子宮內(nèi)膜異位癥患者子宮內(nèi)膜組織MMP-9、AQP5的表達(dá)及意義

郭君麗，張永利

(寶雞市婦幼保健院，陜西寶雞721000)

子宮內(nèi)膜異位癥(EMs)是育齡女性常見(jiàn)的良性疾病，具有與腫瘤相似的生物學(xué)特性［1］。異位內(nèi)膜黏附—侵襲—新生血管形成是EMs發(fā)病的關(guān)鍵，其中均涉及細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的降解?；|(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)在降解ECM及促進(jìn)異位病灶新生血管生成等過(guò)程中具有重要作用。水通道蛋白(AQPs)是一組促進(jìn)水分子快速跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的蛋白［2］，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)外滲透壓平衡及促進(jìn)細(xì)胞遷移等重要作用［3］。2011年7月～2013年7月，我們觀(guān)察了MMP-9、AQP5在EMs患者在位子宮內(nèi)膜及異位內(nèi)膜組織中的表達(dá)變化，探討二者在EMs發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇同期在我院住院手術(shù)治療、術(shù)后病理證實(shí)為EMs的患者40例為EMs組，年齡20～43歲，平均36歲。選擇同期因不孕癥住院行腹腔鏡手術(shù)的患者20例為對(duì)照組，年齡25～35歲，平均32歲。兩組患者月經(jīng)規(guī)律，術(shù)前3個(gè)月內(nèi)未使用任何激素類(lèi)藥品或使用過(guò)宮內(nèi)節(jié)育器，均無(wú)婦科腫瘤、內(nèi)分泌疾病。

1.2 子宮內(nèi)膜組織MMP-9、AQP5表達(dá)檢測(cè) 采用免疫組化法。EMs組于術(shù)中取在位子宮內(nèi)膜20份及異位內(nèi)膜(卵巢內(nèi)膜樣囊腫囊壁組織)40份，對(duì)照組經(jīng)腹腔鏡取正常子宮內(nèi)膜組織(病理證實(shí))20份。所有標(biāo)本經(jīng)中性甲醛溶液固定，梯度乙醇脫水，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片，免疫組化染色，檢測(cè)MMP-9、AQP5表達(dá)。用PBS代替一抗做陰性對(duì)照，具體步驟按試劑盒說(shuō)明操作。結(jié)果判定:每例切片隨機(jī)觀(guān)察10個(gè)高倍視野。按染色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞百分比綜合計(jì)分。染色強(qiáng)度:無(wú)色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;陽(yáng)性細(xì)胞百分比＜5%為0分，5% ～25%為1分，26% ～50%為2分，＞50%為3分。兩項(xiàng)得分相乘，0為陰性，1～3為弱陽(yáng)性(+)，4～5為中度陽(yáng)性(++)，≥6為強(qiáng)陽(yáng)性，弱陽(yáng)性～強(qiáng)陽(yáng)性計(jì)為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件，率的比較采用 χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

MMP-9定位于胞質(zhì)，分布于異位內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)，間質(zhì)血管內(nèi)皮細(xì)胞亦有少量表達(dá);AQP5定位于胞質(zhì)，主要位于子宮內(nèi)膜腺上皮及腔上皮細(xì)胞，間質(zhì)中有少許表達(dá)。對(duì)照組、EMs組在位內(nèi)膜、異位內(nèi)膜中MMP-9的陽(yáng)性表達(dá)率分別為5.0%(1/20)/20)、30.0%(6/20)、80.0%(32/20)，AQP5 陽(yáng)性表達(dá)率分別為10.0%(2/20)、40.0%(8/20)、75.0%(30/20)，EMs組異位內(nèi)膜組織中的表達(dá)高于在位內(nèi)膜，二者均高于對(duì)照組(P均 ＜0.05)。

3 討論

EMs的形成與基底膜(BM)和ECM的降解密切相關(guān)，通過(guò)降解屏障，為各種細(xì)胞提供依附支架及附著結(jié)構(gòu)，同時(shí)對(duì)于細(xì)胞的黏附、遷移、新生血管生成、分化以及各種基因表達(dá)的調(diào)控也起著重要作用。MMPs是一組與鋅離子結(jié)合的內(nèi)肽酶，其主要功能在于降解ECM，參與許多生理與病理過(guò)程。Ⅳ型膠原蛋白是BM和ECM主要成分，而MMP-9是降解這些蛋白成分的主要酶類(lèi)，其活性調(diào)節(jié)決定了細(xì)胞外基質(zhì)的降解速度［4］。Osteen 等［5］認(rèn)為，EMs患者體內(nèi)MMPs調(diào)節(jié)系統(tǒng)的改變，使脫落的子宮內(nèi)膜逆流入腹腔后，在異位病灶處呈侵襲性生長(zhǎng)過(guò)程中起到關(guān)鍵作用。

AQP5由265個(gè)氨基酸組成，分子量為27 kD，定位于人類(lèi)染色體12q3水通道蛋白，主要位于各種腺體腺泡細(xì)胞表面及多種組織中，參與跨膜水轉(zhuǎn)運(yùn)及腺體分泌功能，協(xié)助腺細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的遷徙。文建國(guó)等［6］研究表明，子宮內(nèi)膜腺癌中AQP1、AQP2的高表達(dá)可能與腫瘤血管生成及腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)。而EMs與腫瘤有相似的生物學(xué)特性，且其發(fā)生過(guò)程涉及到子宮異位內(nèi)膜的遷徙，因此以水通道蛋白5為切入點(diǎn)，了解子宮內(nèi)膜細(xì)胞在水通道蛋白干預(yù)后的細(xì)胞遷徙變化情況，有助于明確水通道蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥患者內(nèi)膜遷移過(guò)程中的作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，EMs組異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜MMP-9、AQP5的表達(dá)均高于對(duì)照組，提示 MMP-9、AQP5高水平的表達(dá)與EMs的發(fā)病有關(guān);異位內(nèi)膜中的陽(yáng)性表達(dá)率又高于在位內(nèi)膜，證實(shí)MMP-9、AQP5的表達(dá)與EMs發(fā)病密切相關(guān)。異位內(nèi)膜中MMP-9蛋白的過(guò)度表達(dá)，使異位內(nèi)膜中降解ECM成分的蛋白酶活性增加，破壞周?chē)M織基底膜及腹膜間細(xì)胞的連接，組織屏障消失，病灶向間質(zhì)侵潤(rùn)［7］，使EMs的子宮內(nèi)膜細(xì)胞更易發(fā)生腹腔種植，并且可在VEGF的協(xié)同下促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞出芽及新生血管形成［8］，使病灶不斷擴(kuò)大，表現(xiàn)出類(lèi)似腫瘤的侵襲性特點(diǎn)。AQP5在異位及在位內(nèi)膜的高表達(dá)，增強(qiáng)了血管的滲透性和組織間隙的壓力，促進(jìn)大量?jī)?nèi)膜細(xì)胞的外移、遷徙。江秀秀等［9］研究也表明，AQP在誘導(dǎo)EMs異位細(xì)胞的遷徙過(guò)程中具有重要作用。研究表明，子宮內(nèi)膜異位癥患者腹腔內(nèi)微環(huán)境會(huì)發(fā)生改變［10.11］，包括基質(zhì)金屬蛋白酶、整合素、降鈣素等，使得AQP5可能發(fā)生去磷酸化，異位病灶中AQP5的合成減少，腺細(xì)胞的遷徙能力下降，黏附力增強(qiáng)，加劇了異位病灶的形成。研究發(fā)現(xiàn)，AQP在婦科腫瘤系統(tǒng)中可抑制細(xì)胞凋亡和促進(jìn)新生血管生成［12］。因此AQP5可能在減少侵襲性子宮內(nèi)膜細(xì)胞凋亡與促進(jìn)異位病灶新生血管生成等過(guò)程中起著重要作用。我們認(rèn)為，MMP-9降解EMC的同時(shí)，卻增加了血管的滲透性，從而使內(nèi)膜細(xì)胞在A(yíng)QP5的作用下，遷移速度進(jìn)一步加快，因此兩者在EMs的形成過(guò)程中可能具有協(xié)同作用。

總之，研究EMs組織中MMP-9、AQP5表達(dá)的關(guān)系為了解EMs的發(fā)病機(jī)制提供了新思路，但MMP-9及AQPs能否作為治療靶點(diǎn)仍有待進(jìn)一步研究。

［1］龔麗紅，韓鳳娟，侯麗輝，等.子宮內(nèi)膜異位癥與惡性腫瘤相關(guān)機(jī)制［J］.醫(yī)學(xué)研究雜志，2007，36(2):98-100.

［2］Agre P.The aquaporin water channels［J］.Proc Am Thorac Soc，2006，3(1):5.

［3］Mobasheri A，Airley R，Hewitt SM，et al.Heterogeneous expression of the aquaporin 1(AQP1)water channel in tumors of the prostate，breast，ovary，colon and lung:a study using high density multiple human tumor tissue microarrays［J］.Int J Oncol，2005，26(5):1149.

［4］Mizumoto H，Saito T，Ashihara K，et al.Expression of matrix metalloproteinases in ovarian endometriomas:immunohistochemical study and enzyme immunoassay［J］.Life Sci，2002，71(3):259-263.

［5］Osteen KG，Bruner-Tran KL，Keller NR，et al.Progesterone-mediated endometrial maturation limits matrix metalloproteinase(MMP)expression in an inflammatory-like environment:a regulatory system altered in endometriosis［J］.Ann NY Acad Sci，2002，955(1):37-47.

［6］文建國(guó)，張寧，王慶偉，等.子宮內(nèi)膜腺癌組織中水通道蛋白1、2 的表達(dá)［J］.鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，44(2):301-303.

［7］Tamkoshi K，Kikkawa F，Nawa A，et al.Characterization of extracellular matrix-degrading proteinase and its inhibitant gynecology［J］.Fertil Setril，2001，75(1):152-159.

［8］朱虹，蔡麗萍.基質(zhì)金屬蛋白酶、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病關(guān)系研究進(jìn)展［J］.實(shí)用臨床醫(yī)學(xué)，2007，8(5):28-31.

［9］江秀秀，吳瑞僅，林俊.水通道蛋白在女性生殖器官中的生理和病理作用［J］.國(guó)際婦產(chǎn)科學(xué)雜志，2009，36(4):287-290.

［10］Van Langendonekt A，Casanas-Roux F，Donnez J.Oxidative stress and peritoneal endometriosis［J］.Fertil Steril，2002，77(5):861-870.

［11］Martelli M，Campana A，Bischof P.Secretion of matrix metallo proteinases by human endometrial cells in vitro［J］.Reprod Fertil，1993，98(5):67-76.

［12］Jablonski EM，Webb AN，McConnell NA，et al.Plasma membrane aquaporin activity can affeet the rate of apoptosis but is inhibited after aoptotic volume decrease［J］.Am J physiol Cell physiol，2004，286(4):975-985.