HPLC法測(cè)定腎康膠囊中大黃酚、大黃素含量

顧崇梅，段貴寶，楊 鋮

(1.酒泉市藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，甘肅 酒泉 735000；2.酒泉市中醫(yī)院，甘肅 酒泉735000)

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HPLC法測(cè)定腎康膠囊中大黃酚、大黃素含量

顧崇梅1，段貴寶1，楊 鋮2

(1.酒泉市藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，甘肅 酒泉 735000；2.酒泉市中醫(yī)院，甘肅 酒泉735000)

目的：建立腎康膠囊中大黃酚、大黃素的含量測(cè)定方法。方法：采用HPLC法測(cè)定腎康膠囊中大黃酚、大黃素含量。色譜條件為：Thermo C18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm)；以甲醇-0.1%磷酸溶液(80∶20)為流動(dòng)相；流速為1.0mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm；柱溫為30℃。結(jié)果：大黃酚在0.02～0.64μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=0.9996)，平均回收率為97.18%，RSD為1.13%(n=6)；大黃素在0.016～0.512μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=0.9994)，平均回收率為96.77%，RSD為1.62%(n=6)。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、專屬性強(qiáng),可為腎康膠囊的質(zhì)量控制提供參考。

腎康膠囊；HPLC法；大黃酚；大黃素

腎康膠囊是酒泉市中醫(yī)院協(xié)定處方，由大黃、黃芩、半夏、柴胡、太子參等中藥材組成，具有和解臟腑、益氣降濁之功效。對(duì)慢性腎功能不全、慢性腎炎、癥見(jiàn)頭暈乏力、惡心、嘔惡、血肌苷及尿素氮升高等癥有較好的臨床療效。本實(shí)驗(yàn)對(duì)腎康膠囊中大黃素、大黃酚進(jìn)行含量測(cè)定和方法驗(yàn)證，為腎康膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供參考。

1 儀器與試藥

LC-20A 高效液相色譜儀(UV檢測(cè)器)；AE240電子天平；KH-250DB型超聲波清洗器。

大黃素(110756-200110)、大黃酚(110796-200716)均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，腎康膠囊樣品及陰性對(duì)照均由酒泉市中醫(yī)院制劑室提供。甲醇為色譜純(山東禹王實(shí)業(yè)有限公司化工分公司)，純化水由大得利制藥有限公司提供，其它試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Thermo C18柱(4.6mm×250mm,5μm)；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸溶液(80∶20)；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；柱溫：30℃；理論塔板數(shù)按大黃酚峰計(jì)不低于3 000。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱取大黃素和大黃酚對(duì)照品適量，加甲醇制成含大黃素、大黃酚分別為10μg/mL、8μg/mL的溶液即可。

2.2.2 供試品溶液制備 取本品內(nèi)容物適量(約相當(dāng)于5g)，加甲醇50mL，加熱回流提取40min，濾過(guò)，取濾液50mL，揮去甲醇，殘?jiān)?0%的鹽酸溶液10mL，超聲提取，加氯仿10mL，回流提取1h，分取氯仿層，酸液用8mL氯仿提取2次，合并氯仿液，殘?jiān)蛹状既芙獠⑾♂屩?5mL即可。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液制備 取陰性樣品，按供試品溶液制備方法操作，即可。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照溶液10μL進(jìn)行測(cè)定。供試品溶液色譜在與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間處有色譜峰，陰性對(duì)照在大黃酚、大黃素保留時(shí)間處無(wú)干擾，大黃素、大黃酚與其他組分達(dá)到完全分離效果。見(jiàn)圖1。

圖1 大黃酚、大黃素HPLC色譜

2.3.2 線性關(guān)系 分別精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液各2、4、8、16、32、64μL，按“2.1” 色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖及峰面積。以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，分別計(jì)算大黃酚與大黃素的回歸方程。結(jié)果表明：進(jìn)樣量大黃酚在0.02～0.64μg之間，大黃素在0.016～0.512μg之間時(shí)，進(jìn)樣量與峰面積之間線性關(guān)系呈良好，r分別為0.9996、0.9994。

2.3.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，在“2.1” 色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，計(jì)算大黃素與大黃酚含量，結(jié)果5次進(jìn)樣RSD分別為0.97%和1.36%。表明該方法精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密量取供試品溶液10μL，按“2.1” 色譜條件，在0、3、6、9、12h時(shí)間進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖及峰面積，大黃素測(cè)定的RSD為2.48%；大黃酚RSD為2.87%。結(jié)果表明，大黃素與大黃酚在12h內(nèi)比較穩(wěn)定。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品5份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，按“2.1” 色譜條件測(cè)定，結(jié)果本批樣品的平均含量為：大黃素0.2228mg/g，RSD為1.12%；大黃酚0.1367mg/g，RSD為1.56%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn) 取本品共6份(含大黃酚、大黃素分別為0.1367mg/g、 0.2228mg/g)，精密稱定，分別精密加入定量的大黃酚和大黃素對(duì)照品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，進(jìn)樣10μL，計(jì)算平均回收率,結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 大黃素、大黃酚加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明：本處方樣品中大黃素的加樣回收率為96.77%，RSD為1.62%；大黃酚的加樣回收率為97.18%，RSD為1.13%。

2.3.7 樣品含量測(cè)定 稱取3 批樣品各3 份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，照“2.1” 色譜條件測(cè)定，并根據(jù)測(cè)得峰面積計(jì)算出每批樣品的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

本處方中大黃為主藥，選用HPLC對(duì)大黃中大黃酚、大黃素進(jìn)行定量分析。在樣品的提取過(guò)程中，曾分別用回流提取法和超聲提取法，結(jié)果大黃酚、大黃素不能達(dá)到完全分離的效果，且雜質(zhì)峰較多，采用本法進(jìn)行提取， HPLC結(jié)果表明樣品提取完全，雜質(zhì)峰較少，效果較為理想。本試驗(yàn)的HPLC圖譜表明陰性對(duì)照液無(wú)干擾,重現(xiàn)性好,專屬性強(qiáng),可以在同一色譜條件下測(cè)定大黃酚、大黃素兩種成分的含量，為該制劑中酸棗仁質(zhì)量控制提供參考。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:22.

[2] 王潔，張嬙，張一鳴，等.超聲提取合HPLC 測(cè)定三黃片中大黃素和大黃酚的含量[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2010,12(11):62-64.

[3] 趙晨.HPLC 法測(cè)定四黃瀉火片中大黃素及大黃酚的含量[J].中國(guó)藥師,2010,13((10):101-103．

[4] 孫新建,李志浩,吳進(jìn),等.RP-HPLC 測(cè)定小兒化毒散中大黃素和大黃酚的含量[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2010,16(10):99-101.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

Determination of Emodin and Chrysophanol in Shenkang Capsules by HPLC

Gu Chong mei1,Duan Gui bao1,Yang Cheng2

(1.Jiuquan city drug inspection test center, Jiuquan 735000,China；2.Jiuquan city hospital of traditional Chinese medicine，Jiuquan 735000,China)

Objective:To establish a determination method of Emodin andchrysophanol of Shenkang Capsules.Methods:To determine chrysophanol and emodin of Shenkang capsule by HPLC. Thermo C18was used with Methanol -0.1% phosphoric acid (80∶20) as the mobile phase, The flow rate was 1.0 mL/min, detective wavelength was 254 nm, column temperature was 30 ℃.Results:Chrysophanol showed a good linear relationship in the range of 0.02～0.64μg (r=0.9996) The average recovery(n=6)97.18%，RSD為1.13%. and Emodin showed a good linear relationship in the range of 0.016μg～0.512μg (r=0.9994). The average recovery(n=6)96.77%，RSD為1.62%. Conclusion:The method was accurate,good reproducibility,specificity,and can control the quality of this preparation.

Shenkang Capsules ；HPLC； Chrysophanol；Emodin

2014-40-30

顧崇梅(1973-)，女，甘肅省酒泉市藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心副主任藥師，研究方向?yàn)樗幤窓z驗(yàn)。

R284

A

1673-2197(2014)17-0039-02