山茱萸不同部位提取物對(duì)α—葡萄糖苷酶的抑制作用

摘要[目的]測(cè)定山茱萸果肉和果核提取物對(duì)α葡萄糖苷酶的抑制作用，為山茱萸資源的藥用開(kāi)發(fā)提供參考。[方法]采用乙醇和水分別對(duì)山茱萸果肉和果核進(jìn)行提取，并測(cè)定其對(duì)α葡萄糖苷酶的抑制作用。[結(jié)果]山茱萸果核提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制率分別為20倍醇提99.23%、30倍醇提98.96%、40倍醇提99.29%、20倍水提99.36%、30倍水提99.32%、40倍水提99.17%。山茱萸果肉提取物對(duì)α葡萄糖苷酶的抑制率分別為20倍醇提52.10%、30倍醇提60.77%、40倍醇提21.67%、20倍水提11.88%、30倍水提0.53%、40倍水提1.59%。[結(jié)論]山茱萸不同部位的水提取物和乙醇提取物對(duì)α葡萄糖苷酶均有一定的抑制作用，其中山茱萸果核部位對(duì)α葡萄糖苷酶的抑制作用最為顯著，其抑制率可高達(dá)99%以上，可見(jiàn)山茱萸果核中含有豐富的抑制α葡萄糖苷酶活性的物質(zhì)，可作為藥用資源予以開(kāi)發(fā)利用。

關(guān)鍵詞山茱萸；α葡萄糖苷酶；抑制作用

中圖分類(lèi)號(hào)S567文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）23-07741-02

作者簡(jiǎn)介張夙夙（1993- ），女，山東營(yíng)口人，本科生，專(zhuān)業(yè)：生物技術(shù)。

收稿日期20140703山茱萸（Cornus officinalis Sieb.et Zucc.）別名蜀棗、鼠矢、雞足、山萸肉、實(shí)棗兒、棗皮、萸肉等，原植物為山茱木屬落葉小喬木[1]。我國(guó)河南、浙江、陜西、山西、安徽、四川等地均有分布和種植[2-3]。其性味酸、澀，微溫，歸肝、腎經(jīng)，是中醫(yī)臨床常用的名貴傳統(tǒng)抗衰老藥物之一[4]。已有研究表明，山茱萸主要具有免疫調(diào)節(jié)、降血糖、抗氧化及抗癌等作用[5]。山茱萸常出現(xiàn)在中藥降血糖的組方中，目前的研究表明山茱萸的水提取物、乙醇提取物及其具體成分苷類(lèi)、鞣質(zhì)、糖蛋白、多糖、有機(jī)酸等均有降血糖的作用[6-7]。該試驗(yàn)采用乙醇和水分別對(duì)山茱萸果肉和果核進(jìn)行提取，并測(cè)定其對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用，進(jìn)而反應(yīng)山茱萸的降血糖作用。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料試驗(yàn)所用的山茱萸來(lái)自陜西佛坪。將采摘的山茱萸果實(shí)洗凈晾干，果肉和果核分離并分別粉碎備用。試驗(yàn)試劑主要包括乙醇、α葡萄糖苷酶、對(duì)硝基苯酚αD葡萄糖苷（PNPG）、K3HPO4、K3HPO4·3H2O等，主要儀器包括超聲儀、抽濾泵、抽濾瓶、布氏漏斗、試管、濾紙、96孔板、玻璃棒、水浴鍋、離心管、移液槍、酶標(biāo)儀等。

1.2樣品制備分別精密稱(chēng)取1 g山茱萸果核和果肉，加入20 ml 70%乙醇，于37 ℃下超聲提取30 min，抽濾，定容至20 ml。用乙醇稀釋為20、30和40倍的體系作為樣品溶液。分別精密稱(chēng)取1 g山茱萸果核和果肉，加入20 ml蒸餾水，于37 ℃下超聲提取30 min，抽濾，定容至20 ml。用水稀釋為20、30和40倍的體系作為樣品溶液。

以醇提山茱萸果肉為例說(shuō)明稀釋倍數(shù)，稀釋20倍為50 μl醇提樣品+950 μl 70%乙醇，稀釋30倍為30 μl醇提樣品+870 μl 70%乙醇，稀釋40倍為25 μl醇提樣品+975 μl 70%乙醇。

1.3測(cè)定酶抑制率

1.3.196孔板的加樣。在96孔板中依次加樣，其中樣品對(duì)照組為樣品溶液8 μl+磷酸鉀緩沖液150 μl，樣品測(cè)定組為樣品溶液8 μl+3 U/ml α-葡萄糖苷酶15 μl+磷酸鉀緩沖液150 μl，對(duì)照組為3 U/ml α-葡萄糖苷酶15 μl + 磷酸鉀緩沖液150 μl，空白對(duì)照組為磷酸鉀緩沖液150 μl。以果肉對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制作用的測(cè)定為例，A1、A3和A5為果肉醇提取物的樣品對(duì)照組，A2、A4和A6為果肉醇提物的樣品測(cè)定組，其中A1和A2加的樣品溶液為果肉的20倍醇提取物，A3和A4加的樣品溶液為果肉的30倍醇提取物，A5和A6加的樣品溶液為果肉的40倍醇提取物；A7、A9和A11為果肉水提取物的樣品對(duì)照組，A8、A10和A12為果肉水提取物的樣品測(cè)定組，其中A7和A8加的樣品溶液為果肉的20倍水提取物，A9和A10加的樣品溶液為果肉的30倍水提取物，A11和A12加的樣品溶液為果肉的40倍水提取物；B和C兩行分別是A的重復(fù)試驗(yàn)，E和F兩行分別是D的重復(fù)試驗(yàn)（）。

1.3.2光密度的測(cè)定。37 ℃恒溫水浴15 min后，對(duì)照組和樣品測(cè)定組分別加入10 mmol/L的PNPG 30 μl，37 ℃恒溫反應(yīng)15 min后，樣品對(duì)照組、樣品測(cè)定組、對(duì)照組和空白對(duì)照組分別加入濃度為0.2 mol/L的Na2CO3溶液40 μl，利用酶標(biāo)儀于405 nm波長(zhǎng)下測(cè)定光密度（OD）。

1.3.3酶抑制率的計(jì)算。根據(jù)該試驗(yàn)方法按公式計(jì)算樣品的抑制率，即樣品的百分抑制率I（%）=[1-（c-d）/（a-b）]×100%，式中，a、b、c、d分別為對(duì)照組、空白對(duì)照組、樣品測(cè)定組、樣品對(duì)照組的OD值。

2結(jié)果與分析

從山茱萸不同部位提取物對(duì)葡萄糖苷酶的抑制率（）可以看出，山茱萸果核提取物對(duì)α葡萄糖苷酶的抑制率分別為20倍醇提99.23%、30倍醇提98.96%、40倍醇提9929%，20倍水提9936%、30倍水提99.32%、40倍水提9917%；山茱萸果肉提取物對(duì)α葡萄糖苷酶的抑制率分別為20倍醇提52.10%、30倍醇提60.77%、40倍醇提21.67%，20倍水提11.88%、30倍水提0.53%、40倍水提1.59%?？梢?jiàn)，山茱萸果核提取物對(duì)α葡萄糖苷酶的抑制率明顯高于山茱萸果肉提取物對(duì)α葡萄糖苷酶的抑制率；其中對(duì)于山茱萸果肉有效成分的提取，20倍醇提和30倍醇提的效果較好，水提的效果并不理想；而對(duì)于山茱萸果核有效成分的提取，水提和醇提的效率均很高，基本維持在99%以上。該研究結(jié)果表明，山茱萸不同部位的水提取物和乙醇提取物對(duì)α葡萄糖苷酶均有一定的抑制作用，其中山茱萸果核部位對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用最為顯著，其抑制率可高達(dá)99%以上，可見(jiàn)山茱萸果核中含有豐富的抑制α葡萄糖苷酶活性的物質(zhì)，可作為藥用資源予以開(kāi)發(fā)利用。

96孔板的加樣順序

山茱萸不同部位提取物對(duì)葡萄糖苷酶的抑制率%

提取物果肉20倍30倍40倍果核20倍30倍40倍乙醇提取物52.1060.7721.6799.2398.9699.29水提取物11.880.531.5999.3699.3299.17

3結(jié)論

采用乙醇和水分別對(duì)山茱萸果肉和果核進(jìn)行提取，測(cè)定山茱萸果肉和果核提取物對(duì)α葡萄糖苷酶的抑制作用，進(jìn)而反應(yīng)山茱萸的降血糖作用。研究結(jié)果表明，山茱萸果核提取物對(duì)α葡萄糖苷酶的抑制率明顯高于山茱萸果肉提取物對(duì)α葡萄糖苷酶的抑制率；其中對(duì)于山茱萸果肉有效成分的提取，20倍醇提和30倍醇提的效果較好，水提的效果并不理想；而對(duì)于山茱萸果核有效成分的提取，水提和醇提的效率均很高?？梢?jiàn)，山茱萸不同部位的水提取物和乙醇提取物對(duì)α葡萄糖苷酶均有一定的抑制作用，其中山茱萸果核部位對(duì)α葡萄糖苷酶的抑制作用最為顯著，其抑制率可高達(dá)99%以上，說(shuō)明山茱萸果核中含有豐富的抑制α-葡萄糖苷酶活性的物質(zhì)，可作為藥用資源予以開(kāi)發(fā)利用，為山茱萸資源的藥用開(kāi)發(fā)提供參考。

參考文獻(xiàn)

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