乳腺癌組織中CD147和Ki67的表達(dá)及意義

郭秀芳

目前，Ki67與臨床病理指標(biāo)檢測的關(guān)系研究仍有不同結(jié)論［1］。CD147蛋白能夠介導(dǎo)細(xì)胞間的黏附，免疫球蛋白超家族的跨膜蛋白的產(chǎn)生來促進(jìn)基質(zhì)的降解［2］。2008至2012年，我們采用免疫組織化學(xué)染色方法檢測了乳癌組織標(biāo)本中CD147蛋白、Ki67表達(dá)，探討兩者的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 材料 手術(shù)切除乳腺癌標(biāo)本78份，所有患者術(shù)前均未做放療、化療等抗腫瘤治療。78例中年齡25～71歲;組織學(xué)分類和分化程度依據(jù)2000年世界衛(wèi)生組織標(biāo)準(zhǔn)，所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性緩沖甲醛固定24 h，石蠟包埋后3 μm厚連續(xù)切片，備做HE及免疫組織化學(xué)染色。

1.2 免疫組化方法 (1)烤片，烤箱62℃，2 h，二甲苯脫蠟40 min，無水乙醇、95%、85%、75%梯度乙醇10 min;(2)3%過氧化氫5 min以消除內(nèi)源性過氧化物酶活性;將載玻片浸泡于PBS(pH值=6.0)中，高溫高壓抗原修復(fù)2.5 min;(3)10%正常山羊血清工作液封閉;滴加稀釋的兔抗人Ki67抗體(稀釋比1∶100)、CD147蛋白抗體(稀釋比1∶100)，4℃孵育過夜;(4)滴加二抗工作液37℃反應(yīng)1 h;(5)DAB顯示，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核、脫水，中性樹脂封片，觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。將已知乳腺癌組織陽性切片結(jié)果作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 評分標(biāo)準(zhǔn) 觀察染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分率，染色強(qiáng)度:無染色為1分，中染色為2分，強(qiáng)染色為3分。陽性細(xì)胞百分率評分:＜5%為0分，5% ～24%為1分，25% ～49%為2分，50% ～75%為3分;＞75%為4分。兩項(xiàng)評分的成績0分為陰性，1～3分為(+)，4～6分為(++)，7～12為(+++)。其中(+)～(+++)為Ki67、CD147蛋白表達(dá)陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Ki67在乳腺癌中與年齡關(guān)系 在78例乳腺癌患者中，20～30歲陰性 37.50%，30～50歲陰性37.50%，59～60歲陰性25%，60～70歲 ki67無表達(dá)。20～30歲陽性率(+～+++)41.42%，31～50歲陽性率25.71%，51～60歲陽性率18.57%，61 ～70 歲陽性率12.85%。年齡越小，ki67陽性率越高，增殖指數(shù)的越高表達(dá)，危險(xiǎn)度越高，預(yù)后越差。年齡越大，ki67表達(dá)陽性率越低(r= －0.469，P＜0.05)。見表1。

表1 Ki67在乳腺癌中與年齡關(guān)系 例

2.2 CD147和Ki67陽性顆粒免疫組化染色 Ki67陽性顆粒位于細(xì)胞核內(nèi)，顏色深棕，Ki67指數(shù)指100個(gè)細(xì)胞中Ki67陽性細(xì)胞數(shù)，指數(shù)＜5%為陰性。指數(shù)＞5%為陽性。CD147陽性顆粒位于腫瘤細(xì)胞的質(zhì)膜上，分化好的基底部表現(xiàn)明顯，間質(zhì)細(xì)胞不表達(dá)。見圖1、2。

圖1 CD147陽性(免疫組化 ×40)

圖2 Ki67陽性(免疫組化×40)

2.3 CD147蛋白表達(dá)與乳腺癌臨床病理關(guān)系 CD147在乳腺癌病例中高分化陽性率58.06%，低分化85.10%;浸潤由淺至身分別為 25.00%、39.28%、90.47%、88.00%;淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移案例陽性率為48.07%，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移案例陽性率為73.07%;CD147蛋白表達(dá)與乳腺癌患者的分化、浸潤、和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)。見表2。

表2 CD147蛋白表達(dá)與乳腺癌臨床病理關(guān)系 例(%)

2.4 CD147蛋白與Ki67表達(dá)相關(guān)性 Ki67在乳腺癌案例中陰性率為5.71%，(+)約22.85%，(++)約28.51%，(+++)21.42%。CD147在乳腺癌案例中陰性率為 35.71%，(+)約 37.14%，(++)約54.28%，(+++)45.71%。CD147 陽性率越高，ki67的增殖指數(shù)越高，CD147陽性率越高惡性程度越高。CD147的高標(biāo)達(dá)可促使腫瘤細(xì)胞的增殖，使ki67增值指數(shù)增高。CD147蛋白與Ki67表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.469，P＜0.05)。見圖3。

圖3 CD147蛋白與Ki67表達(dá)相關(guān)性

3 討論

乳腺癌進(jìn)來發(fā)病率呈上升趨勢，5年生存率為9%～40%。腫瘤抑制基因的失活或原癌基因的激活是腫瘤發(fā)生的重要環(huán)節(jié)。

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與細(xì)胞的異常增殖密不可分.細(xì)胞增殖是一個(gè)被高度協(xié)調(diào)機(jī)制控制的基本生物過程，人體復(fù)雜的調(diào)控機(jī)制負(fù)責(zé)胚胎的正常發(fā)育、傷害和感染等的調(diào)控，一旦調(diào)控平衡被打破，就可能產(chǎn)生腫瘤［3］。乳腺癌是嚴(yán)重危害人類健康的最常見惡性腫瘤，他的侵襲轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡的重要原因，細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶刺激物屬于免疫球蛋白超家族［4］，在腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移過程中，腫瘤細(xì)胞降解由基底膜和細(xì)胞外結(jié)締組織組成的ECM，向深部浸潤性生長;穿透血管壁和淋巴管壁，轉(zhuǎn)移到全身各處。

Ki67抗原是一種與增殖細(xì)胞相關(guān)的核抗原，它也是目前較肯定的細(xì)胞核增殖標(biāo)志基因，由于Ki67在靜息細(xì)胞中表達(dá)缺乏而在增殖活躍的組織中廣泛表達(dá)的特性，其半衰期短，脫離細(xì)胞周期層迅速降解，啟發(fā)了人們研究將其作為細(xì)胞增殖標(biāo)記物的可能性［5］。Ki67抗原在多種惡性腫瘤的表達(dá)高于其相應(yīng)正常組織。研究表明，Ki67表達(dá)能可靠而迅速地反映乳腺癌組織增值率，其表達(dá)的高低對評價(jià)乳腺癌的增殖狀態(tài)，年齡越低ki67增值指數(shù)越高，陽性率越高，ki67表達(dá)有重要的預(yù)后意義，是有效的預(yù)后判斷指標(biāo)。生物學(xué)行為的評估，腫瘤的臨床化療，推斷其預(yù)后有一定指導(dǎo)意義。

CD147分子廣泛分布于人體各個(gè)組織器官，是一種高度糖化的跨膜糖蛋白［6］。參與了機(jī)體多種生理和病理過程。CD147分子在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)升高并與腫瘤的分化程度、浸潤和轉(zhuǎn)移相關(guān)，間接表達(dá)了組織細(xì)胞的惡性程度，與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展有一定的關(guān)系。但有關(guān)CD147，在乳癌中表達(dá)的研究甚少。本研究發(fā)現(xiàn)，CD147在乳癌中呈高表達(dá)，與Ki67類似，CD147蛋白表達(dá)得越高，乳癌的生物學(xué)指標(biāo)越差。提示其可能參與了乳癌發(fā)展和轉(zhuǎn)移，在人的乳腺癌細(xì)胞中有豐富的CD147、Ki67表達(dá)。因此，以CD147分子為靶點(diǎn)，阻斷其信號傳導(dǎo)途徑來治療乳腺癌的理論上是成立的，為下一步的研究打下了基礎(chǔ)。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CD147與Ki67表達(dá)呈正相關(guān)。推測在乳癌的浸潤和轉(zhuǎn)移中二者可能有協(xié)同作用，共同促進(jìn)乳癌的演進(jìn)。通過檢測二者在乳腺癌中的表達(dá)，對于估計(jì)原發(fā)性乳腺癌的治療、預(yù)后有一定的參考價(jià)值。

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