HIV抗體快速檢測(cè)在自愿咨詢(xún)檢測(cè)中的應(yīng)用

施玉華，蘇瑩珍，方清艷，陳敏，崔文慶，陳會(huì)超，蘇興芳，馬艷玲

HIV抗體快速檢測(cè)在自愿咨詢(xún)檢測(cè)中的應(yīng)用

施玉華，蘇瑩珍，方清艷，陳敏，崔文慶，陳會(huì)超，蘇興芳，馬艷玲

目的在AIDS自愿咨詢(xún)檢測(cè)（voluntary counselling and testing,VCT）中應(yīng)用快速檢測(cè)，并與免疫印跡試驗(yàn)（western blotting,WB）結(jié)果比較，探討進(jìn)一步縮短確證時(shí)間及提高HIV感染者CD4+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)率的措施。方法用2種快速試劑進(jìn)行篩查，對(duì)一陰一陽(yáng)或雙陽(yáng)性樣本進(jìn)行WB確證檢測(cè)，并比較和評(píng)價(jià)檢測(cè)結(jié)果，同時(shí)采集患者血樣行CD4+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)。結(jié)果1435份樣本中，1種或2種快速試劑檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性有398份，經(jīng)WB檢測(cè)確證377份陽(yáng)性，符合率94.7%；2種快速試劑檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性的有379份，WB檢測(cè)確證376份陽(yáng)性，符合率99.2%；2種快速試劑檢測(cè)結(jié)果為陰性的有1037份，經(jīng)PCR檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)HIVRNA陽(yáng)性樣本。結(jié)論在VCT及各種應(yīng)急檢測(cè)時(shí)，可用快速試劑進(jìn)行篩查，然后WB確證，以縮短等待時(shí)間，提高CD4+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)率。同時(shí)為保證檢測(cè)質(zhì)量，以防漏檢，推薦使用2種質(zhì)量?jī)?yōu)良的快速試劑同時(shí)篩查。

HIV抗體；印跡法，蛋白質(zhì)；咨詢(xún)

HIV抗體篩查試驗(yàn)有多種，目前國(guó)內(nèi)應(yīng)用最廣泛的是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA），其靈敏度和特異度較高，價(jià)格便宜，適用于臨床血液篩查等大樣本量檢測(cè)[1]。但其需要相應(yīng)的儀器設(shè)備及受過(guò)特殊培訓(xùn)的技術(shù)人員，檢測(cè)反應(yīng)也需要一定的時(shí)間，每次檢測(cè)須設(shè)置5～6個(gè)對(duì)照，基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)通常會(huì)將樣本積攢到一定量再進(jìn)行檢測(cè)，影響檢測(cè)結(jié)果的及時(shí)性。對(duì)于許多檢測(cè)資源有限，樣本量較少的HIV/AIDS自愿咨詢(xún)檢測(cè)（voluntary counselling and testing,VCT）場(chǎng)所和小型實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō)，操作簡(jiǎn)單、快速且無(wú)需特殊儀器設(shè)備，可進(jìn)行單份樣品檢測(cè)的快速檢測(cè)法（rapid test,RT）更適用。為探討RT診斷HIV感染的可行性及其應(yīng)用中應(yīng)注意的問(wèn)題，我們用2種RT試劑對(duì)本中心VCT門(mén)診服務(wù)對(duì)象行HIV抗體篩查，結(jié)果為一陰一陽(yáng)或雙陽(yáng)的樣本以免疫印跡試驗(yàn)法（western blotting,WB）確證，雙陰樣本行PCR檢測(cè)，并就RT與WB檢測(cè)結(jié)果的一致性進(jìn)行比較。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料1435份樣本為2010年10月—2011年4月云南省疾病預(yù)防控制中心VCT門(mén)診提供。

1.2 試劑

1.2.1 篩查試劑①RT試劑1（RT1）：SD人類(lèi)免疫缺陷病毒抗體檢測(cè)試劑盒，膠體金法，SD STANDARD DIAGNOSTICS，INC公司（韓國(guó)）生產(chǎn)；②RT試劑2（RT2）：Determine人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV）1┼2型抗體診斷試劑盒，膠體硒法，Inverness Medical有限責(zé)任公司（日本）生產(chǎn)。

1.2.2 確證試劑采用WB確證，試劑由MP生物醫(yī)學(xué)亞太私人有限公司（新加坡）生產(chǎn)。

1.2.3 PCR檢測(cè)試劑采用NucliSENSEasyQ?HIV-1 v1.0，生物梅里埃有限公司（法國(guó)）生產(chǎn)。所有試劑符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)并在有效期內(nèi)使用，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，同時(shí)參考《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（2009年修訂版）》[2]判定結(jié)果。

1.3 方法用2種RT試劑進(jìn)行篩查，對(duì)一陰一陽(yáng)或雙陽(yáng)性樣本行WB確證，比較并評(píng)價(jià)檢測(cè)結(jié)果。對(duì)2種試劑檢測(cè)結(jié)果均為陰性的樣本，使用PCR檢測(cè)是否有HIV RNA陽(yáng)性樣本。計(jì)算RT與WB的陽(yáng)性符合率。

2 結(jié)果

2.1 RT陽(yáng)性樣本與WB確證結(jié)果比較結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 RT陽(yáng)性與WB確證結(jié)果比較Table 1 Com parison of the positive results between RT and WB

2.2 陽(yáng)性符合率1435份樣本中，2種RT試劑檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性的樣本379份，經(jīng)WB確證376份陽(yáng)性，陽(yáng)性符合率99.2%；單陽(yáng)或雙陽(yáng)398份，經(jīng)WB確證377份陽(yáng)性，陽(yáng)性符合率94.7%；單獨(dú)1種RT試劑檢測(cè)為陽(yáng)性的樣本數(shù)分別為388和389份，經(jīng)WB確證分別有376和377份陽(yáng)性，陽(yáng)性符合率均為96.9%。

2.3 漏檢情況1435份中，2種RT試劑檢測(cè)結(jié)果均為陰性的有1037份，經(jīng)PCR檢測(cè)全部為陰性。

3 討論

近年來(lái)，隨著發(fā)病和死亡人數(shù)大幅增加，AIDS疫情波及范圍逐漸擴(kuò)大，態(tài)勢(shì)日益嚴(yán)峻，HIV感染診斷對(duì)遏止AIDS流行的重要作用也日益突顯。HIV感染的確診主要依靠實(shí)驗(yàn)室診斷，而實(shí)驗(yàn)室診斷又主要依賴(lài)HIV抗體檢測(cè)結(jié)果，因而選擇適合的HIV抗體檢測(cè)試劑及策略十分重要。目前，我國(guó)篩查HIV抗體最常見(jiàn)的是ELISA、顆粒凝集法和其他RT方法，隨后用WB確證[2]。ELISA因其靈敏度高，特異性強(qiáng)，結(jié)果易保存等優(yōu)點(diǎn)被廣泛使用[3]。然而ELISA所需時(shí)間較長(zhǎng)，受檢者等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，從而導(dǎo)致隨訪率下降，CD4+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)率低等現(xiàn)象[4]。

RT因其操作簡(jiǎn)單、快速等優(yōu)點(diǎn)被很多機(jī)構(gòu)和醫(yī)療單位用于HIV抗體初篩[5]。但其靈敏度和特異度略低于ELISA，不可避免地會(huì)出現(xiàn)一些假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果[6]。從本次研究結(jié)果來(lái)看，2種RT試劑檢測(cè)均為陽(yáng)性的樣本與WB確證結(jié)果的符合率（99.2%）高于單用1種RT試劑檢測(cè)為陽(yáng)性的樣本與WB確證的符合率（96.9%）。對(duì)2種RT試劑檢測(cè)均為陰性的1037份樣本進(jìn)行PCR檢測(cè)，陰性符合率為100%。由此得出，使用2種RT試劑平行檢測(cè)可盡可能降低假陽(yáng)性和假陰性率。本研究有1份經(jīng)WB確證結(jié)果為陽(yáng)性的樣本，2種RT試劑檢測(cè)為一陰一陽(yáng)。提示在實(shí)際工作中，推薦使用2種質(zhì)量?jī)?yōu)良的RT試劑平行進(jìn)行篩查檢測(cè)，以提高陽(yáng)性檢出率。

本研究還得出，2種RT試劑檢測(cè)均為陽(yáng)性的樣本與WB確證的陽(yáng)性符合率為99.2%，低于高危人群的VCT替代檢測(cè)策略（2種篩查試劑陽(yáng)性，第3種ELISA試劑陽(yáng)性且S/CO≥6.0，與WB檢測(cè)陽(yáng)性符合率為100%）[7]。因此2種RT試劑檢測(cè)陽(yáng)性的樣本，仍存在一定的假陽(yáng)性可能。下一步將對(duì)3種RT試劑與WB檢測(cè)的符合性進(jìn)行評(píng)價(jià)，探討高危人群VCT替代策略。

有研究報(bào)道，與ELISA相比RT更適用于偏遠(yuǎn)地區(qū)血液篩查、臨床做侵入性檢查及現(xiàn)場(chǎng)急救檢測(cè)等，一般不作為常規(guī)方法[8]。但隨著HIV感染者的增多、預(yù)防AIDS宣傳及健康教育工作的開(kāi)展、人群AIDS防治措施知曉率的提高以及各地VCT工作的逐步開(kāi)展，人們對(duì)HIV檢測(cè)需求越來(lái)越大[9]。研究表明RT在男男同性戀人群的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)中可取得較好的效果，極大地消除了HIV感染者被發(fā)現(xiàn)后得不到及時(shí)、有效控制和管理的隱患[10-11]。RT在VCT工作中的應(yīng)用同樣具有重要的意義，咨詢(xún)者往往希望在最短時(shí)間內(nèi)知道自己的感染狀況，等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)易導(dǎo)致咨詢(xún)者脫失[12]。而提供咨詢(xún)者也希望根據(jù)結(jié)果提供及時(shí)的咨詢(xún)服務(wù)，并及時(shí)提供CD4+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)及后續(xù)的轉(zhuǎn)介治療等服務(wù)。RT具有快速、可檢測(cè)單份樣本、不需額外儀器設(shè)備和操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，可減輕檢測(cè)者在等待結(jié)果期間的焦慮，增加檢測(cè)后咨詢(xún)的人數(shù)。采用RT檢測(cè)與WB確證相結(jié)合進(jìn)行HIV感染診斷，可縮短反饋時(shí)間，提高陽(yáng)性結(jié)果告知率及CD4+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)率（本中心VCT室自采用該策略以來(lái)，初次采血至確證結(jié)果告知從3～5個(gè)工作日縮短至2～3個(gè)工作日，獲取CD4+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果從7個(gè)工作日縮短至2～4個(gè)工作日，CD4+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)率從約85%提高到99%以上），有利于在資源有限地區(qū)擴(kuò)展VCT服務(wù)，減少HIV的傳播機(jī)會(huì)，盡多和盡早發(fā)現(xiàn)感染者，在經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)且AIDS流行嚴(yán)重地區(qū)有較大的應(yīng)用前景。同時(shí)，為保證檢測(cè)質(zhì)量，以防漏檢，推薦使用2種質(zhì)量?jī)?yōu)良的RT試劑同時(shí)進(jìn)行篩查。

本研究為保證VCT門(mén)診工作質(zhì)量，避免漏診，所用的2種RT試劑均為進(jìn)口試劑。與進(jìn)口試劑相比，目前部分國(guó)產(chǎn)試劑質(zhì)量有待提高。國(guó)產(chǎn)RT試劑與WB確證相結(jié)合進(jìn)行HIV感染診斷的可靠性及可行性有待進(jìn)一步探討。

[1]陳愛(ài)華，劉永梅.兩種HIV試劑的聯(lián)合應(yīng)用在無(wú)償獻(xiàn)血者HIV初篩中的價(jià)值研究［J］.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34(3):356-357.

[2]中國(guó)疾病預(yù)防控制中心.全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（2009年修訂版）［EB/OL］.［2013-06-15］.http://wendang.baidu.com/view/ e1d0cf05cc1755270722082a.html.

[3]王琰.酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)HIV（1+2）抗體時(shí)的影響因素［J］.解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，34(3):233-239.

[4]錢(qián)留軍，張喜梅.VCT項(xiàng)目617例血清HIV-Ab檢查結(jié)果分析［J］.中外醫(yī)學(xué)研究，2011，17(9):52-53.

[5]賈學(xué)慧，劉玉艷，周文婕，等.快速檢測(cè)HIV抗體診斷實(shí)驗(yàn)的系統(tǒng)評(píng)價(jià)［J］.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2012，22(12):28-32.

[6]張?jiān)戮?，褚?guó)方.ELISA法和膠體硒法在高危人群抗-HIV檢測(cè)中的應(yīng)用［J］.職業(yè)與健康，2008，24(9):846-847.

[7]施玉華，馬艷玲，楊莉，等.HIV抗體檢測(cè)替代策略Ⅱ在云南省應(yīng)用的可行性探討［J］.中國(guó)艾滋病性病，2008，14(3):223-225.

[8]彭庭海，陳慧萍，湯恒，等.硒標(biāo)快速法檢測(cè)HIV_(1+2)抗體效果及應(yīng)用分析［J］.公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué)，2005，16(2):50-51.

[9]孫曉豐，呂鋼.沈北新區(qū)2008-2011年艾滋病檢測(cè)結(jié)果分析［J］.中國(guó)保健營(yíng)養(yǎng)，2012，14(8):2876-2877.

[10]周斌.HIV快速檢測(cè)在MSM人群現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)測(cè)中的運(yùn)用［J］.中國(guó)艾滋病性病，2013，19(3):216.

[11]鄭毓芳，潘承恩，劉莉，等.上海地區(qū)2640例自愿檢測(cè)HIV抗體者隊(duì)列研究［J］.診斷學(xué)理論與實(shí)踐，2011，10(5):440-443.

[12]林麒，衛(wèi)大英，段松，等.HIV傳統(tǒng)檢測(cè)和快速檢測(cè)對(duì)隨訪率影響的研究［J］.中國(guó)艾滋病性病，2010，16(2):160-163.

（2013-06-28收稿 2013-09-25修回）

（責(zé)任編委 趙敏 本文編輯 陳玉琪）

App lication of HIV antibody rapid test to voluntary counselling and testing

SHIYu-hua,SU Ying-zhen,FANG Qing-yan,CHEN Min,CUIWen-qing,CHEN Hui-chao,SU Xing-fang,MA Yan-ling*
Yunnan Center for Disease Control and Prevention,Kunming,Yunnan 650022,China
*Corresponding author,E-mail:ynaidslab@126.com

Objective To explore the way to further shorten the waiting time for confirmed results and improve the detection rate of CD4+T lymphocytes for HIV infections by applying HIV rapid test(RT)to voluntary counselling and testing(VCT),and comparing the consistency of resultsbetween RTand western blotting(WB).M ethods Two reagentsofRTwere used for HIV screening, and WB was used for confirming test in positive samples found by one or two RT.The resultswere compared and evaluated.At the same time,blood samples were collected for the detection of CD4+T lymphocytes.Results Among 1435 samples,398 were found positive by one or two RT reagents.Among these 398 samples,377 were confirmed positive by WB,with a consistent rate of 94.7%; 379 sampleswere found positive by two RT reagents,and 376 were confirmed positive by WB,with a consistent rate of 99.2%;1037 samples were found negative by two RT reagents,and among them HIV RNA positive sample was not found by pooling PCR. Conclusions The strategy of RT used for HIV screening and WB used for confirming can be applied to VCT and other urgent tests, which can shorten the waiting time for confirmed results and improve the detection rate of CD4+T lymphocytes for HIV infections.In addition,two RT reagents with high quality are suggested to be used together in HIV screening,so as to ensure test quality and avoid missing positives.

HIV antibodies;blotting,western;counselling

R392.116

A

1007-8134(2014)01-0029-03

650022昆明，云南省疾病預(yù)防控制中心（施玉華、蘇瑩珍、方清艷、陳敏、崔文慶、陳會(huì)超、蘇興芳、馬艷玲）

馬艷玲，E-mail:ynaidslab@126.com