高效液相色譜法測定替硝唑片的溶出度

北京市大興區(qū)藥品檢驗所（102600）苗立紅

本文采用高效液相色譜法，通過高效液相色譜色譜法與中國藥典規(guī)定的檢驗方法比較，證明結果準確可靠，操作簡便。

1 儀器與試藥

島津LC—20AT高效液相色譜儀；賽多利斯精密天平 CP225D;智能藥物溶出儀（ D-800LS）.替硝唑對照品（中國食品藥品檢定研究院批號100336-200703）；替硝唑片（批號1211093）規(guī)格0.5g；甲醇為色譜純；水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：十八烷基鍵合硅膠為填充劑（4.6mm×150mm，50μm）；以0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調節(jié)pH值至3.5）—甲醇（80∶20）為流動相，檢測波長310nm，柱溫30℃，流速1.0ml/min。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液的配制 精密稱取替硝唑對照品12.85mg，置100ml容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.2.2 供試品溶液的配制 按《中國藥典》2010版二部(附錄XC第一法)，以鹽酸溶液（9→1000）（素片以水）900ml為溶出介質，（因本品為素片固采用水為溶出介質），轉速為每分鐘100轉，依法操作，經(jīng)30分鐘時，取溶液濾過（0.45μm微孔濾膜），精密量取續(xù)濾液2ml置10ml容量瓶中，限度為標示量的80%。

2.3 線性關系考察 精密稱取替硝唑對照品15.0mg，置25ml容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取1.0ml，1.5ml，2.0ml，2.5ml，3.0ml置10ml的容量瓶中，加流動項稀釋至刻度，配成系列對照品溶液，按上述色譜條件進樣測定峰面積。峰面積分別為2672544，3933403，5373301，6681360，7819256，以峰面積Y對濃度X繪制標準曲線，得回歸方程Y=43471X-79420，R=0.9986.替硝唑濃度在60～180μg/ml范圍內(nèi)，線性良好。

2.4 精密度試驗 取對照品溶液20μl，連續(xù)進樣五針（n=5）記錄色譜圖，其峰面積為5364694，5365990，5370833，5365122，5364142，平均峰面積為5366156。RSD為0.05%。結果表明，此方法精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗 取對照品溶液分別于0,2,4，6,12,24h進樣1次，測定其峰面積為5365069,5372318，5372648，5372197，5364427，5364442平均峰面積為5368517。RSD為0.1%（n=6）。結果表明，替硝唑在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 加樣回收試驗 取已知含量的替硝唑片樣品3份，加入不同量的替硝唑對照品分別加入900ml溶出介質，超聲使其溶解，濾過（0.45μm微孔濾膜），取續(xù)濾液20μl，注入色譜儀，記錄色譜峰圖，按外標法計算回收率，得回收率99.28%；RSD為0.3%。結果表明本方法回收率良好。

2.7 高效液相色譜法與紫外分光光度法測定結果比較 取樣品二批次(批號1206042，1211093)按供試品溶液制備方法進行操作，采用《中國藥典》2010年版二部收載的紫外分光光度法，分別為89.0%,88.3%。

3 討論

本文建立高效液相色譜法測定替硝唑片的溶出度，專屬性好，準確度高。在310nm處無雜質干擾，主峰吸收也很強。與藥典方法測定結果無明顯差異，可用于替硝唑片的溶出度測定。