自制尿微量蛋白質(zhì)控液測(cè)定的應(yīng)用

解冰，江利萍，王軍，夏商

(鎮(zhèn)江市中西醫(yī)結(jié)合腎臟病研究所，江蘇鎮(zhèn)江212028)

自制尿微量蛋白質(zhì)控液測(cè)定的應(yīng)用

解冰，江利萍，王軍，夏商

(鎮(zhèn)江市中西醫(yī)結(jié)合腎臟病研究所，江蘇鎮(zhèn)江212028)

目的通過(guò)自制尿微量蛋白質(zhì)控液對(duì)尿微量白蛋白(UmAlb)、α1-微球蛋白(α1-MG)、β2-微球蛋白(β2-MG)的測(cè)定進(jìn)行質(zhì)量控制。方法采用全自動(dòng)生化分析儀對(duì)UmAlb、α1-MG、β2-MG的進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定方法為免疫比濁法，根據(jù)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分析并作出處理意見(jiàn)。結(jié)果UmAlb第一份質(zhì)控液的第38次和第二份質(zhì)控液的第40次和第47次均有超出3SD的失控現(xiàn)象；α1-MG第一份質(zhì)控液的第30次和第二份質(zhì)控液的第34次各有一次超出3SD的失控現(xiàn)象；β2-MG第一份質(zhì)控液的第12次有一次超出3SD的失控現(xiàn)象。結(jié)論測(cè)定前一定要先行檢查試劑，試劑如果不夠做一批結(jié)果時(shí)，就直接將試劑換掉，并重新定標(biāo)后再做標(biāo)本，這樣才可以避免發(fā)生失控現(xiàn)象，保證臨床結(jié)果有較好的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。

質(zhì)控液；尿微量白蛋白；α1-微球蛋白；β2-微球蛋白

尿微量蛋白測(cè)定有很多項(xiàng)目，如尿微量白蛋白(Urine microalbumin，UmAlb)、α1-微球蛋白(α1-Microglobulin，α1-MG)、β2-微球蛋白(β2-Microglobulin，β2-MG)、α2-微球蛋白(α2-Microglobulin，α2-MG)、視黃醇結(jié)合蛋白(Retinol Binding Protein RBP)、TH-蛋白(T-H Protein，THP)、轉(zhuǎn)鐵蛋白(Transferrin，TF)等。我們?cè)谌粘９ぷ髦虚_(kāi)展U-mAlb、α1-MG和β2-MG這3個(gè)項(xiàng)目的測(cè)定。雖然目前各實(shí)驗(yàn)室均可開(kāi)展UmAlb、α1-MG、β2-MG的測(cè)定，方法學(xué)也有多種如免疫透射比濁法、免疫散射比濁法、ELISA、放射免疫分析法等。但工作中一般是用試劑盒內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行定標(biāo)后就做樣本，一般不用質(zhì)控液來(lái)進(jìn)行質(zhì)量控制，有的項(xiàng)目如β2-MG試劑盒內(nèi)帶質(zhì)控液，可以進(jìn)行質(zhì)量控制，但量少，不能多次地進(jìn)行測(cè)量，故不能常規(guī)性地用于臨床質(zhì)控分析，而UmAlb、α1-MG試劑盒內(nèi)沒(méi)有質(zhì)控液，故不能對(duì)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控分析。所以我們?cè)O(shè)想通過(guò)對(duì)自制尿微量蛋白質(zhì)控液的測(cè)定，這樣可以對(duì)我們?nèi)粘z測(cè)的結(jié)果起著質(zhì)量分析和控制作用，使發(fā)出的每一份報(bào)告均可靠、可信，對(duì)患者的治療和監(jiān)測(cè)起著一種積極的作用。現(xiàn)將結(jié)果匯報(bào)如下。

1 材料與方法

1.1 質(zhì)控品制備我們通過(guò)留取腎功能衰竭二期(177μmol/L＜Scr≤444μmol/L)[1]病人的尿液(晨第二次尿)3份，每份約50ml，混勻后用0.1mol/L NaOH或0.1mol/LHCl調(diào)整pH為7.0左右，中速定性濾紙(杭州富陽(yáng)產(chǎn))過(guò)濾，用LXJ-II型離心機(jī)3000rpm離心20min，取上清液約100ml，加NaN30.5g溶解后，用塑料試管分裝加塞，每管約0.5ml，置-70℃冰箱保存，作為質(zhì)控物使用，用時(shí)取1支放37℃水溫箱速融。

1.2 儀器BS-200全自動(dòng)生化儀。

1.3 試劑和方法UmAlb試劑盒由寧波賽克生物技術(shù)有限公司提供，免疫比濁法，波長(zhǎng)：340nm；β2-MG試劑盒由北京科美生物技術(shù)有限公司提供，乳膠增強(qiáng)免疫比濁法，波長(zhǎng)：540nm；α1-MG試劑盒由寧波賽克生物技術(shù)有限公司提供，免疫比濁法，波長(zhǎng)：600nm。

1.4 操作取10支質(zhì)控液融解后混勻備用，測(cè)定UAlb時(shí)先用生理鹽水稀釋10倍再進(jìn)行操作；β2-MG和α1-MG均用原尿操作。對(duì)上述三項(xiàng)目進(jìn)行定標(biāo)，測(cè)定質(zhì)控液的值并于第二天再取10支質(zhì)控液測(cè)定，測(cè)定的同時(shí)將β2-MG試劑盒內(nèi)的質(zhì)控液當(dāng)作標(biāo)本測(cè)定，要求觀察結(jié)果在1SD內(nèi)。以后每次做標(biāo)本時(shí)取一支當(dāng)做標(biāo)本測(cè)定并做好記錄，如果出現(xiàn)出控現(xiàn)象，則先行檢查試劑，再另取一支重新測(cè)定，如在質(zhì)控允許范圍內(nèi)則將標(biāo)本重新做一遍，如不在允許范圍內(nèi)，則先重新定標(biāo)后測(cè)定質(zhì)控液，如結(jié)果在質(zhì)控允許范圍內(nèi)后再將標(biāo)本重新做一遍。

1.5 統(tǒng)計(jì)質(zhì)控圖用EXCEL作圖，計(jì)算靶值及標(biāo)準(zhǔn)差用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。

2 結(jié)果

我們工作安排一般是每周測(cè)定2次，現(xiàn)已1年多，對(duì)臨床結(jié)果起著較好的監(jiān)控作用。UmAlb質(zhì)控液初定靶值(x±s)分別為32.5±2.32mg/L和27.5±1.97mg/L,在測(cè)定后重新計(jì)算靶值分別為31.8± 3.24mg/L和27.94±3.15mg/L。在第一份質(zhì)控液的第38次和第二份質(zhì)控液的第40次和第47次均有超出3SD的現(xiàn)象提示為失控；在第一份質(zhì)控液的第8、22次和第二份質(zhì)控液的第5、9、18、34次均有超出2SD的現(xiàn)象提示警告。發(fā)現(xiàn)失控后我們均再次檢查試劑，更換質(zhì)控液并進(jìn)行定標(biāo)后重做，結(jié)果均在控，并顯示在出控后的一個(gè)數(shù)值。

α1-MG質(zhì)控液初定靶值(x±s)分別為13.61± 1.02mg/L和24.61±1.42mg/L。在測(cè)定后重新計(jì)算靶值分別為13.74±1.39mg/L和24.67±1.95mg/L。在第一份質(zhì)控液的第30次和第二份質(zhì)控液的第34次各有一次超出3SD的現(xiàn)象，提示為失控；在第一份質(zhì)控液的第17、25次和第二份質(zhì)控液的第6、10次均有超出2SD的現(xiàn)象，提示警告。失控后我們均再次檢查試劑，更換質(zhì)控液并進(jìn)行定標(biāo)后重做，結(jié)果均在控，并顯示在出控后的一個(gè)數(shù)值。

β2-MG質(zhì)控液初定靶值(x±s)分別為3.45± 0.19mg/L和2.31±0.16mg/L。在測(cè)定后重新計(jì)算靶值分別為3.36±0.25mg/L和2.35±0.20mg/L。β2-MG在第一份質(zhì)控液的第12次有一次超出3SD的現(xiàn)象，提示為失控；在第一份質(zhì)控液的第3、26次和第二份質(zhì)控液的第17、28次均有超出2SD的現(xiàn)象，提示警告。失控后我們均再次檢查試劑，更換質(zhì)控液并進(jìn)行定標(biāo)后重做，結(jié)果均在控，并顯示在出控后的一個(gè)數(shù)值。

導(dǎo)致上述失控的原因經(jīng)檢查均為試劑2用完后，直接添加新的試劑，并且是不同批號(hào)的，易發(fā)生失控現(xiàn)象。究其原因?yàn)槟蛭⒘康鞍诇y(cè)定的標(biāo)本數(shù)量相對(duì)較少，不可能和生化試劑一樣，每次購(gòu)進(jìn)多盒，一般只購(gòu)進(jìn)1～2盒，而且每次用后均是試劑2偏少，故操作人員多不注意，在發(fā)現(xiàn)試劑2沒(méi)有了，就直接添加后再做。而我們所帶的質(zhì)控液均是當(dāng)作標(biāo)本做，沒(méi)有設(shè)置質(zhì)控位，因質(zhì)控位已有生化質(zhì)控液。同時(shí)我們?yōu)椴挥绊憳?biāo)本的順序編號(hào)，所以將所帶質(zhì)控液均放置在標(biāo)本的最后進(jìn)行測(cè)定，所以每次更換試劑后均是在最后測(cè)到質(zhì)控液，我們認(rèn)為這樣操作可以對(duì)結(jié)果的監(jiān)控起著更好的效果。在發(fā)現(xiàn)失控后均首先進(jìn)行檢查試劑，再重新定標(biāo)，再次測(cè)結(jié)果一般均可。在做UAlb時(shí)最易發(fā)生警告現(xiàn)象，也說(shuō)明此項(xiàng)目做的不太理想，以后在做時(shí)一定要多注意觀察。

3 討論

現(xiàn)在使用這幾個(gè)項(xiàng)目的質(zhì)控物較少，進(jìn)口的價(jià)格較貴，不適合中小醫(yī)院臨床的日常工作所用。鄧氏[2]提出稀釋白蛋白質(zhì)控品制備尿微量白蛋白質(zhì)控品的應(yīng)用，只是提出在一個(gè)項(xiàng)目中測(cè)定，不能作為多種項(xiàng)目常規(guī)使用。范德勝[3]只提出兩種方法檢測(cè)質(zhì)控血清白蛋白的結(jié)果分析，但沒(méi)有對(duì)尿液提出方法。李建珍[4]β2-MG蛋白自建檢測(cè)系統(tǒng)及其評(píng)價(jià)，只是對(duì)β2-MG檢測(cè)系統(tǒng)及溯源進(jìn)行了評(píng)價(jià)，未對(duì)其質(zhì)量控制進(jìn)行分析評(píng)價(jià)。蔣紅君[5]某型號(hào)生化分析儀β2-MG蛋白測(cè)定精密度評(píng)價(jià)，也只對(duì)β2-MG檢測(cè)系統(tǒng)的批內(nèi)和總精密度進(jìn)行比較。對(duì)α1-MG的質(zhì)量控制方面的文獻(xiàn)基本沒(méi)有查到。在查閱文獻(xiàn)過(guò)程中沒(méi)有找到更為明確的提出UAlb、β2-MG和α1-MG在日常工作檢測(cè)過(guò)程中的質(zhì)量控制和分析。根據(jù)張瑞[6]提出的“質(zhì)控品是含量已知或未知的處于與實(shí)際標(biāo)本相同或近似基質(zhì)中的特性明確的物質(zhì)，含量已知的室內(nèi)質(zhì)控品用于臨床實(shí)驗(yàn)室日常工作的室內(nèi)質(zhì)控，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)本身也可以用于日常臨床檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)量控制。但由于室內(nèi)質(zhì)量控制的主要目的是為了監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室測(cè)定的重復(fù)性，通常不需要準(zhǔn)確定值的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為室內(nèi)質(zhì)控品，或使用溯源鏈上等級(jí)較低的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)即可”。所以我們就設(shè)想通過(guò)自制一種質(zhì)控物，并在日常工作中使用，這樣可以對(duì)我們的檢驗(yàn)結(jié)果作一監(jiān)測(cè)，以保證檢驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性和準(zhǔn)確性?，F(xiàn)在尿微量蛋白的測(cè)定對(duì)臨床工作有著較為重要的臨床意義[7，8]。

我們的體會(huì)是在做此類(lèi)項(xiàng)目時(shí)，一定要先行檢查試劑，試劑如果不夠做此一批的結(jié)果時(shí)，就直接將試劑換掉，并進(jìn)行定標(biāo)后再做標(biāo)本，這樣才可以避免發(fā)生失控現(xiàn)象，保證臨床結(jié)果有較好的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。

[1]王海燕,鄭法雷,劉玉春,等.原發(fā)性腎小球疾病分型與治療及診斷標(biāo)準(zhǔn)座談會(huì)紀(jì)要[J].中華內(nèi)科雜志,1993,32(2):131.

[2]鄧慶豐,劉芬芳.稀釋白蛋白質(zhì)控品制備尿微量白蛋白質(zhì)控品的應(yīng)用[J].中國(guó)衛(wèi)生產(chǎn)業(yè),2012,10(9):20.

[3]范德勝.兩種檢測(cè)方法測(cè)定質(zhì)控血清及樣本血清白蛋白的結(jié)果分析[J].江西檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2006,24(6):535.

[4]李建珍.β2-微球蛋白自建檢測(cè)系統(tǒng)及其評(píng)價(jià)[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥,2010,19(10):74.

[5]蔣紅君,蔣杰,王凡,等.某型號(hào)生化分析儀β2-微球蛋白測(cè)定精密度評(píng)價(jià)[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012,33(5):590-591.

[6]張瑞,李金明.如何正確使用臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2009,32(1):10-14.

[7]羅琳.尿微量白蛋白測(cè)定在高血壓早期腎損害診斷中的應(yīng)用[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2008,26(6):710.

[8]李秀琴.超敏C反應(yīng)蛋白、尿微量蛋白與同型半胱氨酸在2型糖尿病早期腎損傷中的診斷價(jià)值[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2011,29(6): 680.

R446.12

A

1674-1129(2014)05-0545-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.05.020

2014-03-04；

2014-06-24)