中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白和血清胱抑素C與妊娠高血壓疾病的相關(guān)性研究

劉炳旭 魏殿軍 吳璠

中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白和血清胱抑素C與妊娠高血壓疾病的相關(guān)性研究

劉炳旭 魏殿軍 吳璠

目的 檢測妊娠高血壓疾?。╬regnancy-induced hypertension，PIH）患者血清中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白（neutrophilgelatinase-associated lipocalin，NGAL）和血清胱抑素C（cystatin C，Cys-C），評價NGAL和Cys-C在PIH診斷中的臨床價值。方法將80例PIH孕婦分為妊娠期高血壓亞組、輕度子癇前期亞組、重度子癇前期亞組，子癇亞組，另同期選擇40例健康孕婦作為正常對照組。兩組受試者均檢測血清NGAL、Cys-C和24 h尿蛋白定量水平，分析其與PIH及其嚴(yán)重程度的相關(guān)性。結(jié)果與正常對照組相比，PIH組24 h尿蛋白定量、血清Cys-C、NGAL水平均明顯增高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）。各組間24 h尿蛋白定量、血清Cys-C、NGAL水平比較，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）。NGAL水平在正常對照組及PIH各亞組間兩兩比較，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）。Cys-C水平在妊娠高血壓亞組和子癇亞組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。24 h尿蛋白定量水平除在重度子癇前期亞組和子癇亞組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義外，其他各組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）。血清NGAL、Cys-C水平均與PIH嚴(yán)重程度相關(guān)（r＝0.936，r＝0.763，P均＜0.05），受試者工作特征曲線結(jié)果顯示，血清NGAL、Cys-C和24 h尿蛋白定量診斷PIH的曲線下面積分別為0.835、0.812、0.753。結(jié)論血清NGAL和Cys-C與PIH的發(fā)生及疾病嚴(yán)重程度高度相關(guān)，可用于PIH的早期診斷。

妊娠高血壓；中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白；血清胱抑素C；24 h尿蛋白定量

妊娠高血壓（pregnancy-induced hypertension syndrome，PIH）是指妊娠20w后出現(xiàn)的血壓持續(xù)性升高伴蛋白尿、水腫以及全身炎癥反應(yīng)，產(chǎn)后即消失。血壓升高和隨機(jī)尿蛋白陽性是疾病發(fā)病初期的主要表現(xiàn)，蛋白尿進(jìn)行性增加是PIH惡化的重要表現(xiàn)，有學(xué)者［1］指出蛋白尿合并高血壓是致使胎兒發(fā)病率和病死率增加的常見病因。中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白（neutrophilgelatinase-associated lipocalin，NGAL）是脂質(zhì)運(yùn)載蛋白家族的成員之一，于1993年由Kjeldsen等［2］在人類中性粒細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)和分離出來，Cowland等［3］發(fā)現(xiàn)當(dāng)炎癥或腫瘤發(fā)生時組織內(nèi)的NGAL迅速升高，NGAL是評價因炎癥或腫瘤形成而導(dǎo)致內(nèi)皮損傷嚴(yán)重程度的重要標(biāo)志物。D＇Anna等［4］提出NGAL可能與子癇前期的發(fā)病有關(guān)，該研究認(rèn)為，孕中期孕婦血清NGAL水平的升高是預(yù)測子癇前期發(fā)生的敏感指標(biāo)。血清胱抑素C（cystatin C，Cys-C）是半胱氨酸蛋白酶抑制劑之一，是較理想的反映腎小球?yàn)V過率的指標(biāo)［5］。有文獻(xiàn)［6］報道，血Cys-C對高血壓患者腎小球損傷的診斷具有重要意義，但其在PIH早期腎損害中的診斷價值尚有待研究。本文研究探討NGAL和Cys-C在PIH中的診斷價值及其與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選擇2013年2月-2013年8月我院產(chǎn)科收治入院的診斷為PIH的孕婦80例（PIH組），診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《婦產(chǎn)科學(xué)》第7版［7］，其中妊娠期高血壓亞組26例、輕度子癇前期亞組23例、重度子癇前期亞組19例，子癇亞組12例。平均年齡（30.09±4.52）歲。正常對照組40例，均為同期住院妊娠結(jié)局正常的孕婦。平均年齡（26.83±3.86）歲。兩組均除外慢性高血壓史、糖尿病史、肝腎疾病及免疫性疾病史。

1.2 標(biāo)本采集受檢對象均于入院24 h內(nèi)清晨空腹抽取肘靜脈血3ml，置于含有分離膠的真空采血管中混勻，以離心半徑13.5 cm，3000 r／min離心10 min收集上層血清，置于無菌管中，-70°C凍存待測。入院第二天早上8點(diǎn)起收集24 h尿，于次日晨8點(diǎn)止，按每100ml尿加0.5ml二甲苯防腐，準(zhǔn)確記錄尿總量，混勻取5～10ml，以離心半徑13.5 cm，3000 r／min離心10min，留取上清液上機(jī)檢測。

1.3 儀器與試劑血清NGAL濃度檢測使用NGALELISA試劑盒（美國TSZ公司），按試劑盒說明書操作（檢測值范圍：1～40μg／L）。Cys-C檢測采用免疫比濁法，使用深圳邁瑞B(yǎng)S2000M全自動生化分析儀及其配套試劑進(jìn)行測定。24 h尿蛋白定量采用西門子公司BnproSpec特種蛋白分析儀及原裝配套試劑進(jìn)行檢測。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，采用Spearman相關(guān)性分析評價各指標(biāo)與PIH嚴(yán)重程度的相關(guān)性，采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線評價各指標(biāo)對PIH的診斷性能，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PIH組和正常對照組24 h尿蛋白定量、血Cys-C、NGAL檢測水平比較與正常對照組相比，PIH組24 h尿蛋白定量、血Cys-C、NGAL水平均明顯增高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05），見表1。

表1 PIH組和正常對照組24 h尿蛋白定量、血Cys-C、NGAL檢測水平比較（）

表1 PIH組和正常對照組24 h尿蛋白定量、血Cys-C、NGAL檢測水平比較（）

NGAL（μg／L）正常對照組40 86.23±35.42 1.22±0.35 8.60±3.84 PIH組80 1172.44±297.20 1.47±0.36 18.07±9.91 t值-1.025 3.538 2.769 P值-0.001 0.001 0.007組別例數(shù)24 h尿蛋白定量（mg／24 h）Cys-C（mg／L）

2.2 正常對照組和PIH組各亞組間24 h尿蛋白定量、血Cys-C、NGAL檢測水平比較各組間24 h尿蛋白定量、血Cys-C、NGAL檢測水平比較，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）。NGAL水平在正常對照組及PIH各亞組間兩兩比較，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）。子癇亞組和重度子癇前期亞組的Cys-C水平均高于正常對照組，且子癇亞組高于妊娠高血壓亞組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）。24 h尿蛋白定量水平除在重度子癇前期亞組和子癇亞組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義外，其他各組間兩兩比較，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05），見表2。

2.3 血NGAL和Cys-C水平與PIH嚴(yán)重程度的相關(guān)性分析Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血NGAL和Cys-C均與PIH嚴(yán)重程度相關(guān)（r＝0.936，r＝0.763，P均＜0.05）。

2.4 ROC曲線評估NGAL、Cys-C、24 h尿蛋白定量診斷PIH的準(zhǔn)確性NGAL診斷PIH的ROC曲線下面積為0.835（95%可信區(qū)間0.706～0.863），Cys-C診斷PIH的ROC曲線下面積為0.812（95%可信區(qū)間0.578～0.854），24 h尿蛋白定量診斷PIH的ROC曲線下面積為0.753（95%可信區(qū)間0.523～0.796）。NGAL和Cys-C ROC曲線下的面積大于24 h尿蛋白定量，且NGAL診斷PIH的準(zhǔn)確性最好，見圖1。

表2 正常對照組和PIH組各亞組間24 h尿蛋白定量、血Cys-C、NGAL檢測水平比較（）

表2 正常對照組和PIH組各亞組間24 h尿蛋白定量、血Cys-C、NGAL檢測水平比較（）

注：＊與正常對照組比較，P＜0.05；△與妊娠高血壓亞組比較，P＜0.05；○與輕度子癇前期亞組比較，P＜0.05；＃與重度子癇前期亞組比較，P＜0.05

組別例數(shù)正常對照組40妊娠高血壓亞組26輕度子癇前期亞組23重度子癇前期亞組19子癇亞組12 F值-P值-24 h尿蛋白定量（mg／24 h）Cys-C（mg／L）NGAL（μg／L）86.23±35.42 1.22±0.35 8.60±3.84 331.44±179.58＊1.34±0.39 8.81±3.80＊629.71±283.35＊△1.42±0.20 10.69±3.60＊△1834.82±312.06＊△○1.54±0.37＊15.29±5.91＊△○1893.79±413.81＊△○1.72±0.40＊△54.51±11.50＊△○＃359.136 3.814 30.656 0.000 0.013 0.000

圖1 NGAL、Cys-C、24 h尿蛋白定量診斷PIH的ROC曲線

3 討論

PIH是妊娠期特有的疾病。目前臨床以血壓及尿蛋白定性和24 h尿蛋白定量反映疾病的嚴(yán)重程度，隨著疾病的進(jìn)展，血壓及24 h尿蛋白定量逐漸升高，24 h尿蛋白定量是反映PIH血管痙攣狀態(tài)最常用的指標(biāo)［8］。本文研究結(jié)果顯示，PIH各亞組的24 h尿蛋白定量水平均高于正常對照組，PIH各亞組間除重度子癇前期亞組與子癇亞組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義外，其他各組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05），表明24 h尿蛋白定量水平與PIH的發(fā)生發(fā)展及嚴(yán)重程度相關(guān)。臨床實(shí)踐表明，24 h尿蛋白定量尿液收集過程繁瑣，標(biāo)本保存及尿總量計算存在一定的人為誤差，早期的檢測存在一定的滯后性，因此對腎損傷早期的檢測因子NGAL和Cys-C在PIH早期表達(dá)的研究是非常有意義的。

NGAL為相對分子質(zhì)量為25×103的多肽，主要存在于中性粒細(xì)胞中的過氧化物酶陰性顆粒中［9］。正常情況下，NGAL只在腎臟、肝臟、胃和結(jié)腸等組織中以極低水平表達(dá)。當(dāng)炎癥發(fā)生或上皮細(xì)胞受到損傷性刺激時，NGAL才被誘導(dǎo)而發(fā)生高表達(dá)［10］。有研究［11］證實(shí)，NGAL是早期檢測腎功能衰竭和急性炎癥的重要指標(biāo)，具有高度的靈敏度和特異性。2008年Roberge等［12］通過前瞻性研究首次報道了子癇前期患者體內(nèi)NGAL水平較正常妊娠婦女顯著升高，血清NGAL可能參與子癇前期的發(fā)病過程，其機(jī)制可能與NGAL誘發(fā)的炎癥反應(yīng)和內(nèi)皮細(xì)胞激活有關(guān)。另有研究［13］顯示，尿中NGAL水平與PIH的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，但其具體機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究。本文研究結(jié)果顯示，PIH組孕婦血NGAL的水平明顯高于正常孕婦。在PIH各亞組間隨著疾病嚴(yán)重程度的增加NGAL水平亦呈明顯增高趨勢，且各組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，提示NGAL不僅參與PIH的病理生理過程，而且可能與其嚴(yán)重程度相關(guān)。

Cys-C是血清半胱氨酸蛋白酶抑制劑C大家族中的一員，是一種低分子量的非糖化蛋白，所有的有核細(xì)胞都能穩(wěn)定地產(chǎn)生Cys-C。腎臟是清除Cys-C的唯一器官，Cys-C能夠順利通過腎小球?yàn)V過膜，在腎臟近曲小管處被重新吸收，不受腎外因素的影響。因此人體內(nèi)血清Cys-C的水平由腎小球的濾過率所決定，且血清Cys-C是反映腎小球?yàn)V過率理想的生化指標(biāo)［14，15］。本文研究結(jié)果顯示，PIH組Cys-C水平高于正常對照組，且在PIH各亞組間其水平隨疾病嚴(yán)重程度的增加而升高，提示Cys-C是一種較好的反映PIH早期腎損害的指標(biāo)，用其診斷和長期監(jiān)測妊娠期婦女特別是具有高危因素的孕婦腎功能損害，做到及早發(fā)現(xiàn)及早治療，必要時適時終止妊娠，對降低孕婦和圍產(chǎn)兒的病死率和提高產(chǎn)后母嬰素質(zhì)有極其重要的意義。

本文Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，NGAL和Cys-C均與PIH的嚴(yán)重程度有較好的相關(guān)性，且NGAL、Cys-C和24 h尿蛋白定量用于診斷PIH的ROC曲線下面積分別為0.835、0.812和0.753，表明NGAL和Cys-C均可用于PIH的診斷，且二者對于PIH的診斷性能優(yōu)于24 h尿蛋白定量。

通過以上研究表明，血清NGAL和Cys-C可以作為預(yù)測PIH疾病及其嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)。

1 Scioscia M，Williams，PJGumaa K，et al.Inositol phosphoglycans and preeclampsia：from bench to bedside.J Reprod Immunol，2011，89：173-177.

2 Kjeldsen L，Johnsen AH，Sengel H，et al.Isolation and primary structure of NGAL，a novel protein associated with human neutrophilgelatinase.JBiolChem，1993，268：10425-10432.

3 Cowland JB，Sorensen OE，Sehested M，et al.NeutroPhil，gelatinase-assoeiated，Lipocalin is up-regulated in human epithelial cells by IL-lb，butnotby TNF-a.JImmunol，2003，171：6630-6639.

4 D＇Anna R，Baviera G，Giordano D，et al.Neutrophil gelatinase-associated lipocalin serum evaluation through normal pregnancy and in pregnancies complicated by preeclampsia.Acta Obstet Gynecol Scand，2010，89：275-278.

5 Burton GJ，Scioscia M，Rademacher TW.Endometrial secretions：creating a stimulatorymicroenvironmentwithin the human early placenta and implications for the aetiopathogenesis of preeclampsia.J Reprod Immunol，2011，89：118-125.

6 Cetin I，Huppertz B，Burton G，et al.Pregenesys pre-eclampsia markers consensusmeeting：what do we require from markers，risk assessmentandmodelsystems totailor preventive strategies？Placenta，2011，32：S4-S16.

7 樂杰，主編.婦產(chǎn)科學(xué).第7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008，92-99.

8 Steegers EA，Von Dadelszen P，Duvekot JJ，et al.Preeclampsia. Lancet，2010，376：631-644.

9 Grill S，RusterholzC，Zanetti-Dallenbach R，etal.Potentialmarkers ofpreeclampsia-areview.Reprod BiolEndocrinol，2009，7：70.

10 Wald N.Unified prenatal screening for Down＇s syndrome and preeclampsia.Clin Biochem，2011，44：455.

11 Qing，X，Redecha PB，Burmeister MA，et al.Targeted inhibition of complementactivation prevents featuresofpreeclampsia inmice.Kidney Int，2011，79：331-339.

12 Roberge S，Villa P，Nicolaides K，etal.Early administration of lowdose aspirin for the prevention of preterm and term preeclampsia：a systematic review and meta-analysis.Fetal Diagn Ther，2012，31：141-146.

13 李偉寧，魏殿軍，寧莉.尿NGAL在妊娠高血壓腎損傷疾病中的表達(dá)及意義.實(shí)用檢驗(yàn)醫(yī)師雜志，2014，6：161-163.

14 Kirkegaard I，Henriksen TB，Uldbjerg N.Early fetalgrowth，PAPPA and freebeta-hCG in relation to risk ofdelivering a small-for-gestationalage infant.Ultrasound ObstetGynecol，2011，37：341-347.

15 Trogstad L，Magnus P，Stoltenberg C.Pre-eclampsia：risk factors and causalmodels.Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol，2011，25：329-342.

The correlation research of neutrophilgelatinase－associated lipocalin and serum cystatin C with pregnancy－induced hypertension

LIU Bing-xu，WEI Dian-jun，WU Fan.DepartmentofClinical Laboratory，the Second Hospitalof Tianjin MedicalUniversity，Tianjin 300211，China

ObjectiveTo detected the neutrophilgelatinase-associated lipocalin（NGAL）and serum cystatin C（Cys-C）in patientswith pregnancy-induced hypertension（PIH），and to evaluate their clinicalvalue in PIH diagnosis.Methods80 cases of PIH pregnantwomen were divided into gestational hypertension subgroup，mild preeclampsia subgroup，severe preeclampsia subgroup and eclampsia subgroup.40 cases of healthy pregnantwomen over the same period were collected as the normal controlgroup.The levels of serum NGAL，Cys-C and 24 h urine protein were detected and the resultswere analyzed statistically.ResultsThe levels of serum NGAL，Cys-C and 24 h urine protein in PIH group were allhigher than thatof controlgroup，and the differencesallhad statisticalsignificance（P all＜0.05）.Therewere statistical significance in the differencesofserum NGAL，Cys-Cand 24 h urine protein levelsamong all the groups（P all＜0.05）.Therewere statistical significance in the difference of serum NGAL level between each two groups（P all＜0.05）.Therewas statisticalsignificance in the difference ofCys-C levelbetween gestationalhypertension subgroup and eclampsia subgroup（P＜0.05）.Therewere statisticalsignificance in the differenceof24 h urine protein levelbetween each two groups except severe preeclampsia subgroup and eclampsia subgroup（P all＜0.05）.The levels of serum NGAL and Cys-Cwere all correlated with severity degree of PIH（r＝0.936，r＝0.763，P all＜0.05）.The area under receiver operating characteristic curve of serum NGAL，Cys-C and 24 h urine protein in diagnosis PIH were 0.835、0.812、0.753，respectively.ConclusionNGAL and Cys-C are correlated with the developmentand disease severity ofPIH，and can beused in theearly diagnosis.

Pregnancy-induced hypertension；Neutrophil gelatinase-associated lipocalin；Serum cystatin C；24 h urine protein

10.3969／j.issn.1674－7151.2014.04.006

2014-06-06）

（本文編輯：陳淑蓮）

300211 天津市，天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院檢驗(yàn)科