蕁芍血脈平膠囊對動脈粥樣硬化易損斑塊家兔模型炎性因子的影響

聶超 朱萱萱 于云華 張學非 周杰

（1.江蘇建康職業(yè)學院，江蘇南京 210029；2.南京中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，江蘇南京 210029；3.新疆伊犁哈薩克自治州中醫(yī)醫(yī)院，新疆伊犁 835000）

蕁芍血脈平膠囊對動脈粥樣硬化易損斑塊家兔模型炎性因子的影響

聶超1朱萱萱2于云華3張學非2周杰1

（1.江蘇建康職業(yè)學院，江蘇南京 210029；2.南京中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，江蘇南京 210029；3.新疆伊犁哈薩克自治州中醫(yī)醫(yī)院，新疆伊犁 835000）

目的：觀察蕁芍血脈平膠囊對動脈粥樣硬化易損斑塊家兔模型炎性因子的影響，研究其抗動脈粥樣硬化的作用機制。方法：采用高脂喂養(yǎng)加頸動脈球囊拉傷術制造動脈粥樣硬化易損斑塊模型家兔，隨機分成模型組、辛伐他汀組、丹參組和蕁芍血脈平高、中、低劑量組，每組10只，另取10只正常家兔作為正常組。分別給予相應藥物干預8周，正常組與模型組給予等量生理鹽水。實驗結束檢測并比較各組家兔腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細胞介素-1（IL-1）、白細胞介素-10（IL-10）含量。結果：經(jīng)過藥物干預后，蕁芍血脈平膠囊各劑量組家兔血液中IL-1明顯低于模型組，蕁芍血脈平膠囊低、中劑量組家兔血液中IL-10明顯高于模型組，蕁芍血脈平膠囊中劑量組家兔血液中TNF-α濃度明顯低于模型組。結論：蕁芍血脈平膠囊可以減輕動脈粥樣硬化過程中炎癥因子的釋放，調(diào)節(jié)免疫功能，保護血管內(nèi)皮細胞功能，從而對防治動脈粥樣硬化有積極的意義。

動脈粥樣硬化 蕁芍血脈平膠囊 腫瘤壞死因子 白細胞介素 實驗研究

1.2 藥物蕁芍血脈平膠囊：由新疆伊犁哈薩克自治州中醫(yī)醫(yī)院提供，該藥是新疆哈薩克民族藥物，主要包含的中藥成分有赤芍、姜黃、桂枝、沒藥，將膠囊研成粉末經(jīng)蒸餾水充分溶解配制成水溶液。復方丹參滴丸：天津天士力制藥股份有限公司，批號：12031，經(jīng)蒸餾水配制成溶液；辛伐他?。汉贾菽硸|制藥有限公司，批號：120710，經(jīng)蒸餾水配制成溶液。

1.3 試劑與儀器白細胞介素-1（IL-1）：由美國BP公司提供，批號：201302208QW；白細胞介素-10（IL-10）：由美國BP公司提供，批號：20130220RW；腫瘤壞死因子α（TNF-α）：由美國BP公司提供，批號：20130220DF；高脂飼料：由1%膽固醇+5%蛋黃+5%豬油+89%普通飼料組成；球囊導管：DedwardsLifesciences，批號：59219817；LDZ-5離心機：北京京立離心機有限公司；756PC紫外線分光光度計：由上海光譜儀器有限公司提供。

2 實驗方法

2.1 造模家兔正常飼養(yǎng)1周后經(jīng)耳緣靜脈取血測定實驗前家兔血脂，給予高膽固醇飼料100g/d飼養(yǎng)2周。以20%烏拉坦5mL經(jīng)耳緣靜脈麻醉后，在右側頸總動脈走行分離皮膚和皮下組織，鈍性分離出頸總動脈約4～5cm，向遠心端分離出頸內(nèi)動脈與頸外動脈，結扎頸外動脈遠心端，用動脈夾夾住頸總動脈與頸內(nèi)動脈以阻斷血流，在頸外動脈壁上剪一“V”形小口后，逆行插入套有球囊的導管（用1∶15稀釋的肝素鈉生理鹽水浸潤），送入約5cm，抽出導絲，連接壓力泵，旋轉(zhuǎn)至約2個大氣壓，以球囊充盈為度，緩慢回拉球囊至分叉處，重新插入導管，再牽拉一次，以確保內(nèi)膜拉傷，退出導管，結扎頸外動脈近心端，逐層縫合皮下組織和皮膚，術后青霉素鈉注射液沖洗創(chuàng)面。術后按8萬單位/只劑量肌肉注射家兔，連續(xù)3d。手術后繼續(xù)飼喂高脂飼料2周。

2.2 動物分組及藥物干預造模后的家兔經(jīng)耳緣靜脈采血2mL，3000r/min離心10min后取血清，測定家兔血脂。將血脂升高的家兔，隨機分組編號，每組10只，參照《中藥藥理研究方法》經(jīng)灌胃器灌胃給藥。正常組：予等量生理鹽水；模型組：予等量生理鹽水；復方丹參滴丸組：予54mg/kg復方丹參滴丸溶液；辛伐他汀組：予1.33mg/kg辛伐他汀溶液；蕁芍血脈平膠囊高、中、低劑量組：分別予蕁芍血脈平溶液6.28、3.14、1.57mg/kg。

2.3 標本采集與檢測實驗結束時用試劑盒檢測各組家兔血液中TNF-α、IL-1、IL-10含量。

3 實驗結果

見表1。與正常組比較，模型組家兔血液中IL-1含量略有升高，IL-10含量明顯降低（P＜0.01），TNF-α含量明顯升高（P＜0.01）。干預處理后，與模型組比較，蕁芍血脈平膠囊各劑量組家兔血液中IL-1含量明顯降低（P＜0.05，P＜0.01），蕁芍血脈平膠囊低、中劑量組家兔血液中IL-10含量明顯升高（P＜0.01），蕁芍血脈平膠囊中劑量組家兔血液中TNF-α含量明顯降低（P＜0.05）。

4 討論

近幾十年來，我們逐漸認識到炎癥在動脈粥樣硬化及其并發(fā)癥中的重要作用，炎癥貫穿于動脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展的全過程[2]。TNF-α具有廣泛的生物學活性，其在動脈粥樣硬化、代謝紊亂和炎癥中發(fā)揮作用，可以促使極低密度脂蛋白（VLDL）過量生成，降低高密度脂蛋白（HDL）水平，同時還可以刺激炎癥因子生成，直接發(fā)揮促炎作用[3-4]。IL-1和IL-10也成為動脈粥樣硬化的重要標志物。IL-1可刺激內(nèi)皮細胞產(chǎn)生反應性氧分子，使血管通透性增加，產(chǎn)生有細胞毒性的脂質(zhì)過氧化物；可刺激血管內(nèi)皮細胞增殖，提高凝血酶原活性，促進中性粒細胞對血管壁的黏附及平滑肌細胞增生，在AS形成的炎癥反應過程中，導致血管壁損傷、增厚、血栓形成[5]。IL-10是一種具有強免疫調(diào)節(jié)作用的抗炎細胞因子，具有下調(diào)炎癥反應的作用，臨床上IL-10與多種疾病密切相關[6]。

本研究結果顯示，蕁芍血脈平膠囊高、中、低劑量給藥8周后均能不同程度地降低動脈粥樣硬化易損斑塊模型家兔血液中IL-1和TNF-α的含量，減少血栓的生成，改善動脈粥樣硬化的癥狀，同時蕁芍血脈平膠囊中、低劑量還能顯著升高IL-10，減輕炎癥反應，起到保護血管的作用。

表1 各組家兔血液IL-1、IL-10和TNF-α含量比較（±s）

表1 各組家兔血液IL-1、IL-10和TNF-α含量比較（±s）

注：與正常組比較，△△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別正常組動物數(shù)劑量（mg/kg）10 IL-1 OD值濃度（pg/mL）OD值0.60±0.046.65±0.850.85±0.04 IL-10濃度（pg/mL）270.03±16.48 TNF-α OD值濃度（pg/mL）0.28±0.02222.08±6.27 0.62±0.056.88±0.900.62±0.02181.31±8.85△△0.46±0.04971.89±13.74△△模型組10辛伐他汀組101.330.55±0.025.56±0.48*0.64±0.03186.88±10.150.34±0.04839.81±13.40*復方丹參滴丸組10540.56±0.065.73±1.130.68±0.03205.15±10.10**0.37±0.04246.30±11.80蕁芍血脈平低劑量組106.280.49±0.054.35±0.93**0.72±0.06220.77±21.26**0.45±0.05469.72±15.05蕁芍血脈平中劑量組103.140.51±0.064.88±1.12*0.69±0.04207.62±13.95**0.35±0.03142.69±8.50*蕁芍血脈平高劑量組101.570.41±0.042.84±0.77**0.69±0.11209.46±40.760.40±0.04754.86±13.32

中醫(yī)認為本病病因為痰濁、氣滯、血瘀為患，為本虛標實證。近年來，許多研究證實動脈粥樣硬化疾病的病機為“痰瘀互結，毒邪內(nèi)生”，因此在治療時可采用清熱、解毒、降濁、通腑法[7]。蕁芍血脈平膠囊中赤芍可“通順血脈，緩中，散惡血，逐賊血”（《別錄》）；姜黃行氣破瘀，通經(jīng)止痛；桂枝“利關節(jié)，溫經(jīng)通脈”（《本草疏證》）；沒藥則散血消腫，定痛生?。ā侗静菥V目》）?，F(xiàn)代藥理學研究表明，赤芍有較強的抗動脈粥樣硬化的作用；姜黃可以抑制炎癥反應，降低機體血脂含量；沒藥有降血脂和分解脂肪作用，并可抑制肝勻漿膽固醇的合成[8-9]。此外，蕁芍血脈平膠囊中尚含部分新疆特色的民族藥，氣味芳香，實驗證明可以行氣活血、散結止痛、祛風除濕，還具有抗炎消腫、緩解患者疼痛等功效。

[1]Libby P.Inflanimation in atherosclerosis.Nature，2002，420：868

[2]李國華，李佳旻.炎癥因子與動脈粥樣硬化.心血管病學進展，2010，31（2）：156

[3]郭尋竹，宋麗萍.兔動脈粥樣硬化模型血清TNF-α與斑塊內(nèi)細胞凋亡的相關性研究.解放軍醫(yī)學院學報，2014，35（2）：174

[4]焦亞斌，芮耀誠，楊鵬遠，等.動脈粥樣硬化大鼠主動脈IL-1β、TNF-α、IL-10及IL-10R的表達及銀杏葉提取物的作用.第二軍醫(yī)大學學報，2005，26（2）：158

[5]甄艷軍，安杰，周曉紅，等.木賊對動脈粥樣硬化早期大鼠血清IL-1、IL-8及TNF-α的影響.中國老年學雜志，2003，23（8）：538

[6]張道杰，段朝霞.IL-10的研究進展.國外醫(yī)學免疫學分冊，2003，26（1）：39

[7]李玉潔，楊慶，翁小剛，等.活血、解毒：中藥干預AS炎癥反應的探索與嘗試.中國藥理學通報，2010，26（5）：577

[8]于永紅，王瑞英.赤芍、尼群地平對家兔實驗性動脈粥樣硬化病灶的消退作用.臨床心血管病雜志，1996，12（3）：164

[9]沈濤，婁紅祥.沒藥的化學成分及其生物活性.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2008，20（2）：360

編輯：吳寧

R543.505文獻識別碼A

1672-397X（2014）09-0077-02

1 實驗材料

江蘇省高校優(yōu)勢學科項目（中西醫(yī)結合）（J1006）

聶超（1978-），男，碩士研究生，講師，主要從事藥理學研究。

朱萱萱，zhuxuanxuan@sina.com

2014-03-25

動脈粥樣硬化（Atherosclerosis，As）是動脈硬化的血管病中常見的一種，其特點是受累動脈病變從內(nèi)膜開始，一般先有脂質(zhì)和復合糖類積聚、出血及血栓形成，纖維組織增生及鈣質(zhì)沉著，并有動脈中層的逐漸蛻變和鈣化，病變常累及彈性及大中等肌性動脈，一旦發(fā)展到足以阻塞動脈腔，則該動脈所供應的組織或器官將缺血或壞死。研究表明，動脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病，在其發(fā)生發(fā)展的各階段中，均有不同程度的炎癥反應發(fā)生，炎癥性細胞因子在此過程中發(fā)揮了重要的作用[1]。因此，我們通過實驗觀察蕁芍血脈平膠囊對動脈粥樣硬化易損斑塊模型家兔炎性因子的影響，研究其抗動脈粥樣硬化的作用機制。

1.1 動物健康雄性家兔，體重2.0～2.5kg，由南京江寧區(qū)青龍山實驗動物飼養(yǎng)場提供，合格證號：SCXK（蘇）2012-0008。