Cadm1、Syndecan－1在胃癌中的表達及臨床意義

沈湘萍陳 艷

（1．東陽市紅十字會醫(yī)院，浙江東陽 322100；2．東陽市人民醫(yī)院，浙江東陽 322100）

Cadm1、Syndecan－1在胃癌中的表達及臨床意義

沈湘萍1陳 艷2

（1．東陽市紅十字會醫(yī)院，浙江東陽 322100；2．東陽市人民醫(yī)院，浙江東陽 322100）

目的探討Cadm1、Syndecan－1在胃癌中的表達及其與胃癌臨床生物學(xué)行為的關(guān)系。方法采用EnVision二步法檢測Cadm1、Syndecan－1在60例癌旁胃黏膜組織（距腫塊＞5cm），60例胃癌組織中的表達。結(jié)果Cadm1、Syndecan－1在癌旁胃黏膜組織中的表達陽性率顯著高于胃癌組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。在60例胃癌組織中，Cadm1、Syndecan－1的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、浸潤深度有關(guān)，與性別、年齡、腫瘤大小、分化程度、組織類型無關(guān)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。結(jié)論Cadm1、Syndecan－1在胃癌中的表達下調(diào)。Cadm1、Syndecan－1的低表達或不表達與胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、浸潤深度有關(guān)。Cadm1、Syndecan－1的聯(lián)合檢測可以成為臨床判斷胃癌生物學(xué)行為的重要參考指標(biāo)。

胃癌；免疫組化；Cadm1；Syndecan－1

Cadm1（cell adhesion molecule 1）是位于人類染色體11q23.2處的一個新的抑癌基因，參與細(xì)胞骨架構(gòu)建和維持細(xì)胞的粘附功能的穩(wěn)定，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞增殖，因此當(dāng)其表達下調(diào)時就會引起腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移、侵襲。Syndecan－1是新近發(fā)現(xiàn)的一個分子量約為85～92KD的蛋白多糖，屬于整合素粘附分子跨膜硫酸蛋白多聚糖家庭成員，參與了組織器官分化發(fā)育、血管形成、組織再生等一系列生理過程的調(diào)節(jié)，目前研究發(fā)現(xiàn)Syndecan－1的表達在控制惡性腫瘤細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移等過程中起重要的作用，因此當(dāng)其表達下調(diào)時會引發(fā)腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移。本文采用免疫組化方法檢測Cadm1和Syndecan－1在胃癌和癌旁胃黏膜組織中的表達，分析Cadm1和Syndecan－1的表達水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，探討兩者與胃癌生物學(xué)的行為關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇在東陽市人民醫(yī)院（45例）和東陽市紅十字會醫(yī)院（15例）行手術(shù)切除的胃癌標(biāo)本。按診斷分為：（1）癌旁組60例，其中男25例，女35例，年齡32～73歲，平均（41.5± 8.5）歲，癌旁胃黏膜組織距腫塊＞5cm；（2）胃癌組60例，其中男32例，女28例，年齡34～71歲，平均（45.7±7.3）歲，其中年齡＜60歲21例，≥60歲39例。腫瘤長徑：＜5cm 47例，≥5cm 13例，胃癌患者術(shù)前均未行放化療。

1.2 方法

1.2.1 實驗試劑 Cadm1鼠抗人單克隆抗體、Syndecan－1鼠抗人單克隆抗體均購于美國Santa Cruz公司，DAB顯色劑及即用型試劑盒均購置于上?；蚩萍加邢薰尽?/p>

1.2.2 免疫組化檢測 免疫組化采用EnVision二步法檢測Cadm1和Syndecan－1，標(biāo)本全部經(jīng)4%甲醛固定，固定時間大于6小時，石蠟包埋組織以厚4μm連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟至水，切片浸于3% H2O2溶液中3分鐘，高壓抗原修復(fù)10分鐘，冷卻至室溫，充分水洗，磷酸鹽緩沖液（PBS）浸洗，3分鐘×3次；甩去多余液體，加入Cadm1單抗或Syndecan－1單抗4℃過夜，PBS浸洗，3分鐘×3次；甩去多余液體，滴加通用型二抗－HRP聚合物，37℃，30分鐘；二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色2分鐘，在顯微鏡下觀察顯色情況，蘇木素復(fù)染，0.1%鹽酸酒精分化，PBS沖洗返藍，乙醇脫水、透明、中性樹膠封固。以正常小鼠血清代替一抗作替代對照，以PBS作為空白對照。

1.3 結(jié)果評定 根據(jù)染色程度和染色細(xì)胞百分率進行評定和分析。綜合考慮陽性細(xì)胞數(shù)和染色強度來判定結(jié)果：計算陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)并賦予分值，≤5%為0分，＞5%～25%為1分，＞25%～50%為2分，＞50%～75%為3分，＞75%為4分；觀察著色強度并賦予對應(yīng)分值，無著色為0分，淺黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分，兩者相乘，0分為（－），1～4分為（＋），5～8分為（＋＋），9～12分為（＋＋＋）。將其中（－）～（＋）歸為陰性表達，（＋＋）～（＋＋＋）歸為陽性表達。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行χ2檢驗和Pearson線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 Cadm1和Syndecan－1在胃癌組織及癌旁胃黏膜組織中的表達 Cadm1在60例胃癌組織中表達率為26.7%，在癌旁胃黏膜組織中的表達率為83.3%，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；Syndecan－1在胃癌組織中的表達率為23.3%，在癌旁胃黏膜組織中的表達率為88.3%，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。詳見表1。

表1 Cadm1、Syndecan－1在胃癌及癌旁組織中的表達（%）

2.2 Cadm1在胃癌中的表達與臨床各因素的關(guān)系

Cadm1在男性和女性胃癌患者中的表達率分別為28.1%，25.0%；Cadm1在年齡＜60歲和≥60歲胃癌患者中的表達率分別為28.6%和25.6%；Cadm1在腫塊長徑＜5cm和≥5cm胃癌患者中的表達率分別為29.8%和15.4%；Cadm1在組織學(xué)分級為高中分化胃癌組和低分化胃癌組中的表達率分別為26.1%，27.8%，以上兩兩間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。Cadm1在TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期胃癌組和Ⅲ～Ⅳ期胃癌組中的表達率分別為52.2%和10.8%；Cadm1在胃癌浸潤至黏膜層及黏膜下層組、胃癌浸潤至肌層組和胃癌浸潤至漿膜層組中的表達率分別為70%、32%和4%；Cadm1在胃癌無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和胃癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達率分別為40.6%和10.7%。以上兩者差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。結(jié)果表明Cadm1與胃癌的浸潤深度、臨床分期和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。詳見表2。

2.3 Syndecan－1在胃癌中的表達與臨床各因素的關(guān)系 Syndecan－1在男性和女性胃癌患者中的表達率分別為21.9%和25.0%；Syndecan－1在年齡＜60歲和≥60歲胃癌患者中的表達率分別為23.8%和23.1%；Syndecan－1在腫塊長徑＜5cm和≥5cm胃癌患者中的表達率分別為21.3%和30.8%；Syndecan－1在組織學(xué)分級為高中分化胃癌組和低分化胃癌組中的表達率分別為26.2%和16.7%。以上兩兩間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。Syndecan－1在TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期胃癌組和Ⅲ～Ⅳ期胃癌組中的表達率分別為37.5%和5.4%；Syndecan－1在胃癌浸潤至黏膜層及黏膜下層組、胃癌浸潤至肌層組和胃癌浸潤至漿膜層組中的表達率分別為50%、28%和8%；Syndecan－1在胃癌無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和胃癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達率分別為34.3%、10.7%，以上兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果表明Syndecan－1與胃癌的浸潤深度、臨床分期和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。詳見表2。

表2 Cadm1、Syndecan－1在胃癌臨床病理因素中的表達（%）

2.4 胃癌組織中Cadm1和Syndecan－1的表達關(guān)系 60例的胃癌組織中，Cadm1和Syndecan－1同時表達陽性5例，同時表達陰性35例，兩者表達呈正相關(guān)（r＝0.795，P＜0.05），提示兩種蛋白表達調(diào)控方向一致。詳見表3。

表3 Cadm1、Syndecan－1在胃癌中的表達相關(guān)性

3 討 論

胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，目前，全球每年新發(fā)胃癌93.4萬例，其中有近40萬例在中國大陸，因此，對于胃癌的防治十分重要。胃癌的浸潤轉(zhuǎn)移是一個多步驟、連續(xù)的過程，主要分為以下幾個步驟：（1）癌細(xì)胞間粘附能力下降，從原發(fā)瘤脫落；（2）脫落的癌細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)通過特異受體識別結(jié)合并相互粘附；（3）癌細(xì)胞粘附后釋放多種水解酶，使腫瘤細(xì)胞粘附的細(xì)胞外基質(zhì)降解；（4）癌細(xì)胞以主動方式侵入循環(huán)管道形成栓子；（5）在特定器官的毛細(xì)血管滯留并附著，再次穿過血管壁并定居增殖，形成轉(zhuǎn)移灶［1］。

Cadm1屬于細(xì)胞粘附分子中免疫球蛋白超家族成員，是一種在非小細(xì)胞肺癌被發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制基因，可以通過抗增殖及促凋亡活性抑制腫瘤的生長，當(dāng)其功能喪失能導(dǎo)致癌細(xì)胞浸潤及轉(zhuǎn)移。已證明Cadml胞漿側(cè)的FERM結(jié)合區(qū)和PDZ相互作用鞏固亞基是體內(nèi)抑制腫瘤活性的重要區(qū)域。Sakurai等［2］運用RNA干擾技術(shù)抑制正常上皮細(xì)胞Cadml表達，能導(dǎo)致上皮細(xì)胞形態(tài)改變，并使粘附能力下降，因此，Cadml與維持正常上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)的粘附能力有關(guān)。以往采用免疫組化方法研究Cadm1表達下調(diào)在胃癌［3］、非小細(xì)胞肺癌、原發(fā)性肝癌、乳腺癌、宮頸癌、膽囊癌、食管鱗狀細(xì)胞癌、大腸癌［4］等中被發(fā)現(xiàn)，且其表達與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤呈負(fù)相關(guān)。在本組研究中癌旁胃粘膜組織中的Cadm1的陽性表達率為83.3%，但在胃癌組織中的陽性表達率為26.7%，兩者之間表達的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），提示Cadm1表達下調(diào)與胃癌的發(fā)生有密切關(guān)系，同以往的文獻報道相一致。Cadm1在胃癌組織與其浸潤深度粘膜層及粘膜下層組（陽性表達率70%）、肌層組（陽性表達率32%）、漿膜層組（陽性表達率4%），臨床分期Ⅰ～Ⅱ期（陽性表達率52.2%）、Ⅲ～Ⅳ期（陽性表達率10.8%）及淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移（陽性表達率40.6%）、淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移（陽性表達率10.7%），兩兩之間表達差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），提示Cadm1與胃癌的侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后有密切關(guān)系。

Syndecan－1分子屬于I型跨膜蛋白，含有N末端信號肽。人定位在第2號染色體（2p23），基因全長含有5個外顯子，分別編碼分子量為3.5kD單鏈結(jié)構(gòu)的核心蛋白。它屬于粘附分子整合素跨膜粘結(jié)蛋白聚糖家族成員，通過其分子表面的硫酸肝素測鏈可結(jié)合一系列配基如細(xì)胞粘附分子、基質(zhì)成分、生長因子、酶和酶抑制物等，以共受體方式調(diào)節(jié)細(xì)胞與微環(huán)境之間的相互作用，參與組織器官分化發(fā)育、血管形成、組織再生等一系列生理過程的調(diào)節(jié)。其可溶性Syndecan－1分子在組織損傷修復(fù)中可作為bFGF的拮抗劑或激動劑，參與損傷修復(fù)過程，同時也具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)Syndecan－1分子的表達在控制惡性腫瘤細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移等過程中具有重要作用，而且可作為判斷腫瘤預(yù)后的指標(biāo)，以往研究Syndecan－1表達下調(diào)在賁門癌［5］、惡性間皮瘤、多發(fā)性骨髓瘤、卵巢癌、胰腺癌［6］、皮膚癌、前列腺癌、大腸癌、子宮內(nèi)膜癌［7］等中被發(fā)現(xiàn)，且其表達與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤呈負(fù)相關(guān)。在本組研究中癌旁胃黏膜組織中的Syndecan－1的陽性表達率為88.3%，但在胃癌組織中的陽性表達率為23.3%，兩者之間表達的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），提示Syndecan－1表達下調(diào)與胃癌的發(fā)生有密切關(guān)系，同以往的文獻報道相一致。Syndecan－1在胃癌組織與其浸潤深度黏膜層及黏膜下層（陽性表達率50%）、肌層（陽性表達率28%）、漿膜層（陽性表達率8%），臨床分期Ⅰ～Ⅱ期（陽性表達率37.5%）、Ⅲ～Ⅳ期（陽性表達率5.4%）及淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移（陽性表達率34.3%）、淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移（陽性表達率10.7%），兩兩之間表達差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），提示Syndecan－1與胃癌的侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后有密切關(guān)系。

綜上所述，胃癌中Cadm1和Syndecan－1表達均下調(diào)，并且兩者之間的表達有相關(guān)性，兩者在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用，聯(lián)合檢測Cadm1和Syndecan－1的表達對判斷胃癌的預(yù)后有重要價值，兩者表達下調(diào)可以作為胃癌預(yù)后不良的有效指標(biāo)。

［1］ 王肖澤，王繼見．胃癌轉(zhuǎn)移機制研究新進展．重慶醫(yī)學(xué)，2010，39（4）：479

［2］ Sakurai Yageta M，Masuda MTsuboi．Tumor suppressor CADM1 is involved in epithelial cell structure．Biochemical and Biophysical Research Communications，2009，390（3）：977

［3］ 章輝，陶芳芳，曹學(xué)全，等．CADM1、E－cad在胃癌中的表達及意義．浙江醫(yī)學(xué)，2013，35（17）：1568

［4］ 熊枝繁，丁?。瓹ADM1在大腸癌組織中的表達及臨床意義．中國腫瘤臨床，2011，38（7）：394

［5］ 呼秀峰，姚俊，如乙，等．賁門癌組織中Syndecan－1表達及臨床意義．中華實用診斷與治療雜志，2013，27（12）：1199

［6］ 劉曉飛，李宜雄．胰腺癌組織Syndecan－1和E－cadherin表達臨床意義的研究．中華腫瘤防治雜志，2009，16（9）：680

［7］ 何中慧，徐紅，梁秀就，等．Syndecan－1和E－cadherin在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達及其意義．廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2009，26（1）：86