甲胎蛋白異質(zhì)體檢測對鑒別良惡性肝病的價值

劉煥英，劉愛玲，趙鳳梅

甲胎蛋白（AFP）主要來自胚胎的肝細胞，胎兒出生后約2周甲胎蛋白從血液中消失，因此正常人血清中AFP的含量尚不到20 μg／L。目前，臨床上廣泛認可AFP可作為肝細胞癌的診斷以及療效觀察指標(biāo)，但AFP屬于胚胎性蛋白，對診斷肝癌有局限性［1］。因部分良性肝病、生殖系統(tǒng)和胃腸道的一些惡性腫瘤中AFP也升高，且部分肝癌患者AFP始終持續(xù)低濃度陽性。因此，肝癌早期診斷的特異性指標(biāo)具有重要的臨床研究意義。研究發(fā)現(xiàn)，血清總AFP含AFP－L1，來自良性肝病，占其主要部分；AFP－L2來自孕婦；而AFP－L3則為肝癌細胞特異［2］?？侫FP因糖鏈組成和結(jié)構(gòu)上與植物血凝素親和性不同，采用電泳法分離出小扁豆凝集素結(jié)合AFP－L3，其正常參考值為10%～15%，＞15%即可診斷肝細胞肝癌（HCC）。即使總AFP僅輕微升高，或無影像學(xué)證據(jù)，都提示有發(fā)展為HCC可能，凡是AFP－L3＞15%的患者應(yīng)嚴密監(jiān)測并定期隨訪［3］。AFP在患者不同病理情況下產(chǎn)生的分子糖鏈結(jié)構(gòu)各不相同，肝癌病理情況下主要產(chǎn)生與小扁豆凝集素具有強結(jié)合力的甲胎蛋白異質(zhì)體（AFP－L3），美國食品藥品監(jiān)督管理局 （FDA）2005年批準(zhǔn)檢測AFP－L3指標(biāo)用于肝癌預(yù)警，并把AFP－L3診斷肝癌的陽性臨界值定為10%［4］。筆者采用親和微量離心柱法分離AFP－L3，應(yīng)用電化學(xué)發(fā)光法對不同肝病患者總AFP和AFP－L3進行檢測，探討AFP－L3在鑒別良惡性肝病中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選擇筆者所在醫(yī)院 2009年 07月—2013年06月肝病門診及住院患者287例的AFP陽性血清（AFP＞20 μg／L），根據(jù)患者的臨床診斷分為 5組：A 組為 AFP≥400 μg／L 的肝癌患者 86 例，男 46 例，女 40 例，年齡 31～71歲，平均（61．5±10．31）歲；B 組為 AFP＜400 μg／L 的肝癌患者62 例，男 45 例，女 17 例，年齡 25～69 歲，平均（51．3±11．03）歲；C組為肝硬化患者59例，男32例，女27例，年齡28～68歲，平均（47．5±8．41）歲；D 組 38 例慢性肝炎患者，男 25 例，女 13 例，年齡 18～67 歲，平均（37．11±8．34）歲；E 組為自身免疫性肝炎患者42例，男16例，女26例，年齡35～59歲，平均（36．1±10．64）歲。以上 5 組患者的血清標(biāo)本分離后凍存－70℃環(huán)境中。

1．2 儀器與試劑 羅氏COBAS 8000免疫生化一體機及配套試劑（羅氏公司）；親和微量離心柱系統(tǒng)（北京熱景生物技術(shù)有限公司）。

1．3 測定方法 AFP－L3的分離采用親和微量離心柱法，柱內(nèi)預(yù)先裝有耦聯(lián)了小扁豆凝集素的瓊脂糖，可特異性地結(jié)合AFP－L3，當(dāng)血清流過離心管時，樣本中的AFP－L3與管內(nèi)親和介質(zhì)結(jié)合，經(jīng)過清洗和離心洗脫過程，獲得含有AFP－L3的樣本，然后用電化學(xué)發(fā)光法檢測總AFP和AFP－L3的含量，計算 AFP－L3 占 AFP 總量的百分比，AFP－L3／AFP＞10%為陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)［5］。

1．4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS10．0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理。不同組別間 AFP－L3陽性率比較采用 χ2檢驗，P＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

A、B、C、D 及 E 組患者血清 AFP－L3／AFP 陽性者分別為77 （89．53%）、50 （80．65%）、6 （10．17%）、4 （10．52%） 及 3（7．14%）例。肝癌組與非肝癌組AFP－L3／AFP陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（85．81%vs 9．35%，χ2＝124．34，P＜0．01）；肝癌AFP≥400 μg／L 組與 AFP＜400 μg／L 組間、 肝硬化組與慢性肝炎組（P＝0．08，P＞0．05）、慢性肝炎組與自身免疫肝炎組（P＝0．06，P＞0．05）、自身免疫肝炎組與肝硬化組（P＝0．07，P＞0．05）的AFP－L3／AFP陽性率比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。

3 討 論

肝癌是指發(fā)生于肝臟的惡性腫瘤，包括原發(fā)性肝癌和轉(zhuǎn)移性肝癌兩種，人們?nèi)粘Ｕf的肝癌指的多是原發(fā)性肝癌。原發(fā)性肝癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一，根據(jù)最新統(tǒng)計，全世界每年新發(fā)肝癌患者約60萬，居惡性腫瘤的第五位。原發(fā)性肝癌按細胞分型可分為肝細胞型肝癌、膽管細胞型肝癌及混合型肝癌。甲胎蛋白由新生的幼稚肝細胞分泌，胎兒的肝細胞沒有發(fā)育（分化）完全，分泌的甲胎蛋白量很大，所以孕婦的甲胎蛋白會呈陽性。過去一直認為是診斷原發(fā)性肝癌的特異性腫瘤標(biāo)志物，具有確立診斷、早期診斷、鑒別診斷的作用［6］。近年大量的臨床卻發(fā)現(xiàn)，部分肝硬化患者會長期出現(xiàn)AFP達到上千，但多年都沒有肝癌的跡象；同時發(fā)現(xiàn)約20%的晚期肝癌患者，直至病故前，AFP 仍不超過 10 μg／L［7］。

本文結(jié)果顯示，AFP≥400 μg／L 和 AFP＜400 μg／L 的肝癌組其總AFP－L3／AFP陽性率明顯高于非肝癌組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，表明用本方法檢測的AFP－L3／AFP＞10%為診斷指標(biāo)時，可以有效地區(qū)分良、惡性肝病患者；而低濃度AFP陽性肝癌組與高濃度AFP陽性肝癌組相比，其AFP－L3陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義，表明AFP－L3用于肝癌診斷不受AFP≥400 μg／L作為肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)的限制，如果患者血清中總AFP只有輕微升高，而AFP－L3所占比例超過10%，就提示肝癌發(fā)生的可能性較大［8］。對這樣的患者進行隨訪和嚴密監(jiān)控是很有必要的。筆者同時對非肝癌患者之間AFP－L3／AFP陽性率進行比較，結(jié)果顯示差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，與文獻報道基本一致［9］。

［1］韓 風(fēng)，邱大鵬，陳偉瑜，等．甲胎蛋白異質(zhì)體和甲胎蛋白信使核糖核酸用于診斷肝細胞癌［J］．中國臨床醫(yī)學(xué)，2010，17（1）：45－46．

［2］沈 錚，沈 霞．甲胎蛋白及其異質(zhì)體檢測的臨床應(yīng)用價值［J］．上海醫(yī)學(xué)檢驗雜志，2000，15（6）：361－362，370．

［3］鄺妙歡，歐陽文婷，林建華，等．甲胎蛋白異質(zhì)體3、異常凝血酶原、甲胎蛋白檢測肝細胞癌的對照研究［J］．中華普通外科學(xué)文獻（電子版），2010，04（4）：311－314．

［4］ 董懷平，王 力，趙岐剛，等．AFU、AFP－L3、HCY聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌早期診斷臨床價值的研究［J］．中國實驗診斷學(xué)，2007，11（4）：485－487．

［5］高 錦，徐愛芳，鄭虹英，等．微量離心柱法檢測AFP－L3的臨床應(yīng)用研究［J］．中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志，2010，24（6）：461－463．

［6］ 張國慶，王 斌，劉振疆，等．AFP、AFP－L3和AFU聯(lián)合檢測在原發(fā)性肝癌診斷中的應(yīng)用［J］．新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2005，28（2）：150－152．

［7］ 周文策，易劍鋒，李玉民．AFP－L3、GP73 及 DLC－1在原發(fā)性肝癌中的研究進展［J］．國際外科學(xué)雜志，2009，36（10）：712－715．

［8］ 王向臣，曲建香，鹿理友，等．AFP、AFP－L3、GP73 聯(lián)合檢測在肝癌診斷中的應(yīng)用［J］．醫(yī)學(xué)檢驗與臨床，2011，22（6）：50－52．

［9］ 蔣 英，謝 延，宮 賀，等．AFP－L3在肝細胞癌早期診斷中的應(yīng)用價值研究［J］．中國熱帶醫(yī)學(xué)，2009，9（2）：292－293．