩器震蕩，室溫靜置20～30min或2～8℃ 40min后觀察結(jié)果。有時(shí)候抗原效價(jià)較高，測(cè)定4單位抗原時(shí)第11孔顯示完全血凝，出現(xiàn)這種情況時(shí)，不能斷定抗原血凝單位，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)應(yīng)該將抗原倍比稀釋度繼續(xù)多稀釋2～3個(gè)孔，以出現(xiàn)完全凝集的最高稀釋倍數(shù)代表1個(gè)血凝單位，從而獲得4單位抗原效價(jià)。

4.2 4HAU抗原的配制與貯存 根據(jù)血凝試驗(yàn)結(jié)果，將其除以4作為抗原稀釋倍數(shù)，配制4HAU抗原并充分混勻。為防止4單位抗原配制不準(zhǔn)確，在HI試驗(yàn)前必須做抗原回滴驗(yàn)證，方法同HA試驗(yàn)，要求稀釋的第1孔、第2孔的紅細(xì)胞完全凝集，而第3孔、第4孔部分凝集（紅細(xì)胞在孔壁凝成一紅圈而不是均勻的凝集）或不凝集，即第2孔為完全凝集的終點(diǎn)，則說(shuō)明配制的4單位抗原沒(méi)有問(wèn)題，可以使用。也可先在微量反應(yīng)板的1～4孔分別加入稀釋液25、50、75、100μl，然后在每孔各加入4單位抗原25μl并充分混勻。另取1排反應(yīng)孔，第1孔加入4單位抗原液25μl，第2～5孔分別加入上述稀釋好的1～4孔內(nèi)的抗原液各25μl，6～7孔分別加入25μl稀釋液作紅細(xì)胞對(duì)照，最后吸取1%紅細(xì)胞懸液25μl依次加入1～7孔中，置振蕩器震蕩，室溫靜置20～30min或2～8℃ 40min后觀察結(jié)果。若第1、2、3孔完全凝集，第4、5孔不完全凝集，第6～7孔完全沉淀，則表明配制的4單位抗原準(zhǔn)確，否則需重新測(cè)定抗原效價(jià)。重新配制4個(gè)HAU抗原并做回歸試驗(yàn)，直至結(jié)果準(zhǔn)確。4個(gè)HAU抗原要現(xiàn)用現(xiàn)配，混懸液要混勻，不能長(zhǎng)時(shí)間存放，也不可反復(fù)凍融。配好的抗原室溫下放置不要超過(guò)4h，特別是在夏天氣溫高時(shí)，抗原容易失效。如檢驗(yàn)樣品過(guò)多，4單位抗原添加時(shí)間較長(zhǎng)最好放在冰上進(jìn)行操作，以免抗原失效。4單位抗原即工作抗原的準(zhǔn)確制備是HI試驗(yàn)過(guò)程中的重要環(huán)節(jié)，在HI試驗(yàn)中至關(guān)重要，抗原效價(jià)測(cè)定不準(zhǔn)確對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響很大。過(guò)高，測(cè)定的抗體效價(jià)降低；過(guò)低，測(cè)定的抗體效價(jià)升高。為了得到準(zhǔn)確的抗原效價(jià)，建議試驗(yàn)中同時(shí)進(jìn)行多排測(cè)定，取平均滴度作為抗原的最終效價(jià)。

5 血凝抑制試驗(yàn)操作與結(jié)果判定

5.1 HI試驗(yàn) 4單位抗原配制并驗(yàn)證好后，可進(jìn)行禽蛋卵黃抗體的HI檢測(cè)。取96孔微量反應(yīng)板，按照需要現(xiàn)在每排第2～12孔各加入25μl稀釋液，然后在每排第1孔和第2孔各加入25μl被檢抽提好的卵黃抗體上清液，從每排第2孔開(kāi)始倍比稀釋直到第10孔，第10孔稀釋完后吸取25μl棄掉，這樣稀釋的卵黃抗體濃度為10-1～10-10，第11孔作為抗原對(duì)照，第12孔作為稀釋液對(duì)照。另設(shè)1排1～11孔倍比稀釋的陽(yáng)性血清對(duì)照。被檢禽蛋卵黃抗體樣品和對(duì)照陽(yáng)性血清加完后，微量板每排1～11孔各加入25μl配置好并充分混勻的4單位抗原，最后一排加入25μl稀釋液，將微量板置震蕩器，充分震蕩1min后室溫放置20～30min。最后取反應(yīng)板，每孔加入25μl配置好并充分混勻的1%紅細(xì)胞懸液，充分震蕩后室溫放置20～30min或2～8℃ 40min后，觀察結(jié)果并讀數(shù)。

5.2 結(jié)果判定 結(jié)果判定時(shí)，以完全抑制4單位抗原的卵黃抗體最高稀釋倍數(shù)作為HI效價(jià)。將微量反應(yīng)板傾斜45°，孔底沉淀的紅細(xì)胞流動(dòng)性好，呈淚滴樣流淌，邊緣無(wú)凝集顆粒者為凝集完全抑制。淚滴長(zhǎng)度可參照稀釋液對(duì)照孔，與稀釋液對(duì)照孔淚滴長(zhǎng)度相同的孔為完全抑制孔。如果淚滴樣流淌線較細(xì)，可能是反應(yīng)時(shí)間不夠，需靜置一段時(shí)間再判讀。淚滴長(zhǎng)度會(huì)隨時(shí)間變化，所以判斷時(shí)應(yīng)迅速。在判定結(jié)果時(shí)，首先要觀察對(duì)照是否成立。HI試驗(yàn)對(duì)照成立的條件是：陽(yáng)性血清對(duì)照孔誤差不超過(guò)1個(gè)滴度，4單位抗原對(duì)照完全凝集，稀釋液對(duì)照完全不凝集。只有在對(duì)照成立的條件下試驗(yàn)結(jié)果才有效，否則需要重檢。卵黃抗體樣品HI效價(jià)小于或是等于3log2判定HI試驗(yàn)陰性；等于4log2為可疑，需重復(fù)試驗(yàn)；大于或等于5log2為陽(yáng)性。讀結(jié)果的具體時(shí)間要根據(jù)實(shí)際情況而定，不要一味的按照國(guó)標(biāo)所規(guī)定的時(shí)間來(lái)，溫度對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的顯示有一定的影響，在等待結(jié)果時(shí)不要頻繁的翻動(dòng)反應(yīng)板。讀結(jié)果時(shí)不宜時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，否則將影響結(jié)果的顯示與判定。環(huán)境溫度對(duì)結(jié)果的出現(xiàn)影響很大。溫度過(guò)低，出現(xiàn)結(jié)果要慢；環(huán)境溫度過(guò)高，超過(guò)30℃時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)得要快，一旦時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，結(jié)果就會(huì)消失，使整板無(wú)凝集現(xiàn)象。另外，不要將反應(yīng)板放置于風(fēng)扇、空調(diào)或風(fēng)機(jī)出風(fēng)口，以免液體揮發(fā)較快，影響試驗(yàn)結(jié)果。

6 小結(jié)

綜上所述，在血凝抑制試驗(yàn)中，影響試驗(yàn)結(jié)果的因素很多，只有嚴(yán)格遵守各項(xiàng)操作規(guī)程，耐心細(xì)致地做好每一個(gè)環(huán)節(jié)，同時(shí)綜合考慮各方面的因素，發(fā)現(xiàn)問(wèn)題及時(shí)糾正處理，才能保證試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確，從而準(zhǔn)確評(píng)價(jià)雞群免疫的效果。