0.3%氯化鈉溶液在血性胸水抗酸桿菌檢測中的應用

盧立榮，盧立青，肖小敏

(1、吉安市第三人民醫(yī)院檢驗科,江西 吉安343000；2、新干縣沂江鄉(xiāng)衛(wèi)生院，江西 新干；3、吉安市樟山鄉(xiāng)衛(wèi)生院，江西 吉安)

正常人胸膜腔內(nèi)每天約有500～1000ml的液體形成和吸收，通常情況下，胸膜腔內(nèi)有少量液體，在呼吸運動時起潤滑作用，當發(fā)生某種病理情況影響到胸膜，無論是壁層胸膜產(chǎn)生胸水或是臟層胸膜吸收胸水的速率有變化，都可形成胸水，如胸膜炎癥、腫瘤、門靜脈肝硬化，結核是形成胸水的主要病因[1]。

為了診斷胸水的性質(zhì)，明確病因，臨床上常要求對胸水做抗酸染色查找抗酸桿菌，目前臨床上應用廣泛的是直接離心沉淀涂片法，但多數(shù)送檢的胸水中含有大量的紅細胞，即所謂血性胸水，其導致抗酸染色不易著色，抗酸桿菌檢出率低，筆者在臨床工作中發(fā)現(xiàn)使用0.3%的氯化鈉溶液預處理血性胸水可以使抗酸染色更易著色，提高抗酸桿菌檢出率，現(xiàn)介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料來源 本院臨床送檢經(jīng)過乙二胺四乙酸二鉀抗凝處理的血性胸水標本73份。

1.2 儀器 常州平凡儀器儀表有限公司 TDZ4-WS型離心機。

1.3 試劑 石碳酸復紅染液，亞甲藍染液，2%的鹽酸乙醇，0.3%氯化鈉溶液。

1.4 方法 把每份胸水分成兩管，其中一管經(jīng)3000 r/min離心30min取試管底部沉淀物0.01 ml涂于載玻片上10×10mm范圍烘干。另一管按1∶10的比例放入0.3%氯化鈉溶液，視紅細胞的多少可適當增減氯化鈉溶液的量，放置5min，溶血后顯微鏡下觀察沒有紅細胞和碎片，再以3000r/min離心30 min，棄去上清液，按照第一管的方法取試管底部沉淀物0.01ml涂于載玻片上10mm×10mm范圍，然后兩管均按以下方法染色：(1)滴加石碳酸復紅染色液布滿胸水液膜，小心加熱，出現(xiàn)蒸汽后脫離火焰，保持染色5min；(2)讓細流水自玻片左側的1/3處輕輕沖洗，洗去染色液，瀝干剩余水分；(3)自液膜上端外緣滴加2%的鹽酸乙醇脫色液，布滿液膜，脫色至液膜無紅色為止；(4)洗去脫色液，瀝干剩余水分，滴加亞甲藍復染液復染30s；(5)流水洗去復染液，瀝干剩余水分，待涂片自然干燥后鏡檢[2]。

1.5 結果判斷 (-)：連續(xù)觀察300個不同視野，未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌；(±)：1～2條/300視野；(1+):3～9條/100視野；(2+):1～9條/10視野；(3+):1～9條/每視野；(4+)≥10 條/每視野。

1.6 統(tǒng)計學方法 采用χ2檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

以找到1～2條抗酸桿菌/300個油鏡視野作為陽性。73份血性胸水經(jīng)直接沉淀涂片法查出抗酸桿菌陽性標本2例，陽性率為2.68%，而加入0.3%氯化鈉溶液處理后的涂片查出抗酸桿菌陽性標本6例，陽性率為8.21%。采用χ2檢驗，P<0.05兩者差異有統(tǒng)計學意義。

3 討論

結核桿菌是引起結核病的病原菌，可侵犯全身各器官，但以肺結核為最多見，并且可擴散至胸腔引起胸膜炎而造成胸腔積液。結核桿菌細長略彎曲，端極鈍園，呈單個或分枝狀排列，有莢膜、無鞭毛、無芽胞。在陳舊的病灶和培養(yǎng)物中，形態(tài)常不典型，可呈顆粒狀，串球狀，短棒狀，長絲形等，臨床上檢測結核桿菌有分離培養(yǎng)法，多聚酶鏈反應法(PCR)，涂片抗酸染色法等[4]，但細菌培養(yǎng)法耗時較長，需孵育2～6周方可見到菌落，不利于病人的早期診斷和治療，PCR有一定條件限制，不適合基層醫(yī)院，而涂片抗酸染色查找結核桿菌快速、簡便、成本低，陽性可作為結核診斷的重要依據(jù)。

創(chuàng)傷、惡性腫瘤、結核性積液均可引起血性胸水，血性胸水涂片抗酸染色常作為基層醫(yī)院的常規(guī)檢驗。在血性胸水中用抗酸染色查找抗酸桿菌時血性胸水中紅細胞可蓋在抗酸桿菌上面，影響抗酸染色的效果和染色后鏡檢視野的清晰度，造成漏檢。用0.3%氯化鈉溶液處理血性胸水，可以使血液中的紅細胞在低滲環(huán)境中充分裂解。清除血性胸水中的紅細胞后，抗酸桿菌與染料結核能力結合增強，利于診斷，提高了抗酸染色陽性的檢出率，且該法具有操作簡便、快速、價廉，是基層醫(yī)院的一種有效方法。

[1]王兆宇.多項指標檢測在胸腔積液鑒別中的應用[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2008,26(6):629-630.

[2]葉應嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].第3版.南京:東南大學出版社,2006:981－983.

[3]熊立凡,劉成玉.臨床檢驗基礎[M].第4版．北京:人民衛(wèi)生出版社2008:225-232.

[4]李寧,伍嚴安,胡辛蘭,等.結核分枝桿菌的實驗室檢測方法學評價及耐藥情況分析[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2013,31(3):214-216.