HPLC測(cè)定跌打丸中人參皂苷Rg1的含量

竇紅允 黃東杰 李明 王孟陽(yáng) 張潔 田永慶

（滄州市食品藥品檢驗(yàn)所，河北 滄州 061001）

HPLC測(cè)定跌打丸中人參皂苷Rg1的含量

竇紅允 黃東杰 李明 王孟陽(yáng) 張潔 田永慶

（滄州市食品藥品檢驗(yàn)所，河北 滄州 061001）

目的：建立跌打丸中人參皂苷Rg1的含量測(cè)定。方法：色譜柱為Agilent ZORBAX C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-水（78∶22）；流速：0.8 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm，柱溫為30℃。結(jié)果：人參皂苷Rg1濃度在255.40～766.20 μg/mL與峰面積有良好的線性關(guān)系（r=0.998 5），平均回收率為92.8%（n=6），RSD為0.58%。結(jié)論：該方法快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作為跌打丸的質(zhì)量控制方法。

跌打丸；高效液相色譜法；人參皂苷Rg1；含量測(cè)定

跌打丸為骨傷科常用的中成藥，由三七、紅花、血竭、骨碎補(bǔ)、乳香、沒(méi)藥、甘草等24味中藥組成，具有活血散瘀、消腫止血之功效，用于跌打損傷、瘀血腫痛、閃腰岔氣[1]，2010年收入《河北省納入基本藥物管理的非基本藥物目錄》。大蜜丸現(xiàn)收載于《中國(guó)藥典》（2010年版）一部，小蜜丸執(zhí)行《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)》（試行）——YBZ29212005。跌打丸大蜜丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅收載了血竭素的含量測(cè)定，對(duì)其君藥三七無(wú)含量控制，皂苷成分是三七中的主要有效成分之一，迄今為止已從三七的不同部位分離得到 60余種皂苷成分[2]，其中人參皂苷Rg1含量較高，因此本研究以人參皂苷Rg1為含量測(cè)定指標(biāo)，采用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)方中的人參皂苷Rg1含量進(jìn)行了測(cè)定，以完善其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與材料

島津2010A高效液相色譜儀（日本），XS105DU電子天平（上海梅特勒公司），KQ-300VED型雙頻數(shù)控超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司），人參皂苷Rg1對(duì)照品（原中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)110703-201027,含量96.3%）；甲醇、乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

跌打丸（北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠，批號(hào)0010209、0010221、12011653、12010456、12010463）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

采用Agilent ZORBAX C18色譜柱 （4.6 mm× 250 mm，5 μm），以乙腈-水（78∶22）為流動(dòng)相，流速：0.8 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量 20 μL，理論板數(shù)按人參皂苷 Rg1峰計(jì)算不低于 5 000；在此條件下供試品中的人參皂苷Rg1峰與相鄰的色譜峰達(dá)到了基線分離。在本色譜條件下，對(duì)照品、供試品、陰性樣品色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL約含500 μg的溶液。

圖1 人參皂苷Rg1HPLC圖

2.2.2 供試品溶液的制備取跌打丸，剪碎，取約3 g，精密稱定，加硅藻土2 g，研勻，精密加入甲醇50 mL，精密稱定，加熱回流2 h，放冷，精密稱定，補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液 25 mL，蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用乙醚30 mL洗滌，水液用水飽和的正丁醇振搖提取 3次（30，20，20 mL），合并正丁醇液，加氨試液 40 mL，搖勻，放置分層，上層溶液用正丁醇飽和的水40 mL洗滌，取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備按處方稱取除三七外各味藥材，按2.2.2方法制得陰性樣品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

取上述對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣 10，15，20，25，30 μL，注入液相色譜儀，按2.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)（X），人參皂苷 Rg1峰面積為縱坐標(biāo)（Y），得回歸方程，

Y=9 116＋ 434 374 X，r=0.998 5，

人參皂苷 Rg1在 255.40～ 766.20 μg/mL與峰面積有良好的線性關(guān)系。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 精密度試驗(yàn)取供試品溶液，按2.1項(xiàng)色譜條件連續(xù)進(jìn)樣 6次，每次 20 μL，測(cè)定峰面積的RSD為0.76%，結(jié)果表明儀器的精密度良好。

2.4.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一批號(hào)（12010463）供試品溶液，分別于0，4，8，12，16，24 h精密進(jìn)樣20 μL，測(cè)得人參皂苷Rg1峰面積的RSD為0.83%，表明供試品溶液至少在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.3 重現(xiàn)性試驗(yàn)取同一批號(hào)（12010463）供試品 6份，制備供試品溶液，按 2.1項(xiàng)色譜條件測(cè)定，計(jì)算人參皂苷Rg1質(zhì)量分?jǐn)?shù)。結(jié)果表明，樣品中人參皂苷Rg1質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD為0.68%。

2.4.4 加樣回收試驗(yàn)分別精密量取人參皂苷Rg1對(duì)照品甲醇溶液（濃度為0.498 0 mg/mL）5 mL，置6個(gè)具塞錐形瓶中，水浴中揮干溶劑，再精密稱取已測(cè)定含量的同一批樣品6份（人參皂苷Rg1的含量為0.759 6 mg/g），分別加入上述具塞錐形瓶中，按2.2.2項(xiàng)下的供試品溶液制備方法制備6份供試品溶液，測(cè)定人參皂苷 Rg1含量，計(jì)算回收率，平均回收率為92.44%（n=6），RSD為0.68%。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 人參皂苷Rg1加樣回收試驗(yàn)

2.5 樣品含量測(cè)定

取跌打丸 5批（0010209、0010221、12011653、12010456、12010463），按2.2.2項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，并按上述色譜條件，以外標(biāo)法測(cè)定樣品中人參皂苷Rg1的含量。結(jié)果樣品中人參皂苷Rg1的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.88，0.54，0.68，0.80，0.76 mg/丸（n=5）。

3 討論

3.1 提取方法的選擇

同一批號(hào)（0010209）樣品，提取人參皂苷 Rg1的方法分別采用了索氏提取、超聲提取、水浴加熱回流提取這3種方法，提取時(shí)間均為 2 h，結(jié)果顯示超聲提取效果最差，索氏提取和水浴加熱回流提取測(cè)定結(jié)果基本一致，因此采用相對(duì)簡(jiǎn)單的水浴加熱回流提取方法。分別采用水浴加熱回流提取 1，1.5，2，2.5 h，結(jié)果 2 h與 2.5 h效果差別不大，故采用水浴加熱回流提取2 h作為提取方法。

3.2 流動(dòng)相的選擇

分別選擇了甲醇-水、乙腈-水為流動(dòng)相，結(jié)果乙腈-水峰形好，分離度比較高。

3.3 不同色譜柱的考察

分別采用了不同廠家的色譜柱 Agilent ZORBAX C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）和phenomenex C18（4.6 mm ×250 mm，5 μm），以乙腈-水（78∶22）為流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)，二者均達(dá)到滿意的分離效果。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（2010年版）一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：1154.

[2] 鮑建才，劉剛，叢登立，等.三七化學(xué)成分的研究進(jìn)展[J].中成藥，2006，28（2）：246-254.

Content Determination of Ginsenoside Rg1in Dieda Pills by HPLC

Dou Hongyun，Huang Dongjie，Li Ming，Wang Mengyang，Zhang Jie，Tian Yongqing （Cangzhou Institure for Food and Drug Control，Hebei Cangzhou 061001，China）

Objective：To establish a HPLC method to determine ginsenoside Rg1in dieda pills.Methods：The column of Agilent ZORBAX C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）was used with acetonitrile-water（78:22）as mobile phase，the flow rate was 0.8 mL/min，the detection wavelength was at 203 nm and the column temperature was at 30℃. Results：There was a good linear relationship between ginsenoside Rg1at the concentration of 255.40～ 766.20 μg/mL and the peak area （r=0.998 5），and the average recovery was 92.8% （n=6），RSD was 0.58%.Conclusion：The method is simple，sensitive and accurate.It can be used for the quality control of dieda pills.

Dieda Pills；HPLC；Ginsenoside Rg1；Content Determination

10.3969/j.issn.1672-5433.2014.05.003

2013-10-17）

竇紅允，女，主管藥師。研究方向：藥物分析。通訊作者E-mail：sanxinglouzhu@126.com