高血糖對(duì)非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝星狀細(xì)胞活化作用的研究

杜衛(wèi)東 夏超 項(xiàng)標(biāo) 李俊杰 施軍平

●論 著

高血糖對(duì)非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝星狀細(xì)胞活化作用的研究

杜衛(wèi)東 夏超 項(xiàng)標(biāo) 李俊杰 施軍平

目的觀察高血糖在非酒精性脂肪性肝炎（NASH）、肝纖維化形成中的作用以及此過(guò)程中肝星狀細(xì)胞的活化機(jī)制。方法 將60只SD大鼠分成正常對(duì)照組、高血糖模型組、復(fù)合模型組、氨基胍組和格列美脲組5組，分別檢測(cè)各組大鼠血糖值，HE染色觀察肝組織的病理改變，Masson染色觀察肝臟纖維組織變化，免疫組化檢測(cè)α-平滑肌動(dòng)蛋白（α-SMA）的表達(dá)評(píng)分、ELISA法檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子-1（TIMP-1）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）和晚期糖基化終產(chǎn)物（AGEs）含量的變化。 結(jié)果 氨基胍組、格列美脲組大鼠的血糖值較高血糖模型組和復(fù)合模型組均降低（均P＜0．05）；光鏡下觀察高血糖模型組和復(fù)合模型組出現(xiàn)肝細(xì)胞變性和纖維化改變。與復(fù)合模型組比較，格列美脲組肝細(xì)胞形態(tài)較正常，可見(jiàn)輕度水腫、脂肪變性及炎細(xì)胞浸潤(rùn)，纖維化明顯降低，α-SMA表達(dá)明顯降低，TIMP-1、TGF-β1、AGEs含量也顯著降低，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＜0．01）。與復(fù)合模型組比較，氨基胍組肝組織形態(tài)明顯改善，脂肪變性、水樣變性、纖維化程度有所減輕，TIMP-1、AGEs含量降低（均P＜0．01），α-SMA表達(dá)增高（P＜0．05），同時(shí)TGF-β1表達(dá)減低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0．05）。 結(jié)論 高血糖促進(jìn)了NASH、肝纖維化的形成，通過(guò)降低血糖和減少AGEs形成后，肝纖維化程度也有所減輕；機(jī)制之一是激活肝星狀細(xì)胞。格列美脲較氨基胍改善NASH、肝纖維化更明顯。

高血糖 非酒精性脂肪性肝炎 氨基胍 格列美脲 肝纖維化

非酒精性脂肪肝?。∟AFLD）是指與胰島素抵抗（IR）和遺傳易感性密切相關(guān)的代謝應(yīng)激性肝損傷，其病理改變與酒精性肝病（ALD）相似，但患者多無(wú)過(guò)量飲酒史。根據(jù)其肝細(xì)胞脂肪變、炎癥和纖維化程度，可分為非酒精性單純性脂肪肝（NAFL）、非酒精性脂肪性肝炎（NASH）以及相關(guān)的肝硬化和肝細(xì)胞癌[1]。近20年，我國(guó)脂肪肝的患病率翻了近1倍，上海、廣州和香港等發(fā)達(dá)地區(qū)成人NAFLD患病率中位數(shù)約為15.0%[2]，同時(shí)我國(guó)20歲以上的成人中，糖尿病的患病率也已高達(dá)9.7%[3]。2型糖尿病和NAFLD共同作為代謝綜合征的重要表現(xiàn)，IR是兩者發(fā)病的中心環(huán)節(jié)。因此本研究探討高血糖對(duì)高脂飲食所致NASH大鼠肝纖維化和肝星狀細(xì)胞（HSC）活化的影響，以期為有效防治NASH肝纖維化提供新的思路。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 8周齡SPF級(jí)雄性SD大鼠60只，購(gòu)于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司[許可證號(hào)：SCXK（滬）2012-0002]，體重（200±20）g，飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF環(huán)境。

1.2 主要試劑 血糖試紙、血糖測(cè)試儀購(gòu)自強(qiáng)生（中國(guó)）醫(yī)療器械有限公司，檸檬酸三鈉、檸檬酸購(gòu)自無(wú)錫晶科化工有限公司，鏈脲佐菌素（STZ）、鹽酸氨基胍購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，格列美脲片購(gòu)自北京賽諾菲安萬(wàn)特制藥有限公司。兔抗大鼠α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）抗體購(gòu)于美國(guó)Proteintech公司，工作濃度1∶200；羊抗兔SP免疫組化染色試劑盒為福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司產(chǎn)品；基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子-1（TIMP-1）檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：GR127277-1）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）測(cè)試盒（批號(hào)：GR122868-1）為英國(guó)abcam公司產(chǎn)品；大鼠晚期糖基化終產(chǎn)物（AGEs）測(cè)試盒（批號(hào)：L130521573）購(gòu)于武漢Uscnk公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 分組 60只SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對(duì)照組10只和高血糖模型組12只，高血糖合并脂肪肝復(fù)合模型組（簡(jiǎn)稱復(fù)合模型組）14只，格列美脲組12只和氨基胍組12只。

1.3.2 模型制備 正常對(duì)照組喂以普通飼料，其余4組大鼠造模前1d禁食不禁水12h以上，通過(guò)一次性腹腔注射STZ（65mg/kg）建立高血糖模型，注射后3周內(nèi)每周血糖儀測(cè)定空腹血糖，血糖值＞16.7mmol/L即為高血糖造模成功[4]，氨基胍組、格列美脲組和復(fù)合模型組大鼠再予高脂飲食（膽固醇2.0%、膽酸鈉0.5%、丙硫氧嘧啶0.2%、蔗糖5.0%、甘油三酯10.0%、基礎(chǔ)飼料82.3%）飼養(yǎng)9周。氨基胍組予氨基胍（10mg/ml）灌胃，劑量為1ml/ 100g；格列美脲組予格列美脲（1mg/ml）灌胃，劑量為1ml/100g；復(fù)合模型組予等量0.9%氯化鈉溶液灌胃。3組大鼠灌胃均為1次/d，共9周。實(shí)驗(yàn)總周期為12周。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)

1.4.1 各組大鼠空腹血糖測(cè)定 采用血糖測(cè)試儀測(cè)定大鼠空腹血糖。前3周每周2次，以后每周1次，共15次。

1.4.2 HE染色 分別取大鼠肝組織，10%中性甲醛溶液固定，石蠟包埋，二甲苯脫蠟，無(wú)水乙醇脫苯后蘇木素染5～10min，1%鹽酸乙醇30s，伊紅染色3～6min，脫水、二甲苯透明后中性樹(shù)膠封片，光鏡下觀察。

1.4.3 Masson染色 石蠟切片脫蠟、脫苯后以蒸餾水沖洗，Weiger氏鐵蘇木素染5～10min，1%鹽酸乙醇分化，麗春紅酸性品紅液染5～10min，1%磷鉬酸水溶液處理約5min后以苯胺藍(lán)液復(fù)染5min，1%冰乙酸處理1min，再脫水，二甲苯透明后中性樹(shù)膠封片。光鏡下觀察肝臟組織纖維化程度。

1.4.4 免疫組化檢測(cè)肝細(xì)胞α-SMA的表達(dá) 石蠟切片經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫水，3%H2O2阻斷并滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，置0.01M pH 6.0枸櫞酸緩沖液中微波修復(fù)，羊血清工作液封閉，依次滴加一抗和二抗，DAB反應(yīng)染色，蘇木素復(fù)染，干燥，封片。每例在400倍光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)選取3個(gè)視野拍照，并判讀陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度和陽(yáng)性率。α-SMA陽(yáng)性是以細(xì)胞質(zhì)染色為陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)。細(xì)胞質(zhì)染色以多數(shù)細(xì)胞著色減去背景計(jì)分：無(wú)明顯著色為0分，淡黃色或輕微黃色為1分，深黃或棕黃色為2分，棕褐色或黑褐色為3分。陽(yáng)性細(xì)胞百分比即每張免疫組化切片選擇5個(gè)不同的視野（×400）觀察，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分比：0～5.0%為0分，5.0%～25.0%為1分，25.0%～50.0%為2分，50.0%～75.0%為3分，＞75.0%均為4分。陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度最終得分為每個(gè)視野的染色得分與陽(yáng)性細(xì)胞百分比得分相乘，0分為陰性（-），1～6分為弱陽(yáng)性，7～12分為強(qiáng)陽(yáng)性。

1.4.5 TIMP-1檢測(cè) 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔及空白孔。在標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔中分別加入100μl梯度標(biāo)準(zhǔn)品和100μl樣本，洗滌4次后加入1×檢測(cè)抗體100μl/孔，室溫孵育1h，洗滌后加入HRP-鏈霉親和素100μl/孔，室溫孵育45min后再加入TMB顯色液100μl/孔，室溫下避光孵育30 min；每孔加入50μl終止液，立即在450nm波長(zhǎng)下檢測(cè)各孔的OD值。

1.4.6 TGF-β1的檢測(cè) 具體操作依據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，方法同1.4.5。

1.4.7 AGEs的檢測(cè) 具體操作依據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，方法同1.4.5。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料均以表示，各組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠空腹血糖測(cè)定 飼養(yǎng)12周后，正常對(duì)照組大鼠血糖值為（5.18±0.42）mmol/L，而高血糖模型組和復(fù)合模型組大鼠血糖分別是（22.20±1.70）、（22.21± 5.49）mmol/L，兩者較正常對(duì)照組均明顯升高（均P＜0.01）；經(jīng)過(guò)藥物干預(yù)后，格列美脲組和氨基胍組大鼠血糖值分別為（13.95±12.23）、（14.20±11.74）mmol/L，與高血糖模型組和復(fù)合模型組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＜0.05）。

2.2 各組大鼠肝細(xì)胞和組織結(jié)構(gòu)的變化 HE染色后鏡下觀察可見(jiàn)正常對(duì)照組大鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)完整、清晰，肝小葉結(jié)構(gòu)正常，中央靜脈大而壁薄，肝細(xì)胞較大，核圓居中，無(wú)明顯的變性，壞死，肝小葉內(nèi)及匯管區(qū)無(wú)明顯纖維組織增生及炎細(xì)胞浸潤(rùn)等癥狀。復(fù)合模型組肝細(xì)胞排列紊亂，部分肝組織結(jié)構(gòu)破壞，肝竇內(nèi)庫(kù)普弗細(xì)胞增多，匯管區(qū)及細(xì)胞間質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)明顯纖維組織增生，肝小葉周邊和匯管區(qū)肝細(xì)胞可見(jiàn)明顯的細(xì)胞壞死、水樣變性、脂肪變性及炎細(xì)胞浸潤(rùn)。高血糖模型組部分肝細(xì)胞排列紊亂，無(wú)脂肪變性，局部可見(jiàn)較明顯的細(xì)胞水樣變性及炎細(xì)胞浸潤(rùn)，血管壁周?chē)w維組織增生較復(fù)合模型組少。氨基胍組較復(fù)合模型組和高血糖模型組肝組織形態(tài)未有明顯改善，仍可見(jiàn)明顯肝細(xì)胞壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)，脂肪變性、水樣變性和纖維化程度有所減輕。與復(fù)合模型組和高血糖模型組比較，格列美脲組肝組織內(nèi)肝細(xì)胞形態(tài)較正常，可見(jiàn)輕度水腫、脂肪變性及炎細(xì)胞浸潤(rùn)，無(wú)明顯細(xì)胞壞死，纖維化程度明顯降低（圖1，見(jiàn)插頁(yè)）。

2.3 各組大鼠肝組織纖維化程度 Masson染色后，鏡下觀察可見(jiàn)膠原纖維呈藍(lán)色，正常對(duì)照組大鼠肝臟纖維組織較少，主要分布在中央靜脈等血管周邊和血管壁；高血糖模型組血管壁周?chē)伴g質(zhì)可見(jiàn)纖維化；復(fù)合模型組纖維化更為明顯，中央靜脈及匯管區(qū)等均可見(jiàn)纖維組織；氨基胍組和格列美脲組纖維化程度較高血糖模型組和復(fù)合模型組明顯減輕，其中氨基胍組匯管區(qū)及血管處見(jiàn)少量纖維化；格列美脲組的中央靜脈及匯管區(qū)等可見(jiàn)少量纖維化（圖2，見(jiàn)插頁(yè)）。

圖1 各組大鼠肝細(xì)胞和組織結(jié)構(gòu)的變化（A：正常對(duì)照組；B.高血糖模型組；C.復(fù)合模型組；D.氨基胍組；E.格列美脲組；HE染色，×250）

圖2 各組大鼠肝組織纖維化程度（A.正常對(duì)照組；B.高血糖模型組；C.復(fù)合模型組；D.氨基胍組；E.格列美脲組；Masson染色，×100）

圖3 免疫組化檢測(cè)各組大鼠肝組織α-SMA的表達(dá)（A：正常對(duì)照組；B：高血糖模型組；C：復(fù)合模型組；D：格列美脲組；E：氨基胍組；免疫組化染色，×400）

2.4 各組大鼠血漿中TIMP-1、TGF-β1、AGEs含量的影響 見(jiàn)表1。

由表1可見(jiàn)，與正常對(duì)照組比較，高血糖模型組和復(fù)合模型組大鼠血漿TIMP-1含量顯著升高（均P＜0.05）；與復(fù)合模型組比較，氨基胍組和格列美脲組大鼠血漿TIMP-1含量顯著降低（均P＜0.01）。高血糖模型組和復(fù)合模型組大鼠血漿TGF-β1含量比正常對(duì)照組明顯升高（均P＜0.01）；而格列美脲組大鼠血漿TGF-β1含量比復(fù)合模型組顯著降低（P＜0.01），而氨基胍組與復(fù)合模型組比較，TGF-β1含量減低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。與正常對(duì)照組比較，高血糖模型組和復(fù)合模型組大鼠血漿AGEs含量顯著升高（均P＜0.01）；與復(fù)合模型組比較，氨基胍組和格列美脲組大鼠血漿AGEs含量顯著降低（均P＜0.01）。

2.5 各組大鼠肝組織α-SMA表達(dá)的影響 α-SMA主要表達(dá)于門(mén)靜脈、匯管區(qū)血管壁、肝小葉中央靜脈的平滑肌細(xì)胞及纖維間隔（圖3，見(jiàn)插頁(yè)）。高血糖模型組和復(fù)合模型組的α-SMA表達(dá)分別為（6.33±1.83）分和（7.92±1.10）分，均較正常對(duì)照組（3.17±0.82）分增加（均P＜0.01）；格列美脲組的α-SMA表達(dá)（3.21±0.78）分較復(fù)合模型組降低，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）；而氨基胍組α-SMA表達(dá)（9.00±2.04）分與復(fù)合模型組比較有所增加（P＜0.05）。

表1 各組大鼠血漿TIMP-1、TGF-β1、AGEs含量的變化

3 討論

NAFLD與IR和遺傳易感性密切相關(guān)，其中肥胖、2型糖尿病和高脂血癥等單獨(dú)或共同成為其易感因素[5]，隨著肥胖和糖尿病發(fā)病率的上升，NAFLD現(xiàn)已成為我國(guó)常見(jiàn)的慢性肝病之一。而NASH作為NAFLD的一種類(lèi)型，是一種慢性進(jìn)展性肝臟疾病，其病理改變包括了肝細(xì)胞炎癥，纖維化以及氣球樣變，并最終發(fā)展為肝硬化和肝癌。

隨著生活水平的提高，我國(guó)糖尿病患病人群也呈上升趨勢(shì)，并多向低齡化方向發(fā)展，兩者在發(fā)病時(shí)多會(huì)出現(xiàn)IR和AGEs過(guò)度蓄積等現(xiàn)象?，F(xiàn)有的治療藥物包括胰島素増敏劑、抗氧化劑、降脂藥物、細(xì)胞保護(hù)劑、血管緊張素受體阻滯劑、腸道抑菌劑等[6]。而在目前的降糖藥物中，只有噻唑烷二酮類(lèi)和雙胍類(lèi)被報(bào)道對(duì)于NAFLD有一定作用，磺脲類(lèi)藥物并沒(méi)有確切的文獻(xiàn)記載。據(jù)報(bào)道在糖尿病患者體內(nèi)，AGEs蓄積的速度會(huì)加快，在不同類(lèi)型的細(xì)胞（包括肝細(xì)胞和HSC）中引起氧化應(yīng)激反應(yīng)和炎癥反應(yīng)從而破壞肝臟細(xì)胞[7]。本實(shí)驗(yàn)選取了臨床上最常用的降糖藥格列美脲，另選取了可抑制AGEs的氨基胍作為干預(yù)因素。

肝臟是容易發(fā)生纖維化重構(gòu)的器官，尤其是在遭受炎癥、病毒和毒素侵襲以及自身免疫反應(yīng)時(shí)。肝纖維化是細(xì)胞外基質(zhì)合成與降解不平衡，而不斷累積的結(jié)果。HSC作為細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的主要來(lái)源，當(dāng)HSC受到炎癥或機(jī)械刺激等損傷時(shí)，可激活并轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞（MFC）[8]，表達(dá)α-SMA、波形蛋白及人結(jié)蛋白等，其中α-SMA的表達(dá)為HSC激活的標(biāo)志[9]，同時(shí)TIMP-1也會(huì)合成及分泌增加，使ECM成分降解減少。最后，各種致纖維化因素均把HSC作為最終靶細(xì)胞。

本研究發(fā)現(xiàn)高血糖模型組部分肝細(xì)胞排列紊亂，無(wú)脂肪變性，局部可見(jiàn)較明顯的細(xì)胞水樣變性及炎細(xì)胞浸潤(rùn)，血管壁周?chē)w維組織增生，但較復(fù)合模型組少，可見(jiàn)在沒(méi)有給予高脂飼料喂養(yǎng)時(shí)，高血糖模型大鼠肝臟組織已部分變性并出現(xiàn)纖維化，TIMP-1、α-SMA、TGF-β1、AGEs含量均較正常對(duì)照組有升高。結(jié)果可能與高血糖環(huán)境下，發(fā)生了蛋白質(zhì)非酶糖化后，形成AGEs，而AGEs與細(xì)胞膜表面受體RAGE發(fā)生交聯(lián)，激活了IL-6、TGF-β1等細(xì)胞因子，促使肝組織發(fā)生纖維化有關(guān)，同時(shí)血糖增高時(shí)活性氧物質(zhì)（ROS）的增加以及抗氧化機(jī)制的受損，發(fā)生了氧化應(yīng)激和隨后的炎癥反應(yīng)，也加劇了肝組織的損傷[10]。復(fù)合模型組的α-SMA表達(dá)明顯增加，提示過(guò)度的高脂飲食促進(jìn)肝纖維化和脂質(zhì)過(guò)氧化的形成，大量HSC被激活，α-SMA、人結(jié)蛋白的表達(dá)不斷增加，也提高了TIMP-1的活性，使細(xì)胞外基質(zhì)降解減少，進(jìn)一步打破了ECM合成與降解的平衡，促進(jìn)了肝纖維化的發(fā)生和發(fā)展。

本研究中采用的2種藥物中，格列美脲較氨基胍有明顯降低血糖的作用，除了可直接刺激胰島β細(xì)胞釋放胰島素，從而降低血糖外，還有減少氧化應(yīng)激反應(yīng)[11]等作用。通過(guò)本研究還發(fā)現(xiàn)，格列美脲可以改善肝細(xì)胞脂肪變和纖維化程度，抑制肝細(xì)胞凋亡，格列美脲干預(yù)后，α-SMA表達(dá)降低，TIMP-1分泌減少，這一作用可能與其抑制了HSC的激活和增殖有關(guān)。TGF-β1是肝纖維化過(guò)程中關(guān)鍵的細(xì)胞因子，與肝纖維化發(fā)生、發(fā)展、ECM代謝關(guān)系最為密切。當(dāng)肝臟受損時(shí)，HSC介導(dǎo)TGF-β1的大量釋放，TGF-β1從轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控并增加下游元件結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（CTGF）合成，CTGF誘導(dǎo)HSC激活、增殖、遷移，并誘導(dǎo)ECM的合成與沉積，同時(shí)抑制膠原降解，加速肝纖維化的發(fā)展[12]。因此肝臟TGF-β1可反映HSC活化及肝纖維化的程度。本研究顯示高血糖模型組大鼠肝臟TGF-β1表達(dá)增加，應(yīng)用格列美脲干預(yù)后可明顯降低TGF-β1的表達(dá)，從而減輕肝纖維化病變程度。其機(jī)制與增強(qiáng)胰島素敏感性，改善IR，激活過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體（PPAR-γ），從而促進(jìn)脂肪組織中脂質(zhì)、脂肪酸的清除，減少肝組織中脂質(zhì)的堆積，減輕肝細(xì)胞的脂肪變性有關(guān)。

而應(yīng)用氨基胍干預(yù)后，在血糖降低的同時(shí)，肝組織在形態(tài)學(xué)上并沒(méi)有明顯改善，但肝細(xì)胞壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)，脂肪變性、水樣變性和纖維化程度有所減輕。與復(fù)合模型組比較，氨基胍可以降低血漿中AGEs的含量，從而減少ROS的產(chǎn)生，抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)。有報(bào)道指出，體外實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)過(guò)程中糖基化修飾的牛血清白蛋白（AGE-BSA）含量的增加，可促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP1）表達(dá)的上調(diào)，從而下調(diào)TIMP-1表達(dá)[13]。本實(shí)驗(yàn)中用AGEs抑制劑氨基胍干預(yù)后，TIMP-1含量減少，與報(bào)道一致，可見(jiàn)氨基胍通過(guò)增強(qiáng)對(duì)膠原的降解能力，減少了ECM的產(chǎn)生，從而達(dá)到抗肝纖維化的目的。

綜上所述，高血糖在肝纖維化發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起到了一定的促進(jìn)作用，經(jīng)過(guò)氨基胍和格列美脲干預(yù)后，實(shí)驗(yàn)大鼠血糖下降，AGEs形成減少，肝纖維化程度也有所減輕，其中格列美脲的作用更強(qiáng)，改善更為明顯。說(shuō)明格列美脲對(duì)于高血糖合并NASH的治療作用更為顯著，也為進(jìn)一步的臨床研究提供了廣闊的思路。

[1]中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝臟病學(xué)分會(huì)脂肪肝和酒精性肝病學(xué)組．非酒精性脂肪性肝病診療指南[J]．中國(guó)肝臟病雜志,2010,2(4):43-48．

[2]Fan J G．Epidemiology of alcoholic and nonalcoholic fatty liver disease in China[J]．J Gastroenterol Hepatol,2013,Suppl(1):11-17．

[3]楊國(guó)慶,母義明．2型糖尿病胰島素起始治療-中國(guó)2型糖尿病防治指南(2010年版)解讀[J]．中國(guó)醫(yī)學(xué)前沿雜志(電子版),2012,4(3):47-51．

[4]李聰然,游雪甫,蔣建東．糖尿病動(dòng)物模型及研究進(jìn)展[J]．中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志,2005,15(1):59-63．

[5]Puppala J,Siddapuram S P,Akka J．Genetics of nonalcoholic Fatty liver disease:an overview[J]．Genet Genomics,2013,40(1):15-22．

[6]Tomeno W,Yoneda M,Imajo K,et al．Emerging drugs for non-alcoholic steatohepatitis[J]．Expert Opin Emerg Drugs,2013,18(3): 279-290．

[7]Hyogo H,Yamagishi S．Advanced glycation end products(AGEs) and their involvement in liver disease[J]．Curr Pharm Des,2008,14 (10):969-972．

[8]Kornélia B,Renato V I,Ilona K,et al．Decorin-TGFβ axis in hepatic fibrosis and cirrhosis[J]．J Histochem Cytochem,2012,60(4): 262-268．

[9]Ping L,Liu H,Hang Y,et al．Expression of angiotensinogen during hepatic fibrogenesis and its effect on hepatic stellate cells[J]．Med Sci Monit,2011,17(9):248-256．

[10]Gurdip D,Carmen H P,Karen M O,et al．Radical Roles for RAGEin the pathogenesis of oxidative stress in cardiovascular diseases and beyond[J]．Int J Mol Sci,2013,14(10):19891-19910．

[11]Nagayama D,Saiki A,Endo K,et al．Improvement of cardio-ankle vascular index by glimepiride in type 2 diabetic patients[J]．Int J Clin Pract,2010,64(13):1796-1801．

[12]Zhang C,Zhu Y,Wan J,et al．Effects of Ginkgo biloba extract on cell proliferation,cytokines and extracellular matrix of hepatic stellate cells[J]．Liver Int,2006,26(10):1283-1290．

[13]Zhu P,Yang C,Chen L H,et al．Impairment of human keratinocyte mobility and proliferation by advanced glycation end products-modified BSA[J]．Arch Dermatol Res,2011,303(5):339-350．

Effects of hyperglycemia on activation of hepatic stellate cells in rats with non-alcoholic steatohepatitis

ObjectiveTo investigate the effects of hyperglycemia on activation of hepatic stellate cells in rats with non-alcoholic steatohepatitis (NASH)and its mechanisms．Methods Sixty SD rats were divided into five groups with 12 in each:the control group,the hyperglycemia group,composite model(both hyperglycemia and NASH)group,aminoguanidine treatment group and glimepiride treatment group．Blood glucose was measured and serum TIMP-1,TGF-β1,AGEs levels were assayed by ELISA．The pathological changes of liver tissue were observed by HE staining,liver fibrous tissue was ovserved by Masson stainning and α-SMA expression was detected by immunohistochemistry．Results The blood glucose was lower in two intervention group than that in hyperglycemia group and model group．In glimepiride group the hepatic tissue displayed a normal form,mild edema,fatty degeneration and inflammatory cell infiltration;hepatic fibrosis was markedly alleviated,expression of α-SMA was decreased,and TIMP-1,TGF-β1 and AGEs levels were declined．There was no significant difference between diabetic model group and composite model group．In aminoguanidine group the pathology of hepatic tissue was not improved significantly,but the fatty degeneration,hydropic degeneration,and hepatic fibrosis were slighly alleviated,TIMP-1 and AGEs declined in content,but the expression of α-SMA increased．Conclusion Hyperglycemia may promote the formation of hepatic fibrosis and non-alcoholic steatohepatitis;glimepiride can effectively inhibit stellate cell activation,resulting in alleviation of hepatic fibrosis．

Hyperglycemia Non-alcoholic steatohepatitis Aminoguanidine Glimepiride Hepatic fibrosis

2013-12-09）

（本文編輯：胥昀）

浙江省自然科學(xué)基金（Y2100826）

310006 杭州，浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院肝膽外科（杜衛(wèi)東、夏超、項(xiàng)標(biāo)、李俊杰）；杭州市第二人民醫(yī)院肝病科（施軍平）

杜衛(wèi)東，E-mail:hzdwd2004@sina.com