黃花倒水蓮研究進(jìn)展

費(fèi)希同，唐軍榮 ，巨苗苗，林 源 ，李 斌，辛培堯*

(1.西南林業(yè)大學(xué) 國(guó)家林業(yè)局西南地區(qū)生物多樣性保育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650224；2.西南林業(yè)大學(xué) 林學(xué)院，云南 昆明 650224)

黃花倒水蓮研究進(jìn)展

費(fèi)希同1，2，唐軍榮1，2，巨苗苗1，2，林 源1，2，李 斌2，辛培堯1，2*

(1.西南林業(yè)大學(xué) 國(guó)家林業(yè)局西南地區(qū)生物多樣性保育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650224；2.西南林業(yè)大學(xué) 林學(xué)院，云南 昆明 650224)

黃花倒水蓮主要分布于我國(guó)湖南、廣西、廣東、福建和云南等地，是一種珍貴的藥用植物。對(duì)近年來(lái)黃花倒水蓮在化學(xué)成分、藥理活性和人工繁殖等方面的研究進(jìn)行了概述，提出了存在的問(wèn)題，給出了一定的建議，以期為該植物進(jìn)一步的合理開(kāi)發(fā)利用提供參考。

黃花倒水蓮； 組織培養(yǎng)； 成分提??； 研究進(jìn)展

黃花倒水蓮(PolygalafallaxHemsl)是遠(yuǎn)志科遠(yuǎn)志屬的植物，又稱(chēng)黃花參、黃花吊水蓮、觀音串等，一般生長(zhǎng)在海拔400 m以上的區(qū)域，主要分布于我國(guó)湖南、廣西、廣東、福建和云南等地[1-3]。黃花倒水蓮為多年生常綠灌木，高1.5～2 m，枝干灰綠色，被短柔毛。黃花倒水蓮對(duì)光照要求高，常生長(zhǎng)于光照較好的山谷及灌木叢中，喜濕，降水較大的山地密林分布較多[4]，一般不成片分布[5]。民間主要選取黃花倒水蓮根部作為入藥，其功效為活血調(diào)經(jīng)，健脾利濕，補(bǔ)益氣血。近年來(lái)，有關(guān)黃花倒水蓮的研究，主要集中在化學(xué)成分、藥理活性、人工繁殖及栽培方面。本文概述了黃花倒水蓮在上述方面的研究進(jìn)展，提出存在的問(wèn)題，并就相關(guān)問(wèn)題給出了一定的建議，以期為黃花倒水蓮的合理開(kāi)發(fā)利用提供理論參考。

1 化學(xué)成分及提取工藝

對(duì)黃花倒水蓮中所含皂苷、多糖、酮類(lèi)進(jìn)行分析，并優(yōu)選最佳提取工藝。

1.1 皂苷類(lèi)

黃花倒水蓮含有皂苷成分，一般以根部含量最多，而葉和莖中較少。在皂苷成分中以五環(huán)三萜皂甙(Reinioside C)含量最高[4，6]。徐康平等[7]從其根部分離提取了4種可有效降低血脂的皂苷類(lèi)化合物。李玲等[8]用均勻設(shè)計(jì)法探索提取黃花倒水蓮總皂苷，并對(duì)提取溶劑(乙醇)的濃度、用量及提取時(shí)間采用均勻設(shè)計(jì)法進(jìn)行優(yōu)選，最后獲得最佳提取工藝為：藥材浸泡12 h、提取2次。第一次加水量為藥材的8倍，提取時(shí)間為1 h；第二次加水量為藥材的6倍，提取時(shí)間為0.5 h。

李進(jìn)華等[9]稱(chēng)取20 kg黃花倒水蓮的根，將其粉碎后用甲醇常溫浸泡提取，回收甲醇，然后加水用正丁醇萃取，減壓回收正丁醇，利用硅膠柱分離，然后用氯仿-甲醇梯度洗脫，最后經(jīng)硅膠柱反復(fù)層析后得到提取物。提取分離了4個(gè)皂苷、1個(gè)甾體苷元和1個(gè)神經(jīng)節(jié)糖苷。分別鑒定為豆甾-7，22-二烯-3-O-β-吡喃葡萄糖苷(stigmasta-7，22-dien-3-O-β-D-glucopyranoside)(Ⅰ)，遠(yuǎn)志皂苷(tenuifolin)(Ⅱ)，reiniosideC(Ⅲ)，reiniosideA(Ⅳ)，豆甾-7，22-二烯-3-醇(stigmasta-7，22-dien-3-ol)(Ⅴ)和araliacerebroside(Ⅵ)。黃花倒水蓮的有效成分是皂苷，總皂苷含量約為5%左右。

對(duì)于黃花倒水蓮成分研究最多的是皂苷類(lèi)物質(zhì)，研究?jī)?nèi)容主要是對(duì)皂苷類(lèi)物質(zhì)提取工藝的優(yōu)化和皂苷化學(xué)結(jié)構(gòu)的測(cè)定，但還缺乏對(duì)相應(yīng)化合物藥效的研究。

1.2 多糖類(lèi)

研究人員采用均勻設(shè)計(jì)法研究黃化倒水蓮中所含總的多糖的最佳提取工藝，最后探索出的最佳提取溫度為99 ℃，料液的比例為1∶100。對(duì)多糖的活性進(jìn)行研究的結(jié)果表明：在濃度為20 mg/L時(shí)，對(duì)某些種子的萌發(fā)有顯著的促進(jìn)作用[10]。盛家榮等[11]以黃花倒水蓮莖為材料提取粗多糖：首先對(duì)黃花倒水蓮的莖進(jìn)行烘干粉碎，用乙醇與乙醚不同比例的混合液進(jìn)行回流脫脂，然后水提3次，過(guò)濾，加95%乙醇，沉淀、干燥，提取黃花倒水蓮的粗多糖。

然而，黃花倒水蓮多糖類(lèi)的提取，還停留在總多糖含量的提取階段，對(duì)其中的具體成分研究不夠深入。相關(guān)具體成分含量的測(cè)定以及理化性質(zhì)的研究有待進(jìn)一步加強(qiáng)。

1.3 酮類(lèi)

朱丹妮等[6]從黃花倒水蓮中分離得到5個(gè)酮類(lèi)。其中1-羥基-2，4-二甲氧基酮為天然產(chǎn)物，6-羥基-1-甲氧基-2，3-亞甲二氧基酮為新發(fā)現(xiàn)的化合物。另有學(xué)者對(duì)黃花倒水蓮的總黃酮進(jìn)行最佳提取條件的研究，采用超聲波法進(jìn)行優(yōu)化提取，最佳提取條件為：70%乙醇，料液比1∶20，超聲作用時(shí)間為20 min，溫度80℃，超聲功率為50 W。最終提取量高達(dá)3.71 mg/L，這是較方便快捷的提取工藝[12]。

此外，林黎琳等[13]利用多種色譜技術(shù)進(jìn)行提取和純化，根據(jù)理化和光譜手段分析鑒定結(jié)構(gòu)，在該植物根部提取到了7種酮類(lèi)化合物。同時(shí)，有學(xué)者在黃花倒水蓮中提取到了1，7-二甲氧基-2，3-亞甲二氧基酮(1，7-dimethoxy-2，3-methylenedioxyxanthone)，這也是該化合物首次從黃花倒水蓮中提取得到[14]。

2 藥理研究

在藥理方面，主要研究了黃花倒水蓮在抗炎、免疫增強(qiáng)、調(diào)脂、耐缺氧、抗病毒等方面的作用。

2.1 抗炎

黃花倒水蓮具有清除DPPH、羥自由基、超氧陰離子的作用，這一點(diǎn)就是黃花倒水蓮具有抗炎、抗衰老的理論支持[15]。另有試驗(yàn)證明，黃花倒水蓮水提取液可以顯著抑制二甲苯導(dǎo)致的小鼠耳廓腫脹及組織胺引起小鼠皮膚通透性增加，具有明顯的抗炎功能[16]。此外，黃花倒水蓮口服液(PAD)還可以顯著增強(qiáng)小鼠抗過(guò)氧化脂質(zhì)的功能，而且PAD可以輕微的降低心肌、肝臟、血清中的過(guò)氧化脂的含量[17]。

2.2 免疫增強(qiáng)

在黃花倒水蓮中提取的多糖能夠增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬能力，并且可以促進(jìn)抗體生成以及提高淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率[18]。

2.3 調(diào)脂

黃花倒水蓮總皂苷對(duì)高血脂的家兔具有顯著的降脂作用。有試驗(yàn)證明[19]，黃花倒水蓮可降低新西蘭兔血清中的血漿總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)以及丙二醛(MDA)含量，還可降低肝組織中TC、TG含量并升高血清中高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)含量和SOD活性并呈劑量相關(guān)性。

2.4 耐缺氧

有研究表明[20]，小鼠在密閉容器中，主要反應(yīng)在心和腦缺氧。黃花倒水蓮的提取物具有延長(zhǎng)在常壓缺氧條件下小鼠的生存時(shí)間，能夠明顯延長(zhǎng)斷頭小鼠的喘息時(shí)間，能明顯延長(zhǎng)皮下注射異丙腎上腺素的小鼠在常壓缺氧條件下的生存時(shí)間。這說(shuō)明黃花倒水蓮水提取物具有顯著的耐缺氧作用，可能對(duì)腦缺氧或心肌缺血具有改善作用。另外，更多研究也證明了黃化倒水蓮具有抗衰老、改善心肌缺血等作用[21-25]。

2.5 抗病毒

李藥蘭等[26]對(duì)黃花倒水蓮的提取物進(jìn)行了研究，其中一些化合物被證實(shí)在體外對(duì)單純皰疹I(lǐng)型病毒(HSV-1)以及柯薩奇病毒(Cox B3)有一定抗性。并且首次研究該植物化學(xué)成分的抗病毒作用。李梨平等[27]研究3種不同濃度的黃花倒水蓮水煎液對(duì)乙肝病毒(HBeAg)的作用，結(jié)果表明: 3種水煎液對(duì)該病毒均有抑制作用，但隨著藥物的稀釋?zhuān)湟种谱饔靡苍跍p弱。他們提出在使用黃花倒水蓮提取液相關(guān)的藥劑時(shí)，應(yīng)注意濃度問(wèn)題，濃度過(guò)低，則發(fā)揮不出應(yīng)有的效果。

上述研究，為黃花倒水蓮藥用開(kāi)發(fā)提供了理論依據(jù)。

3 人工繁殖

隨著藥材市場(chǎng)需求的不斷增加，黃花倒水蓮一再出現(xiàn)供不應(yīng)求，甚至緊缺的狀況。野生資源不斷被挖掘利用，已難以滿(mǎn)足市場(chǎng)需求。目前主要的人工繁殖方式是種子繁殖和組織培養(yǎng)。以種子繁殖居多，但其繁殖能力弱[28]，而組織培養(yǎng)應(yīng)用于黃花倒水蓮的繁殖，已取得了一定成效。

3.1 種子繁殖

有學(xué)者對(duì)黃花倒水蓮種子的萌發(fā)特性進(jìn)行了研究[29]，對(duì)光照、溫度、基質(zhì)、成熟程度、晾曬和激素處理等方面進(jìn)行探討。結(jié)果表明: 溫度對(duì)種子的萌發(fā)有較大的影響，光照等因素對(duì)萌發(fā)率影響較小，通過(guò)GA3浸泡可顯著提高種子的發(fā)芽率。研究表明，黃花倒水蓮種子的最佳發(fā)芽條件為：溫度25℃、光照、100 mg/L的GA3浸種6 h。

3.2 組織培養(yǎng)

黃花倒水蓮依靠自然繁殖，其發(fā)芽率低、扦插成活困難[28，30]。因此，依靠自然條件或傳統(tǒng)人工栽培難以滿(mǎn)足其市場(chǎng)需求。而組織培養(yǎng)可有效改變黃花倒水蓮材料緊缺的現(xiàn)狀。

黃花倒水蓮的組織培養(yǎng)基一般是MS(也有學(xué)者使用WPM)，添加一定濃度的激素，如6-BA、NAA、IBA、2，4-D等進(jìn)行培養(yǎng)。

李翠蘭等[30]設(shè)置不同濃度的激素，最后認(rèn)為外植體最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+BA0.3 mg/L+NAA 0.05 mg/L，材料誘導(dǎo)率為90%，生長(zhǎng)狀態(tài)良好。另有學(xué)者使用1/2MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L產(chǎn)生了更高的誘導(dǎo)率為95.1%[31]。羅萬(wàn)業(yè)等[32]對(duì)黃花倒水蓮誘導(dǎo)后的芽進(jìn)行增殖培養(yǎng)，最終分析認(rèn)為，在MS培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加6-BA 2.0 mg/L、NAA 0.1 mg/L為黃花倒水蓮的最佳增殖激素配方組合，誘導(dǎo)率可高達(dá)93%，增殖系數(shù)為3.1。

李翠蘭等[30]設(shè)置7種不同配比的培養(yǎng)基，探討了黃花倒水蓮生根的最佳配方組合，結(jié)果表明：在生根過(guò)程中僅使用空白MS培養(yǎng)基是不能形成根的；單獨(dú)使用IBA、NAA、2，4-D的效果不佳；1/2MS+6-IBA 0.8 mg/L+NAA 0.5 mg/L+活性炭0.3%可以較好的誘導(dǎo)出黃花倒水蓮的根，生根率100%，生根情況良好。

上述研究為將組織培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用于黃花倒水蓮工廠化育苗提供了理論基礎(chǔ)和實(shí)踐指導(dǎo)。

4 問(wèn)題與建議

4.1 問(wèn)題

黃花倒水蓮在我國(guó)中醫(yī)用藥中有著悠久的歷史，具有較高的藥用價(jià)值。目前，黃花倒水蓮的研究已取得一定的進(jìn)展，但還存在一些問(wèn)題。

4.1.1 藥理研究 有效物質(zhì)的提純還僅僅停留在動(dòng)物試驗(yàn)的層面，未能將有效物質(zhì)提純到可做臨床應(yīng)用，目前主要還是以傳統(tǒng)中藥材的形式用于中醫(yī)用藥。

4.1.2 工藝提取 黃花倒水蓮所含化學(xué)成分較多，目前尚未建立各個(gè)成分的固化提取工藝，提取粗成分較多，缺乏深入研究。

4.2 建議

野生黃花倒水蓮資源有限，依靠人工繁殖將是必由之路，應(yīng)該在保護(hù)野生資源的基礎(chǔ)上，加大人工繁殖力度。而在人工繁殖中，組織培養(yǎng)將會(huì)成為其擴(kuò)大繁殖的主要手段，今后應(yīng)在其組織培養(yǎng)工廠化生產(chǎn)方面多作研究，以滿(mǎn)足市場(chǎng)需求。同時(shí)，在有效物質(zhì)的提取研究方面，要優(yōu)化提純工藝，確定相關(guān)化合物的結(jié)構(gòu)，這樣才能進(jìn)一步地對(duì)化合物成分進(jìn)行藥理活性方面的研究，開(kāi)發(fā)藥劑及口服液等產(chǎn)品應(yīng)用于臨床，實(shí)現(xiàn)黃花倒水蓮資源的綜合利用，從而造福人類(lèi)。

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ResearchprogressofPolygalafallaxHemsl

FEI Xitong1，2，TANG Junrong1，2，JU Miaomiao1，2，LIN Yuan1，2，LI Bin2，XIN Peiyao1，2*

(1.Key Laboratory of Biodiversity Conservation in Southwest China，State Forestry Administration，Southwest Forestry University，Kunming 650224, China；2.College of Forestry，Southwest Forestry University，Kunming 650224, China)

PolygalafallaxHemsl was mainly distributed in Hunan，Guangxi，Guangdong，F(xiàn)ujian and Yunnan province of China.It was a kind of valuable medicinal plants.The recent studies on chemical constituents，pharmacological activity and artificial breeding ofP.fallaxwere summarized.The problems in research and development ofP.fallaxwere put forward.Then some proposal were presented on these problems，in order to provide theory reference for the rational development and utilization ofP.fallax.

PolygalafallaxHemsl； tissue culture; component extraction research progress

2014-08-10

西南林業(yè)大學(xué)科技創(chuàng)新基金(C1320)項(xiàng)目資助。

費(fèi)希同(1991-)，男，吉林省延吉市人，碩士，研究方向?yàn)榱帜具z傳育種。

*為通訊作者。

R 282.71

A

1003 — 5710(2014)05 — 0076 — 04

10. 3969/j. issn. 1003 — 5710. 2014. 05. 021

(文字編校：龔玉子)