建立評價降香藥材質(zhì)量的液相色譜指紋圖譜分析方法

馬 蘭

(蘇州市立醫(yī)院，江蘇 蘇州 215000)

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建立評價降香藥材質(zhì)量的液相色譜指紋圖譜分析方法

馬 蘭

(蘇州市立醫(yī)院，江蘇 蘇州 215000)

目的：探討降香藥材質(zhì)量的液相色譜指紋圖譜分析方式。方法：使用梯度洗脫的方式做色譜分離，借助計算機輔助相似度的判斷軟件做有效的數(shù)據(jù)處理，并對不同的降香藥材指紋圖譜相似度做對比分析。結(jié)果：依照指紋圖譜相似度的分析結(jié)果，把降香藥材分成三大類，同時在三大類降香藥材中認(rèn)定了10個、7個以及2個酚性成分。結(jié)論：該方法可應(yīng)用于降香藥材的指紋圖譜測定，并且為質(zhì)量判定提供有效參照。

降香；指紋圖譜；液相色譜

降香是一種良好的鎮(zhèn)痛劑，同時可治療刀傷出血。降香藥材的主要有效成分為揮發(fā)油以及酚性成分，最近幾年對其的研究主要集中在揮發(fā)油。降香之中的酚性成分有抗氧化、抗癌以及抗炎的作用，屬于降香中最重要的活性成分。本次研究對降香藥材的液相色譜指紋圖譜進(jìn)行分析，并借助液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對各種降香藥材進(jìn)行分析，為整體全面地控制降香藥材質(zhì)量提供必要的標(biāo)準(zhǔn)。

1 資料與方法

1.1 儀器和試劑

美國惠普公司Agilent高效液相色譜儀，配備有二極管陣列檢測器；LCQ型液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，配備有ESI源和LCQ數(shù)據(jù)處理操作體系。試劑：乙腈(色譜純)、雙蒸水等。所有降香藥材都取自海南中南部地區(qū)。十項酚性成分的對照品均從降香藥材中分得，同時借助UV、IR、NMR、MS等方式對其做組織結(jié)構(gòu)辨認(rèn)，所有藥材酚性純度都在95%以上。

1.2 方法

精密度考察：選擇藥材溶液做持續(xù)6次取樣，測定計算色譜指紋圖譜。計算得出的圖譜相似度需要保證在0.98以上，同時共有峰面積RSD保證在60%以下。穩(wěn)定性考察：將供試品溶液各自在0h、8h、24h以及48h階段做取樣分析，并且對色譜圖進(jìn)行記錄。

2 結(jié)果

HPLC指紋圖譜分析和判定：對比本次30批降香藥材的液相色譜，明確12個特點群的峰組成降香指紋圖譜。將30批藥材分成三類，第一類20批藥材的對照相似在0.88以上，可判定為質(zhì)量好的降香藥材；第2類、第3類相似度全部在0.7以下，表示藥材差別較大，能否作為合格藥材使用還需進(jìn)一步探究。見表1。

表1 相似性判定結(jié)果

對第一類降香藥材的黃酮類成分做色譜峰分析，認(rèn)定了其中有10個酚性成分，在對第二類藥材做黃酮類成分分析，確定了其有7個成分。經(jīng)過LCMS分析，顯示第一類和第二類藥材的化學(xué)組成成分類似，主要是因為各個成分的相對含量差異而造成了指紋圖譜之間巨大的相似度差異。第三類藥材和第一類藥材之間存在巨大差異，其中只有四個成分相類似，借助對照，能夠明確其中的兩個主要成分。第一類藥材和第二類藥材的化學(xué)組成成分相似，主要是因為彼此間的各個組成成分相對于含量的差異而造成了指紋圖譜之間的差異性明顯。詳見圖1。

3 討論

中藥指紋圖譜的基本屬性具有整體性以及模糊性的特點，模糊性重視的是對樣品和待測樣品指紋圖譜的相似性，并不是完全相同的；整體性重視的是完整的對比色譜的表現(xiàn)特點，并不是將其做完全分解[1]。這兩種屬性都是從中藥這種天然產(chǎn)物的不確定性上衍生的，同時也受到了環(huán)境影響造成的變異。因此在分析指紋圖譜過程中，將重點放在重視明確的判定，而不是將其放在精密的計算之上。進(jìn)行圖譜比較的過程中，將重點放在相似而不是相同之上，所以，中藥指紋圖譜屬于一種可量化且綜合性的判定方式，是一種和中藥自身特點質(zhì)量控制形式相適應(yīng)的模式[2]。指紋圖譜質(zhì)量控制形式能夠更好地反映藥材之中的各種主要成分以及其中的相對含量，其比測定單一一種或者好幾種成分所公用的信息顯得更加全面生動。指紋圖譜是借助藥材色譜圖的整體形式對藥材做質(zhì)量判定，而沒有關(guān)注各個色譜峰中表示的藥效物質(zhì)成分，液相色譜則正好將這一項不足予以彌補[3]。

圖1 降香藥材指紋圖譜共有峰

本次研究設(shè)計了判定降香藥材質(zhì)量的液相色譜指紋圖譜分析方式，在30批來源不同的降香藥材分析過程中，使用相似度軟件開展判定工作，通過多相似度的計算，對藥材做分類處理。同時顯示，在指紋圖譜的分析研究過程中，各種有關(guān)的藥物信息組成成分是必然存在的，只有這樣才能夠讓指紋圖譜方式更好地使用在藥材真?zhèn)蔚谋鎰e以及新藥的研究開發(fā)上。組建科學(xué)合理的、能夠?qū)χ兴幒唾|(zhì)量做全面控制的現(xiàn)代化質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系，是解決目前出現(xiàn)的中藥信任危機最有效的方式，也是中藥現(xiàn)代化以及國際化目標(biāo)實現(xiàn)的核心所在。用指紋圖譜和多指標(biāo)成分判定分析作為操作手段，能夠切實地將中藥的內(nèi)在素質(zhì)反映出來。

[1] 屠鵬飛.高效液相色譜法制定中藥材和中藥注射劑特征指紋圖譜的探討[J].中成藥,2013，09(16)．

[2] 梁英嬌,徐吉銀,丁平.巴戟天不同部位及混偽品中水晶蘭苷的含量測定[J].中藥新藥與臨床藥理,2011,12(20)．

[3] 陳漢平,劉素香,李桂梅,等.高效液相色譜法測定當(dāng)歸及其炮制品中阿魏酸的含量[J].中草藥,2009，19(10):15.

[4] 顧民,張亮,張正行.HPLC測定逍遙散及當(dāng)歸中阿魏酸的含量[J].中成藥,2011,22(5):342.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

2014-03-31

馬蘭(1978-)，女，江蘇省蘇州市立醫(yī)院主管中藥師，研究方向為中藥學(xué)。

R284.1

A

1673-2197(2014)13-0021-02