紫茜抗癌膠囊對(duì)大鼠的長期毒性研究

安美順，王增濤，金光洙*

(1.延吉市傳統(tǒng)醫(yī)院，吉林 延吉 133000；2.延邊大學(xué) 藥學(xué)院 藥物化學(xué)教研部，吉林 延吉 133002)

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紫茜抗癌膠囊對(duì)大鼠的長期毒性研究

安美順1，王增濤2，金光洙2*

(1.延吉市傳統(tǒng)醫(yī)院，吉林 延吉 133000；2.延邊大學(xué) 藥學(xué)院 藥物化學(xué)教研部，吉林 延吉 133002)

目的：觀察連續(xù)灌胃給予紫茜抗癌膠囊對(duì)大鼠產(chǎn)生的毒性反應(yīng)。方法：80只Wistar大鼠，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為高、中、低劑量組及空白對(duì)照組，高、中、低劑量組給藥劑量分別為3.43、2.05、0.686g/kg (相當(dāng)于臨床劑量的50、30、10倍)，連續(xù)灌胃給藥90天，按常規(guī)方法觀察動(dòng)物一般狀況、體重、攝食量、血液學(xué)指標(biāo)、血液生化學(xué)指標(biāo)、臟器重量系數(shù)及組織病理學(xué)改變。結(jié)果：紫茜抗癌膠囊高劑量組肝臟略微出現(xiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤，腎間質(zhì)血管輕度擴(kuò)張充血，其它各劑量組各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組比較均無明顯差異。結(jié)論：紫茜抗癌膠囊長期連續(xù)灌胃未見明顯毒性反應(yīng)，長期服用安全。

紫茜抗癌膠囊；長期毒性；大鼠

紫茜抗癌膠囊由紫草、茜草、莪術(shù)、香菇四味中藥組成，是依據(jù)中藥組方原則，并充分考慮各中藥抗癌有效成分及腫瘤細(xì)胞復(fù)制多環(huán)節(jié)作用機(jī)制進(jìn)行組方的新復(fù)方制劑。其主要成分為紫草素等萘醌類化合物和茜草素等蒽醌類化合物[1-5]。紫茜抗癌膠囊已經(jīng)進(jìn)行了最佳提取工藝、制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定及處方藥效學(xué)等實(shí)驗(yàn)，同時(shí)完成了一般藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)和急性毒性實(shí)驗(yàn)[6]。通過急性毒性實(shí)驗(yàn)測定實(shí)驗(yàn)小鼠灌胃給藥的半數(shù)致死量為23.54g/kg，相當(dāng)于臨床劑量的343.40倍。在此基礎(chǔ)上為了確保其臨床用藥的安全性，為臨床提供客觀實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，我們設(shè)計(jì)和開展了紫茜抗癌膠囊的長期毒性實(shí)驗(yàn)[7-8]，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 藥物

紫茜抗癌膠囊由本研究室自制，批號(hào)：070601，規(guī)格為0.39g/粒,保用時(shí)加蒸餾水及吐溫-80，研磨配制成不同藥物濃度供實(shí)驗(yàn)用。

1.2 動(dòng)物

健康Wistar大鼠80只，6周齡，體重 (70±10)g，雌雄各半，由延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)部動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室提供。

1.3 試劑與儀器

生化試劑尿素氮(BUN)試劑盒、白蛋白(ALB)、總蛋白(TP)、膽固醇(CHO)、血糖(GLU)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT),天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、肌肝(CREA)、總膽紅素(TBIL )，以上試劑盒均由上海豐匯醫(yī)學(xué)科技有限公司生產(chǎn)。日本日立公司7600-010型全自動(dòng)生物化學(xué)檢測儀、瑞典LKB208型超薄切片機(jī)及日本JEM-1200EX型透射電子顯微鏡。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

采用雌雄分別隨機(jī)分組法將80只大白鼠分為四組(雌雄各10只)，其中三個(gè)組為給藥組，一個(gè)組為空白對(duì)照組。給藥劑量：高劑量定為3.43g/kg(相當(dāng)于臨床劑量的50倍),中劑量定為 2.05g/kg(相當(dāng)于臨床劑量的30倍),低劑量定為 0.686g/kg(相當(dāng)于臨床劑量的10倍)，空白組給等體積的蒸餾水。每日定時(shí)上午8：30—9：30灌胃給藥1次，連續(xù)給藥90天，給藥體積相同，均為每100g體重給藥液1mL。實(shí)驗(yàn)期間，每周稱體重1次，并根據(jù)體重變化調(diào)整給藥量。實(shí)驗(yàn)前先按性別分籠在實(shí)驗(yàn)室群養(yǎng)觀察1周，實(shí)驗(yàn)開始后，觀察記錄動(dòng)物的攝食、活動(dòng)、毛發(fā)、糞便情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，解剖動(dòng)物以乙醚淺麻醉，自眼眶后靜脈叢穿刺取血檢測各種生化學(xué)指標(biāo)，AST(天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶)、ALT(丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶)、ALP(堿性磷酸酶)、TP(總蛋白)、T-BIL(總膽紅素)、T-CHO(總膽固醇)、CRE(肌酐)、GLU(血糖)、GOT(谷氨酸草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶)、GPT(谷氨酸丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶)值。各種動(dòng)物分別取心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、甲狀腺、睪丸、卵巢、子宮、腦、前列腺，稱重實(shí)質(zhì)性器官并按動(dòng)物體重?fù)Q算成臟器系數(shù)。取心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、甲狀腺、睪丸、前列腺、卵巢、子宮以10%甲醛固定，石蠟包埋，HE染色光學(xué)顯微鏡檢查病變。數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 一般狀況

在給藥期間，供試品各劑量組動(dòng)物外觀正常、活潑、被毛光澤，眼、鼻、耳、口、生殖器無異常分泌物，大小便顏色形狀均正常，各給藥組動(dòng)物也未見有系統(tǒng)毒性癥狀出現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)進(jìn)行第39天時(shí)發(fā)現(xiàn)有2只死亡,組別為雄性中劑量,發(fā)現(xiàn)時(shí),兩只大鼠都有大面積傷痕,臟器并沒有因?yàn)樗幬镆鸩∽?確定為相互撕咬所致。

2.2 體重及攝食量

在大鼠給藥期間，每周稱重1次。結(jié)果：各劑量組動(dòng)物體重正常增長，攝食量變化與正常對(duì)照組比較，無顯著性差異(P>0.05)。見表1、表2。

表1 對(duì)雄性大鼠體重增長的影響 ±s)

表2 對(duì)雌性大鼠體重增長的影響 ±s)

2.3 血液生化學(xué)檢查

與對(duì)照組相比，所有雌雄大鼠血液學(xué)指標(biāo)及血液生化學(xué)指標(biāo)均無顯著性差異(P>0.05)。詳情見表3、表4。

2.4 臟器重量及臟器系數(shù)

給藥3個(gè)月后，與對(duì)照組對(duì)比，臟器系數(shù)同期各組間未見明顯差異(P>0.05)。詳情見表5、表6。

表3 給藥90天雄性大鼠血液生化學(xué)指標(biāo) ±s)

表4 給藥90天雌性大鼠血液生化學(xué)指標(biāo)

表5 給藥90天雄性大鼠臟器系數(shù)

組別心肝脾肺腎對(duì)照組0.34±0.043.5±0.510.19±0.270.69±0.0950.37±0.030低劑量0.60±0.904.4±0.640.22±0.0371.1±0.160.41±0.074中劑量0.34±0.0623.7±0.290.29±0.130.68±0.150.39±0.049高劑量0.31±0.0264.0±0.410.19±0.0370.56±0.0990.37±0.024組別腦腎上腺甲狀腺胸腺睪丸對(duì)照組0.50±0.0960.013±0.0150.21±0.170.14±0.0410.46±0.064低劑量0.52±0.100.022±0.0240.065±0.0180.10±0.0240.38±0.015中劑量0.51±0.0880.032±0.0360.051±0.0180.10±0.0370.45±0.053高劑量0.48±0.0950.020±0.0390.065±0.0160.17±0.0370.026±0.044

表6 給藥90天雌性大鼠臟器系數(shù)

組別心肝脾肺腎對(duì)照組0.29±0.103.9±0.540.25±0.0360.63±0.0590.40±0.054低劑量0.36±0.0444.1±0.370.27±0.0270.72±0.0930.87±0.014中劑量0.35±0.0264.3±0.360.23±0.0830.67±0.0750.40±0.034高劑量0.36±0.0364.6±0.330.26±0.0340.67±0.0850.43±0.040組別腦腎上腺甲狀腺胸腺卵巢對(duì)照組0.58±0.190.042±0.0170.081±0.0140.46±0.580.032±0.013低劑量0.67±0.0970.017±0.0320.082±0.0180.14±0.0310.029±0.013中劑量0.64±0.0900.019±0.0290.11±0.200.12±0.0190.029±0.017高劑量0.65±0.0700.020±0.0250.065±0.0160.17±0.0370.026±0.012

2.5 病理組織學(xué)觀察

各劑量組動(dòng)物解剖后見胸腔、腹腔漿膜光滑，未見出血點(diǎn)及積液，主要臟器位置正常，肉眼觀察未見明顯病變，開顱后腦膜及腦未見異常。病理組織學(xué)檢查各劑量組與對(duì)照組肝臟與正常組相比肝細(xì)胞胞漿內(nèi)有較多的空泡，肝小葉內(nèi)未見炎細(xì)胞浸潤，匯管區(qū)血管擴(kuò)張充血并少量炎性細(xì)胞浸潤。肺臟與正常組相比部分肺泡壁被少量淋巴細(xì)胞浸潤而輕度增厚。腎臟與正常組相比腎間質(zhì)血管輕度擴(kuò)張充血。進(jìn)一步對(duì)中低劑量組相關(guān)臟器進(jìn)行檢查，未見任何異常。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)期間各劑量組動(dòng)物狀態(tài)良好，生長正常，未出現(xiàn)中毒癥狀及死亡;體重、尿液檢查、血液檢查，各劑量組與對(duì)照組相比均無明顯差異，高劑量組肝臟略微出現(xiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤，腎間質(zhì)血管輕度擴(kuò)張充血，其它各劑量組各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組比較均無明顯差異，但是在病理組織學(xué)檢查肝、腎等臟器未見相關(guān)病變，故認(rèn)為無明顯的毒理學(xué)意義。各劑量組動(dòng)物解剖后胸腔、腹腔漿膜光滑，未見出血點(diǎn)及積液甲心、肝、脾、肺、腎等主要臟器位置正常，肉眼觀察未見明顯病變，開顱后腦膜及腦未見異常，病理組織學(xué)檢查除肝、肺間質(zhì)可見輕度炎細(xì)胞浸潤外，其余臟器未見異常，且與對(duì)照組比較均無顯著性差別，所以并不具有毒理學(xué)意義。綜上所述，紫茜抗癌膠囊在相當(dāng)于臨床人用劑量的50倍(3.43g/kg)大鼠長期灌胃給藥，未見明顯毒性反應(yīng)，安全范圍廣。

[1] 劉梅青.不同劑量紫草醇提取物對(duì)表皮細(xì)胞過度增殖的實(shí)驗(yàn)研究[J].臨床醫(yī)藥實(shí)踐, 2003,12(7):485-487.

[2] 樸成哲，孫東植，宋京郁. 茜草提取物對(duì)胃癌MGC-803細(xì)胞株的誘導(dǎo)凋亡及抗增殖作用[J].延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)學(xué)報(bào),2008,31(4):261-264.

[3] 張玉紅，張世高，周才新,等. 中藥茜草注射液的抗腫瘤作用及其毒性實(shí)驗(yàn)[J].中國中醫(yī)藥雜志，2004,2(11):446-447.

[4] 吳萬垠，鄧嶸，區(qū)勇全. 經(jīng)肝動(dòng)脈灌注莪術(shù)油微球?qū)Υ笫笠浦残愿伟┑闹委熥饔肹J].中華肝臟病雜志，2000,8(1):24-26.

[5] 李志平.微創(chuàng)置管引流及腔內(nèi)注射香菇多糖治療癌性胸水的療效分析[J].河南大學(xué)學(xué)報(bào)，2003,22(1):24-26.

[6] 王增濤，金光洙.紫茜抗癌膠囊的急性毒性實(shí)驗(yàn)研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2009,20(9)：2230-2231.

[7] 呂秋軍.新藥藥理學(xué)研究方法 [M]. 第1版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2007：367-379.

[8] 袁伯俊，廖明陽，李波. 藥物毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)[M].第1版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2007:200-210.

(責(zé)任編輯：宋勇剛)

Long-term Toxicity of ZIQIAN Anti-cancer Capsule in Rats

An Meishun1, Wang Zengtao2, Jin Guangzhu2*

(1.Traditional Hospital,Yanjin 133000,China;2.College of Pharmacy,Yanbian University,Yanji 133002,China)

Objective:To evalute the long-term toxicity of ZIQIAN anti-cancer capsule in rats. Methods:80 Wistar rats were randomly divided into one of four diet groups, each group was orally supplemented either normal diets or diets with ZIQIAN anti-cancer capsule at a dose of 3.43, 2.05,0.686g/kg (equivalent to the clinical dose of times 50,30,10) for up to 90d, respectively. The toxicity of ZIQIAN anti-cancer capsule to rats was assessed based on the status changes of growth rate,appetite,bloodhemo and bichemical outcomes, organ weight index and histopathologic profile in post-dosing.Results:ZIQIAN anti-cancer capsule high-dose group, liver slightly in a small number of inflammatory cell infiltration, renal vascular mild expansion of congestion. No significant differences of other physiological parameters were seen in the rats treeted with 2.05 and 0.686g/kg.Conclusion:Highest dosing of ZIQIAN anti-cancer capsule could produce slightly toxicities in rats, and receving a dose below 2.05 g/kg is relatively safe.

ZIQIAN Anti-cancer Capsule; Long-term Toxicity ; Rat

2014-05-18

吉林省科技廳重點(diǎn)項(xiàng)目(20050909)

安美順(1966-)，女， 吉林省延吉市傳統(tǒng)醫(yī)院主治醫(yī)師，研究方向?yàn)橹嗅t(yī)臨床和新藥研究。

金光洙(1954-)，男，朝鮮族，博士，延邊大學(xué)教授，研究方向?yàn)榭鼓[瘤藥物。

R285

A

1673-2197(2014)17-0003-03