流動(dòng)采血車(chē)(屋)快速定量檢測(cè)乳糜血新方法的研究

孔衛(wèi)建 侯廣安 高占海 紀(jì)曉花 馮國(guó)先 孫連芳 馬振東

隨著無(wú)償獻(xiàn)血事業(yè)的發(fā)展，街頭采血是血液采集的重要方式。由于街頭獻(xiàn)血者多是餐后獻(xiàn)血，乳糜血的報(bào)廢率越來(lái)越大［1］。降低乳糜血報(bào)廢率的最有效的方法是在獻(xiàn)血者采血前判定血漿乳糜程度，而對(duì)于乳糜血的判斷，多采用肉眼觀(guān)察血漿乳糜程度，無(wú)參照標(biāo)準(zhǔn);還有部分血站采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中測(cè)定血液乳糜指數(shù)的方法，但都存在著人為誤差、主觀(guān)因素影響大，而且無(wú)法在流動(dòng)采血車(chē)應(yīng)用的問(wèn)題。為了減少人為誤差，降低乳糜血淘汰率，從源頭上控制乳糜血，我們根據(jù)速率法測(cè)定原理，摸索出了一種快速定量測(cè)定血漿乳糜程度的新方法，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑

1.1.1 儀器:英諾華分立式全自動(dòng)生化分析儀D320、日立HITATCHI 7100全自動(dòng)生化分析儀、Photometer4040半自動(dòng)生化分析儀、UV－754分光光度計(jì)。

1.1.2 試劑:ALT試劑盒，廠(chǎng)家:北京瑞爾達(dá)生物公司;酶校準(zhǔn)品，廠(chǎng)家:日本和光。

1.1.3 檢驗(yàn)器材:移液器0.9%氯化鈉溶液。

1.1.4 主要技術(shù)參數(shù):波長(zhǎng):340 nm;F 值:－992.6。

1.2 方法 由于每輛采血車(chē)均采用速率法檢測(cè)ALT，而速率法的原理是在340 nm處，用NADH下降的量檢測(cè)ALT，剛加入血清時(shí)的OD值是血清吸光度與NADH的混合值，我們利用乳糜血與ALT試劑混合，OD值要大于非乳糜血OD值的特性，定量檢出重度乳糜血。由于乳糜血測(cè)量要用一定的濃度，我們?cè)黾恿搜獫{的量，調(diào)整了F值。并經(jīng)過(guò)了試驗(yàn)，該方法對(duì)ALT準(zhǔn)確性、精密度均無(wú)影響。

1.2.1 標(biāo)本的選擇:①正常血漿標(biāo)本管的制備:取5～10份正常無(wú)溶血、無(wú)黃疸、無(wú)乳糜的血漿等量混合與潔凈的玻璃器皿中，取出2ml于塑料試管中作為正常標(biāo)準(zhǔn)管。②重度乳糜血標(biāo)準(zhǔn)管的選擇:取多袋乳糜血(40～50袋)，編號(hào)，取塑料試管編號(hào)，與血漿袋一一對(duì)應(yīng)，每袋取出1 ml于相應(yīng)試管中，加入4 ml 0.9%氯化鈉溶液充分混合。取稀釋好的樣品管與正常血漿標(biāo)本管比較透光度。(注意背對(duì)光源，反復(fù)比較)，與正常血漿標(biāo)本管透光度一致的即為重度乳糜血標(biāo)準(zhǔn)管。所對(duì)應(yīng)未稀釋乳糜血分裝4度保存。

1.2.2 關(guān)鍵技術(shù)參數(shù):用 ALT檢測(cè)程序 其中樣品100 μl，ALT 試劑400 μl，F(xiàn) 值:－992.6，波長(zhǎng):340 nm。

1.2.3 檢測(cè)方法:①試劑準(zhǔn)備:每個(gè)比色皿中加入400 μl ALT試劑，將比色皿放入預(yù)溫槽中預(yù)溫2 min。②空白對(duì)照測(cè)量:將加入試劑的比色皿放入測(cè)量位置進(jìn)行比色，得出的OD值即為空白對(duì)照值，當(dāng)此值低于1.0時(shí)表示試劑失效，需重新配置試劑。③加樣:用移液器向比色皿中加入重度乳糜標(biāo)準(zhǔn)管樣品100 μl，與試劑充分混勻。④測(cè)量:將混勻好的樣品放置在測(cè)量位置進(jìn)行比色，即刻讀數(shù)OD值并記錄。⑤結(jié)果:測(cè)量得出的OD值即為重度乳糜血的參考值(約1.748)，超過(guò)此值的緩期獻(xiàn)血，低于此值的可以采血。

1.2.4 ALT技術(shù)參數(shù)調(diào)整:由于加樣量的增加，F(xiàn)值也要作出相應(yīng)的調(diào)整。用酶校準(zhǔn)品(批號(hào):TR391)進(jìn)行大量實(shí)驗(yàn)調(diào)節(jié) F值。調(diào)節(jié)后本站 F值定為:－992.6。ALT關(guān)鍵指標(biāo)達(dá)到 cv%:5%，線(xiàn)性r:0.99，準(zhǔn)確性偏差:5%。故使用該參數(shù)進(jìn)行ALT檢測(cè)，ALT的檢測(cè)結(jié)果仍準(zhǔn)確有效。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2012年7至12月乳糜血漿報(bào)廢情況與2012年1至6月乳糜血漿報(bào)廢情況進(jìn)行對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.36，P＜0.01)。應(yīng)用該方法進(jìn)行乳糜血初篩后，無(wú)償獻(xiàn)血者乳糜血報(bào)廢率比例較之前大幅度下降近50%，達(dá)到預(yù)期效果。見(jiàn)表1。

表1 2012年1月至2012年12月乳糜血漿報(bào)廢結(jié)果

3 討論

乳糜血血漿呈乳白色或混濁狀，表示血液中含有高量脂肪，重度乳糜血不能應(yīng)用于臨床，理論上乳糜血給患者輸用并沒(méi)有健康危害，但乳糜血含有多量的微粒子，流入患者體內(nèi)可能引起微血管堵塞，因此醫(yī)院血庫(kù)多半不采用。

按照《全血及成分血質(zhì)量要求》(2012)［2］中對(duì)全血外觀(guān)的要求:肉眼觀(guān)察應(yīng)無(wú)色澤異常、溶血、凝塊、氣泡及重度乳糜等情況;由此可見(jiàn)，在血液的供應(yīng)中不是不可以用乳糜血，而是不可以有重度乳糜血。如何掌握乳糜血的程度，每個(gè)人有不同的尺度，造成了部分血液的報(bào)廢，也易造成血站和供血醫(yī)院的矛盾。

《全血成分血質(zhì)量要求與血液標(biāo)準(zhǔn)化》［3］中附錄A測(cè)定血液乳糜程度的方法描述了一種測(cè)定血液乳糜程度的方法，但這種方法因?yàn)椴僮鞣爆崳瑧?yīng)用性差，所以國(guó)內(nèi)流動(dòng)采血車(chē)(屋)上大多未采用。各地采供血機(jī)構(gòu)近年來(lái)紛紛探討想尋求一種簡(jiǎn)便檢測(cè)乳糜血乳糜程度的方法而至今沒(méi)有結(jié)果。

為了進(jìn)一步完善方法，提高準(zhǔn)確率，我們通過(guò)反復(fù)驗(yàn)證與實(shí)踐，不斷努力終于設(shè)計(jì)出用于乳糜血檢測(cè)的新實(shí)驗(yàn)方法，此種方法檢測(cè)乳糜血的速度很快，數(shù)秒就可測(cè)出，又相對(duì)準(zhǔn)確，適合于采血車(chē)(屋)上使用。通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明該方法具有準(zhǔn)確率高、重復(fù)性好、影響因素少等優(yōu)點(diǎn)，可以較好的解決人為誤差造成的矛盾，適用于街頭無(wú)償獻(xiàn)血乳糜血的篩查。從表1可看出，采用該方法后，乳糜血的報(bào)廢率明顯降低。

綜上所述，血液是寶貴而又特殊的資源，現(xiàn)階段還沒(méi)有可供替代的其他任何物質(zhì)。因此我們還要繼續(xù)探討如何降低脂肪血報(bào)廢率的方法，同時(shí)應(yīng)加強(qiáng)對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者獻(xiàn)血前飲食，休息等注意事項(xiàng)的宣傳，提高工作人員責(zé)任心，這樣才能夠有效減少脂血的血液浪費(fèi)，緩解臨床用血的需求，減少因輸脂肪血引起的不良反應(yīng)，同時(shí)也保障獻(xiàn)血者和用血的健康，保證血液質(zhì)量。

1 周雪蓮.迷你型離心機(jī)應(yīng)用于街頭獻(xiàn)血者脂肪血的篩選.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2010，29:102-103.

2 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).全血及成分血質(zhì)量要求.2012－01－04.

3 邱艷主編.全血成分血質(zhì)量要求與血液標(biāo)準(zhǔn)化.第1版.中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.10.