不同溫度下標(biāo)本隨放置時(shí)間延長(zhǎng)尿液紅細(xì)胞白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果的變化分析

榮美桃，王潤(rùn)琴，李美英

(陽(yáng)泉煤業(yè)集團(tuán)總醫(yī)院，山西陽(yáng)泉 045000)

分析前質(zhì)量控制是實(shí)驗(yàn)室全面質(zhì)量管理的重要環(huán)節(jié)，而標(biāo)本存放是分析前質(zhì)控的重要影響因素。應(yīng)用新鮮尿檢查尿液中各種有形成分是臨床檢驗(yàn)工作中除血液外數(shù)量最多的檢查內(nèi)容。為了保證尿液檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，必須規(guī)范操作流程并充分考慮及排除上機(jī)檢測(cè)前相關(guān)標(biāo)本的影響因素，其中包括尿液保存溫度及放置時(shí)間［1］。陽(yáng)泉煤業(yè)集團(tuán)總醫(yī)院檢驗(yàn)科采用UF-1000i尿流式細(xì)胞分析儀分別對(duì)置于6℃、25℃下保存0.5、1、2、3、4 h的68 例新鮮清潔中段晨尿檢測(cè) RBC及WBC計(jì)數(shù)，并將0.5 h所得RBC、WBC計(jì)數(shù)結(jié)果分別與其他時(shí)間段所測(cè)數(shù)值作比較，進(jìn)行偏差分析，從而探討不同溫度下隨著標(biāo)本放置時(shí)間的延長(zhǎng)尿液中紅細(xì)胞及白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果的變化。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本

隨機(jī)收集本院門診及住院患者申請(qǐng)做尿液常規(guī)分析的新鮮清潔中段晨尿68例，每例分成兩份分別保存于6℃、25℃下。

1.2 儀器與試劑

Sysmex公司UF-1000i全自動(dòng)尿流式細(xì)胞分析儀及配套試劑。應(yīng)用的檢測(cè)原理是半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞/核酸熒光染色技術(shù)，對(duì)各種有形成分的細(xì)胞膜、細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行特異性的核酸熒光染色;具有獨(dú)立的雙檢測(cè)通道(沉渣通道、細(xì)菌通道)，可排除標(biāo)本采集過程中無法克服的雜菌對(duì)其他各有形成分檢測(cè)的干擾［2］。

1.3 方法

1.3.1 儀器準(zhǔn)備 嚴(yán)格按照使用說明書保養(yǎng)與維護(hù)儀器，校準(zhǔn)基礎(chǔ)上進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制。

1.3.2 儀器檢測(cè) 用一次性帶刻度錐形螺口離心尿管收集尿液12 mL，于UF-1000i全自動(dòng)尿流式細(xì)胞分析儀上分別將尿液標(biāo)本保存于6℃、25℃下，按放置時(shí)間0.5、1、2、3、4 h的順序自動(dòng)檢測(cè)。

1.3.3 記錄并計(jì)算均值 應(yīng)用2003版Excel軟件整理不同溫度下不同放置時(shí)間68例標(biāo)本RBC、WBC計(jì)數(shù)結(jié)果并分別計(jì)算均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。均值進(jìn)行偏差分析:偏差(%)=(其他時(shí)間均值 －0.5 h均值)×100/0.5 h均值。

2 結(jié)果

2.1 不同溫度、不同放置時(shí)間尿RBC、WBC計(jì)數(shù)比較

依照不同溫度、不同放置時(shí)間對(duì)68例標(biāo)本所得RBC、WBC計(jì)數(shù)結(jié)果分別計(jì)算均值，見表1。

表1 不同放置時(shí)間在不同溫度下尿液RBC、WBC計(jì)數(shù)比較 個(gè)/μL

6℃、25℃下隨著標(biāo)本放置時(shí)間的延長(zhǎng)尿液中紅細(xì)胞及白細(xì)胞會(huì)有不同程度的破壞，細(xì)胞數(shù)逐漸減少，見表1。

2.2 1、2、3、4 h與0.5 h作偏差分析結(jié)果比較

根據(jù)表1分別將6 ℃、25 ℃下保存1、2、3、4 h所得RBC、WBC計(jì)數(shù)結(jié)果與0.5 h之值比較，作偏差分析并將計(jì)數(shù)資料進(jìn)行t檢驗(yàn)。

與0.5 h比較，6 ℃、25 ℃下尿液放置1、2 h的 RBC計(jì)數(shù)偏差均小于6%、WBC計(jì)數(shù)均小于15%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);6℃下保存3 h的RBC計(jì)數(shù)偏差小于6%、WBC計(jì)數(shù)小于15%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);25℃下保存3 h的 RBC計(jì)數(shù)偏差大于6%、WBC計(jì)數(shù)大于15%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);6℃、25℃下保存4 h的RBC、WBC計(jì)數(shù)偏差均較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表2 不同溫度下其他時(shí)間段RBC、WBC計(jì)數(shù)與0.5 h偏差比較

3 討論

在腎臟及泌尿系統(tǒng)疾病的診斷中，作為實(shí)驗(yàn)室診斷的尿液常規(guī)分析仍舊占有重要地位。這種被稱為“體外腎活檢”的檢查方法不僅被臨床應(yīng)用于了解腎臟及泌尿系統(tǒng)各部位的病理變化，有時(shí)對(duì)泌尿系統(tǒng)相關(guān)疾病的定位、鑒別及預(yù)后判斷等還具有直接的診斷意義［3］，其檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性直接影響到疾病的診斷與治療。

為了保證尿液檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性，必須堅(jiān)持質(zhì)量管理。我國(guó)對(duì)尿液分析整體化規(guī)則的確立及細(xì)化研究提出了要求［4］，規(guī)范尿液操作流程、尿液檢查標(biāo)準(zhǔn)化可以起到一定促進(jìn)作用?，F(xiàn)在各大、小醫(yī)院檢驗(yàn)科大都參加全國(guó)或各省市臨床檢驗(yàn)中心組織的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)，實(shí)驗(yàn)室都建立了比較完整的質(zhì)量控制。在方法標(biāo)準(zhǔn)化、儀器高度自動(dòng)化及室內(nèi)質(zhì)量控制的保障下，很好地控制著自吸取標(biāo)本至獲得測(cè)定結(jié)果并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析的整個(gè)測(cè)定過程，標(biāo)本檢測(cè)的準(zhǔn)確度和精密度都大大提高，單純的標(biāo)本檢測(cè)的準(zhǔn)確問題越來越少。目前發(fā)生的問題多與被檢標(biāo)本的不合格有關(guān)，也就是說分析前質(zhì)量控制不夠理想。

尿液分析領(lǐng)域中，正確采集尿液是保證待檢標(biāo)本合格的重要前提，合理保存和規(guī)范化處理，是保證待檢標(biāo)本完整的主要措施。不合格不完整的尿液標(biāo)本其檢測(cè)結(jié)果并不能反映患者的實(shí)際狀態(tài)。因此，必須詳細(xì)規(guī)定獲取合格的完整的待檢尿液標(biāo)本的各個(gè)環(huán)節(jié)，提高對(duì)尿液標(biāo)本分析前的質(zhì)量控制，從而提供比較真實(shí)的檢測(cè)數(shù)據(jù)。

在臨床工作中發(fā)現(xiàn)，尿液中紅細(xì)胞及白細(xì)胞離體后，尿液滲透壓、pH值和溶質(zhì)成分隨著放置時(shí)間的延長(zhǎng)會(huì)有不同程度的變化，可發(fā)生細(xì)胞數(shù)逐漸減少［1］。目前我國(guó)多數(shù)醫(yī)院普遍是住院患者清晨6:00留取晨尿，8:00送至檢驗(yàn)科，加上儀器檢測(cè)前的準(zhǔn)備工作，從標(biāo)本留取到上機(jī)檢測(cè)結(jié)束往往需要3～4 h甚至更長(zhǎng)，直接影響檢測(cè)質(zhì)量。故本資料應(yīng)用UF-1000i全自動(dòng)尿流式細(xì)胞分析儀分析6 ℃、25 ℃下保存0.5、1、2、3、4 h的尿液中紅細(xì)胞及白細(xì)胞計(jì)數(shù)的變化。結(jié)果表明，與0.5 h比較，6℃、25℃下保存放置1、2 h的 RBC 計(jì)數(shù)偏差均小于6%、WBC計(jì)數(shù)均小于15%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);6℃下保存3 h的RBC計(jì)數(shù)偏差小于6%、WBC計(jì)數(shù)小于15%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05);但25℃下保存3 h的RBC計(jì)數(shù)大于6%、WBC計(jì)數(shù)大于15%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);6℃、25℃下保存4 h的RBC、WBC計(jì)數(shù)偏差均較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。參照美國(guó)CLIA88規(guī)定的最大允許偏差為RBC計(jì)數(shù)6%、WBC計(jì)數(shù)15%，建議室溫25℃下尿液紅細(xì)胞及白細(xì)胞計(jì)數(shù)最好在2 h內(nèi)完成，標(biāo)本存放于6℃下也不應(yīng)該超過3 h。

由此說明，使用UF-1000i檢測(cè)尿液中紅細(xì)胞及白細(xì)胞數(shù)，尿液必須新鮮，且在采集后盡量減少運(yùn)送環(huán)節(jié)，縮短儲(chǔ)存時(shí)間，于2 h內(nèi)完成檢測(cè)。對(duì)不能及時(shí)檢驗(yàn)的標(biāo)本，必須進(jìn)行適當(dāng)方式保存，降低因放置時(shí)間延長(zhǎng)引起的變化。冷藏保存尿液標(biāo)本是最簡(jiǎn)便的方法［1］。因尿酸鹽和磷酸鹽沉淀可影響計(jì)數(shù)，不推薦對(duì)2 h內(nèi)可完成檢測(cè)的尿標(biāo)本進(jìn)行冷藏。

首次晨尿因在膀胱中停留時(shí)間較長(zhǎng)，標(biāo)本濃縮、偏酸，有形成分保持比較完整，細(xì)胞等有形產(chǎn)物檢出率較高，最適于尿液常規(guī)檢查，但需立即送檢［1］。許多待檢尿液尤其是病房患者留取的首次晨尿因各種原因未能及時(shí)送檢，放置時(shí)間延長(zhǎng)后致其檢測(cè)結(jié)果發(fā)生改變，從而失去了其臨床參考價(jià)值。有文獻(xiàn)報(bào)道，病房患者使用第2次晨尿、門診或急診患者使用隨機(jī)尿標(biāo)本［4］。第2次晨尿是指收集首次晨尿后2～4 h內(nèi)的尿液標(biāo)本，要求患者在前晚起到尿收集標(biāo)本止，只飲200 mL水，以提高細(xì)胞計(jì)數(shù)靈敏度;而隨機(jī)尿比較新鮮，對(duì)有形成分的形態(tài)干擾最少，均適于尿常規(guī)檢查［1］。

［1］ 熊立凡，劉成玉.臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)［M］.4版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2008.

［2］ 葉應(yīng)撫，王毓三，申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程［M］.3版.南京:東南大學(xué)出版社，2006.

［3］ 叢玉隆.現(xiàn)代尿液分析技術(shù)與臨床［M］.北京:人民軍醫(yī)出版社，2007.

［4］ 叢玉隆，馬駿龍.尿液有形成分鏡檢與自動(dòng)化檢測(cè)方法學(xué)利弊和互補(bǔ)分析［J］.中國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，32(6):609-611.