全自動血細(xì)胞分析儀稀釋模式用于腦脊液細(xì)胞計數(shù)及分類檢測的可能性

侯辰蕊，劉敏麗，李 紅

(山西大醫(yī)院，山西 太原 030032)

腦脊液常規(guī)檢測目前多采用手工操作，不同操作者的熟練程度、主觀判斷不一致，特別是腦脊液細(xì)胞計數(shù)和分類長期以來一直存在結(jié)果重復(fù)性差、耗時長等問題。因此，目前臨床上采用自動化程度高、檢驗結(jié)果客觀準(zhǔn)確的全自動血細(xì)胞分析儀替代手工操作應(yīng)用于腦脊液細(xì)胞計數(shù)和分類分析，全自動血細(xì)胞分析儀ABX PENTRA 60采用半導(dǎo)體激光流式結(jié)合核酸熒光染色以及鞘流電阻抗原理。本資料采用ABX PENTRA 60血細(xì)胞分析儀的稀釋模式對腦脊液進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)分類，并與傳統(tǒng)手工計數(shù)法進(jìn)行比較，進(jìn)一步探討ABX PENTRA 60血細(xì)胞分析儀應(yīng)用于腦脊液細(xì)胞計數(shù)、分類的可能性及效果。

1 材料和方法

1.1 材料

標(biāo)本來源于2013年3月至8月山西大醫(yī)院住院患者腦脊液標(biāo)本100份。

1.2 儀器與試劑

采用日本ABX PENTRA 60自動血細(xì)胞分析儀及配套質(zhì)控品、試劑，日本Olympus光學(xué)顯微鏡，上海無光公司改良牛鮑氏計數(shù)板。

1.3 方法

1.3.1 手工計數(shù)方法 按照第3版全國臨床檢驗操作規(guī)程中腦脊液檢驗方法采用改良牛鮑氏計數(shù)盤進(jìn)行操作。全部標(biāo)本均由兩名工作經(jīng)驗豐富的主管技師計數(shù)分類，結(jié)果取平均值。

1.3.2 全自動血細(xì)胞分析儀檢測 按ABX PENTRA 60全自動血細(xì)胞分析儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的稀釋模式對腦脊液標(biāo)本進(jìn)行測定。

1.3.3 相關(guān)性分析 比較ABX PENTRA 60全自動血細(xì)胞分析儀和手工計數(shù)法(顯微鏡法)的白細(xì)胞計數(shù)、紅細(xì)胞計數(shù)、單個核細(xì)胞絕對計數(shù)、多個核細(xì)胞絕對計數(shù)的結(jié)果，并進(jìn)行相關(guān)性分析。

1.3.4 標(biāo)本穩(wěn)定性觀察 將10份腦脊液在室溫中分別放置1、2、3、4 h，然后用 ABX PENTRA 60 全自動血細(xì)胞分析儀檢測，觀察白細(xì)胞、紅細(xì)胞計數(shù)及白細(xì)胞分類指標(biāo)有無變化:

1.3.5 重復(fù)性觀察 使用XT-4000i自動血細(xì)胞分析儀，對細(xì)胞密度不同的5份腦脊液標(biāo)本(高、中、低三個密度)分別進(jìn)行5次連續(xù)測定，求出平均值和變異系數(shù)(CV%)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS12.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行配對t檢驗和直線相關(guān)性分析及線性回歸分析。

2 結(jié)果

2.1 相關(guān)性

分別用手工計數(shù)法和ABX PENTRA 60全自動血細(xì)胞分析儀稀釋模式兩種方法對100份腦脊液標(biāo)本進(jìn)行白細(xì)胞計數(shù)、紅細(xì)胞計數(shù)、單個核細(xì)胞絕對計數(shù)及多個核細(xì)胞絕對計數(shù)，結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，兩者呈現(xiàn)良好的相關(guān)性(白細(xì)胞計數(shù)r=0.988，紅細(xì)胞計數(shù)r=0.988，單個核細(xì)胞絕對計數(shù)r=0.953，多個核細(xì)胞絕對計數(shù)r=0.981)見圖1。

圖1 儀器與手工計數(shù)的相關(guān)性Fig 1 Relevance between Instrument and Manual Counting

2.2 穩(wěn)定性

將10份不同細(xì)胞密度的腦脊液分別置于室溫下放置1、2、3、4 h，用 ABX PENTRA 60 全自動血細(xì)胞分析儀測定，觀察白細(xì)胞計數(shù)、紅細(xì)胞計數(shù)及分類指標(biāo)的變化，應(yīng)用線性回歸分析結(jié)果得出腦脊液中白細(xì)胞計數(shù)、紅細(xì)胞計數(shù)及白細(xì)胞分類在4 h內(nèi)偏倚值均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，但單個核細(xì)胞(主要為淋巴細(xì)胞)百分比隨著時間的延長而降低，多個核細(xì)胞(主要為中性粒細(xì)胞)百分比隨著時間的延長而升高。因此對于腦脊液標(biāo)本要及時檢測，以免結(jié)果不準(zhǔn)確。見表1～4。

表1 ABX PENTRA 60全自動血細(xì)胞分析儀白細(xì)胞計數(shù) 個/μLTable 1 WBC Counts of ABX PENTRA 60 Automatic Blood Cell Analyzer unit/μL

表2 ABX PENTRA 60全自動血細(xì)胞分析儀紅細(xì)胞計數(shù) 個/μLTable 2 RBC Counts of ABX PENTRA 60 Automatic Blood Cell Analyzer unit/μL

表3 ABX PENTRA 60全自動血細(xì)胞分析儀單個核細(xì)胞百分比 %Table 3 Mononuclear Cell Percentage of ABX PENTRA 60 Automatic Blood Cell Analyzer %

表4 ABX PENTRA 60全自動血細(xì)胞分析儀多個核細(xì)胞百分比 %Table 4 Multinuclear Cell Percentage of ABX PENTRA 60 Automatic Blood Cell Analyzer %

2.3 重復(fù)性

將白細(xì)胞計數(shù)分別為456.2 個/μL、89.4 個/μL、6.9個/μL的3份腦脊液標(biāo)本分別連續(xù)測定10次，ABX PENTRA 60全自動血細(xì)胞分析儀檢測結(jié)果顯示CV值分別為3.1%、4.3%、9.7%，雖然低細(xì)胞密度標(biāo)本CV值上升，但明顯低于手工操作的CV值(手工法一般＞20%)，表明自動血細(xì)胞分析儀檢測重復(fù)性良好，精密度明顯提高。

3 討論

腦脊液的細(xì)胞學(xué)分析可以為臨床提供有價值的診斷依據(jù)。當(dāng)成人腦脊液中單個核細(xì)胞計數(shù)＞5個/μL或新生兒腦脊液中單個核細(xì)胞計數(shù)＞30個/μL時，可輔助診斷腦膜炎、腦炎、白血病浸潤等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病［1］。腦脊液白細(xì)胞計數(shù)也可以用于監(jiān)視白血病或淋巴瘤的治療效果。正常腦脊液中無紅細(xì)胞，當(dāng)腦脊液中紅細(xì)胞計數(shù)升高時提示腦出血或脊椎穿刺外傷［2］。目前臨床實(shí)驗室仍普遍應(yīng)用手工計數(shù)板進(jìn)行腦脊液常規(guī)檢查，不同操作者之間由于熟練程度、規(guī)范程度不同，結(jié)果具有很大誤差，且結(jié)果回報時間長，難以滿足臨床科室需求。腦脊液常規(guī)檢測中的白細(xì)胞計數(shù)，紅細(xì)胞計數(shù)及白細(xì)胞分類常用手工方法。腦脊液手工計數(shù)方法有檢測周期長(通常需要30～45 min)、主觀差異大等缺陷。與血液和尿液相比，腦脊液樣本量少。手工計數(shù)所取標(biāo)本充池量為1 μL，由于取樣量少而不能保證計數(shù)的精確度。國內(nèi)外已有許多文獻(xiàn)探討流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用于腦脊液細(xì)胞計數(shù)［3］。另外，白細(xì)胞分類計數(shù)是腦脊液常規(guī)的一個關(guān)鍵組成部分，這對于中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病特別是腦膜炎的臨床鑒別診斷作用非常重要。病毒性腦膜炎腦脊液白細(xì)胞分類的特點(diǎn)是單個核細(xì)胞(淋巴細(xì)胞)占多數(shù)。而細(xì)菌性腦膜炎是以分葉核細(xì)胞(粒細(xì)胞)為主［4］。

本研究中，通過比較100例腦脊液常規(guī)標(biāo)本，得出手工計數(shù)與儀器對比結(jié)果為相關(guān)性好。白細(xì)胞計數(shù)范圍是0～290個/μL，相關(guān)系數(shù)為0.988。儀器 WBC 平均值為55個/μL，手工計數(shù) WBC 平均值為56個/μL。RBC 計數(shù)范圍是0～190個/μL，相關(guān)系數(shù)為0.988，儀器RBC平均值為135個/μL，手工計數(shù)RBC平均值為139個/μL?；貧w分析結(jié)果經(jīng)過配對t檢驗得出，應(yīng)用儀器進(jìn)行白細(xì)胞計數(shù)、紅細(xì)胞計數(shù)及白細(xì)胞分類與手工方法有大于95%的相關(guān)性。稀釋測定模式，實(shí)際是吸取標(biāo)本之后進(jìn)行了自動稀釋，相當(dāng)于將腦脊液標(biāo)本濃縮50倍，因此可以得到較理想的結(jié)果。用ABX PENTRA 60全自動血細(xì)胞分析儀進(jìn)行腦脊液細(xì)胞計數(shù)與顯微鏡手工計數(shù)相比具有更好的準(zhǔn)確性與精密度，線性范圍廣，需要標(biāo)本量少，檢測時間短(報告時間為2 min，而手工操作至少需要30 min)，避免了手工操作中間環(huán)節(jié)，減少誤差，大大提高了檢測的準(zhǔn)確性。標(biāo)本的穩(wěn)定性是腦脊液常規(guī)檢測的關(guān)鍵所在。比較儀器測定采集標(biāo)本后室溫下放置1、2、3、4 h的計數(shù)值，應(yīng)用配對t檢驗，統(tǒng)計顯示無顯著差異。本資料對高、中、低三個密度腦脊液標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)性實(shí)驗，表明ABX PENTRA 60全自動血細(xì)胞分析儀檢測重復(fù)性良好，精密度明顯提高。用儀器測定的優(yōu)勢還包括用質(zhì)控品來保證測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

本研究結(jié)果表明ABX PENTRA 60全自動血細(xì)胞分析儀在腦脊液細(xì)胞計數(shù)方面，完全可以代替?zhèn)鹘y(tǒng)經(jīng)典方法顯微鏡手工計數(shù)。但儀器法細(xì)胞分類檢測仍為篩選檢查，特別是出現(xiàn)異常細(xì)胞團(tuán)時，必須進(jìn)行顯微鏡涂片染色檢查，仔細(xì)查找是否為腫瘤細(xì)胞，以確認(rèn)標(biāo)本中有無腫瘤細(xì)胞存在。值得注意的是臨床標(biāo)本最好進(jìn)行EDTA抗凝，避免標(biāo)本有凝塊造成的結(jié)果不準(zhǔn)確。ABX PENTRA 60全自動血細(xì)胞分析儀在實(shí)際工作中有廣闊的應(yīng)用前景。

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