三酰甘油及脂聯(lián)素在大鼠重癥急性胰腺炎中的檢測水平及意義

楊培秀 陸其明

（嘉興市第二醫(yī)院，浙江嘉興 314000）

三酰甘油及脂聯(lián)素在大鼠重癥急性胰腺炎中的檢測水平及意義

楊培秀 陸其明

（嘉興市第二醫(yī)院，浙江嘉興 314000）

目的探討三酰甘油對大鼠重癥急性胰腺炎的影響及三酰甘油和脂聯(lián)素在重癥急性胰腺炎中的關(guān)系。方法40只SD大鼠，隨機等分為4組：正常對照組、高脂血癥組、重癥急性胰腺炎組、高脂血癥性重癥急性胰腺炎組。正常組及重癥急性胰腺炎組喂以基礎(chǔ)飼料，另兩組喂以高脂飼料。1個月后，重癥急性胰腺炎組及高脂血癥性重癥急性胰腺炎組逆行胰膽管注射3.5%?；悄懰徕c，同樣的方法正常對照組和高脂血癥組注射0.9%氯化鈉。12小時后收集標本，檢測淀粉酶、三酰甘油、脂聯(lián)素，取胰腺組織HE染色，參照Grewal法進行病理學(xué)評分。結(jié)果高脂血癥性重癥急性胰腺炎組胰腺組織壞死程度較重癥急性胰腺炎組嚴重，評分值比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。高脂血癥性重癥急性胰腺炎組脂聯(lián)素水平與三酰甘油存在負相關(guān)（r＝－0.844）。結(jié)論高脂血癥能加重重癥急性胰腺炎。在伴高脂血癥性重癥急性胰腺炎中三酰甘油水平升高，脂聯(lián)素水平降低，兩者存在相關(guān)性。

高脂血癥；重癥急性胰腺炎；脂聯(lián)素；三酰甘油

近年來由于高脂血癥的人群增多，高脂血癥性胰腺炎的發(fā)病率也逐年增高。高脂血癥也成為繼膽源性和酒精性之后急性胰腺炎的常見病因。脂聯(lián)素是一種由脂肪細胞分泌的激素，具有抗炎、保護內(nèi)皮功能、抗動脈粥樣硬化形成、增加胰島素敏感性、調(diào)節(jié)糖類和脂質(zhì)代謝等多種生物學(xué)效應(yīng)［1］，低脂聯(lián)素與肥胖、血脂代謝紊亂等密切相關(guān)。本實驗通過建立高脂血癥以及非高脂血癥條件下重癥急性胰腺炎大鼠模型，探討三酰甘油及脂聯(lián)素的變化情況，有助于評估伴高脂血癥性重癥急性胰腺炎病情的發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 健康SD大鼠，性別不限，鼠齡約8周，體質(zhì)量（220.87±27.13）g，共40只，由浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院動物實驗中心提供，動物合格證號：Scxk（浙）2008－0033。動物飼養(yǎng)房溫度20～22℃，相對濕度40%～70%，按實驗要求提供相應(yīng)飼料。儀器微量注射泵Wz50c，全自動酶標儀，旋轉(zhuǎn)式石蠟病理組織切片機LEICA RM2135，微量移液器，?；悄懰徕c，脂聯(lián)素ELISA試劑盒。

1.2 實驗方法

1.2.1 40只大鼠，隨機等分為4組：正常對照組、高脂血癥組、重癥急性胰腺炎組、高脂血癥性重癥急性胰腺炎組。正常對照組和重癥急性胰腺炎組用基礎(chǔ)飼料，高脂血癥組和高脂血癥性重癥急性胰腺炎組用高脂飼料（主要成份為87.8%基礎(chǔ)飼料加10%豬油加2%膽固醇加0.2%膽酸鈉），分別喂養(yǎng)1個月。實驗前大鼠禁食12小時，自由飲水。10%水合氯醛腹腔注射（0.3mL／100g）麻醉，無菌操作下行上腹正中切口進腹，采用一次性靜脈輸液針穿過十二指腸對系膜緣經(jīng)乳頭逆行插入主胰管，用微量輸液泵以0.2mL／min恒速向主胰管注射3.5%?；悄懰徕c溶液（1mL／kg）制備重癥急性胰腺炎模型。同樣的方法正常組和高脂血癥組注射0.9%氯化鈉。

1.2.2 造模成功后12小時再次開腹，腹腔主動脈采血2mL，3000r／min離心后，分離血清保存于－20℃?zhèn)溆?，用全自動生化分析儀檢測血淀粉酶、三酰甘油含量。

1.3 觀察指標

1.3.1 脂聯(lián)素水平測定 －20℃保存血清，按脂聯(lián)素酶聯(lián)免疫試劑盒說明書操作，采用典型的競爭法酶聯(lián)免疫吸附測定大鼠血清脂聯(lián)素。

1.3.2 病理切片 術(shù)后12小時取胰腺組織，用10%福爾馬林固定，石蠟包埋切片，HE染色后顯微鏡下觀察胰腺組織（第386頁彩圖1～4），并參照Grewal法［2］對胰腺組織損傷進行半定量評估。評分標準：水腫：0分為無水腫，1分為輕度葉間隙增寬，2分為重度葉間隙增寬，3分為腺泡間隙增寬，4分為細胞間隙增寬；壞死：0分為無壞死，1分為壞死面積1%～10%，2分為壞死面積＞10%～20%，3分為壞死面積＞20%～30%，4分為壞死面積＞30%；炎癥：以每高倍視野計，每5個炎細胞計0.5分，超過30個計4分；出血：0分為無出血，1分為有出血。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行分析，數(shù)據(jù)用（±s）表示，采用t檢驗、方差分析及Pearson相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 血清指標比較 高脂血癥組三酰甘油值與正常對照組比較升高（P＜0.05）。重癥急性胰腺炎組血清淀粉酶較正常對照組升高（P＜0.05）。高脂血癥性重癥急性胰腺炎組脂聯(lián)素值較重癥急性胰腺炎組降低（P＜0.05）。詳見表1。

表1 四組大鼠血清指標的比較（±s）

表1 四組大鼠血清指標的比較（±s）

與正常對照組比較*P＜0.05，與重癥急性胰腺炎組比較△P＜0.05

組 別n淀粉酶（U／L）三酰甘油（mmol／L）血脂聯(lián)素（μg／L）正常對照組10794.60±176.070.32±0.061.02±0.23高脂血癥組10925.90±150.920.85±0.07*0.57±0.07*重癥急性胰腺炎組103681.10±1506.67*0.34±0.060.92±0.11高脂血癥性重癥急性胰腺炎組102786.60±974.99*△0.87±0.07*△0.50±0.08*△

2.2 胰腺組織病理評分 高脂血癥性重癥急性胰腺炎組水腫、壞死、炎癥、出血評分均高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），高脂血癥性重癥急性胰腺炎組的壞死評分值（3.60± 0.55）分，高于重癥急性胰腺炎組的壞死評分值（2.20±0.45）分，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。詳見表2。

表2 胰腺組織病理評分（±s）

表2 胰腺組織病理評分（±s）

與正常對照組比較*P＜0.05，與高脂血癥組比較△P＜0.05，與重癥急性胰腺炎組比較▲P＜0.05

出血正常對照組100.40±0.5500.20±0.270高脂血癥組100.80±0.4500.50±0.500重癥急性胰腺炎組102.80±0.84*△2.20±0.45*△2.40±0.96*△0.60±0.55*組 別n水腫壞死炎癥高脂血癥性重癥急性胰腺炎組103.80±0.45*3.60±0.55*▲3.40±0.82*1.00±0.00*

2.3 高脂血癥性重癥急性胰腺炎組脂聯(lián)素與三酰甘油的關(guān)系 在高脂血癥性重癥急性胰腺炎組檢測結(jié)果中，以三酰甘油值為橫坐標，脂聯(lián)素值為縱坐標，經(jīng)Pearson線性相關(guān)分析，脂聯(lián)素與三酰甘油存在負相關(guān)（r＝－0.844，P＝0.002）。

3 討 論

在誘導(dǎo)高脂血癥動物模型上，本文采用高脂飼料喂養(yǎng)法［3］，表1結(jié)果示高脂血癥組三酰甘油水平顯著高于正常組，故認為高脂血癥模型可行。

通常實驗采用?；悄懰徕c逆行胰膽管注射誘發(fā)重癥急性胰腺炎模型［4］。從表1和表2結(jié)果可見，重癥急性胰腺炎組較正常對照組淀粉酶升高，顯微鏡下有水腫、炎癥細胞浸潤、出血及壞死表現(xiàn)。高脂血癥性重癥急性胰腺炎組壞死評分值高于重癥急性胰腺炎組。

結(jié)合表1和表2可見通過高脂飼料喂養(yǎng)誘發(fā)大鼠高三酰甘油血癥和?；悄懰徕c逆行胰膽管注射誘發(fā)重癥急性胰腺炎相結(jié)合的方法，可成功建立高脂血癥性重癥急性胰腺炎大鼠模型，且本實驗驗證了伴高脂血癥下重癥急性胰腺炎胰腺病理改變更為嚴重。

重癥急性胰腺炎時胰腺及胰周的三酰甘油被胰脂肪酶水解，產(chǎn)生大量游離脂肪酸，對胰腺腺泡細胞和毛細血管內(nèi)皮細胞有直接的細胞毒作用，并可激活胰蛋白酶原引起胰腺自身消化。脂聯(lián)素通過激活磷酸腺苷－蛋白激酶（cAMP－PKA）信號通路，抑制TNF－α介導(dǎo)的NF－κB磷酸化，從而抑制NF－κB的活化，增加肌細胞對游離脂肪酸的攝取和氧化，減少游離脂肪酸，減輕了胰腺炎的病理損害。當發(fā)生肥胖時，血清脂聯(lián)素水平降低［5］，血脂紊亂，使脂聯(lián)素對NF－κB的抑制減弱，NF－κB激活水平增高，參與炎癥的發(fā)生、發(fā)展。

［1］ 高迪，李榕．脂聯(lián)素相關(guān)研究進展．中華臨床醫(yī)師雜志，2013，7（17）：7897

［2］ Grewal H P，Mohey el Din A，Gaber L．Amelioration of the physiologic and biochemical changes of acute pancreatitis using an anti－TNF－alpha polyclonal antibody．Am J Surg，1994，167（1）：214

［3］ 蒙縝之．化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)大鼠高脂血癥模型研究進展．廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2008，11（1）：71

［4］ Zhang X P，Ye Q，Jiang X G，et al．Preparation method of an ideal model of multiple organ injury of rat with severe acute pancreatitis．World J Gastroenterol，2007，13（34）：4566

［5］ Gu D，Wang Z，Dou X，et al．Inhibition of ERK1／2 pathway suppresses adiponectin secretion via accelerating protein degradation by Ubiquitin－proteasome system：Relevance to obesity－related adiponectin decline．Metabolism：clinical and experimental，2013，62（8）：1137