eRF3b片段對(duì)Con A誘導(dǎo)的急性肝損傷的保護(hù)性作用研究

劉志鵬，員美娜，梁 辰，劉斯靜，吳曉雪，劉殿武*(.河北醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)教研室，河北 石家莊 05007；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市食品化妝品監(jiān)督管理所學(xué)校食堂食品安全監(jiān)管科，內(nèi)蒙古 呼和浩特 0000；.河北醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院社會(huì)醫(yī)學(xué)與衛(wèi)生事業(yè)管理教研室，河北 石家莊05007；.河北醫(yī)科大學(xué)期刊社，河北 石家莊 05007)

·研究快報(bào)·

eRF3b片段對(duì)Con A誘導(dǎo)的急性肝損傷的保護(hù)性作用研究

劉志鵬1,2，員美娜3，梁 辰1，劉斯靜4，吳曉雪1，劉殿武1*
(1.河北醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)教研室，河北 石家莊 050017；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市食品化妝品監(jiān)督管理所學(xué)校食堂食品安全監(jiān)管科，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010；3.河北醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院社會(huì)醫(yī)學(xué)與衛(wèi)生事業(yè)管理教研室，河北 石家莊050017；4.河北醫(yī)科大學(xué)期刊社，河北 石家莊 050017)

肝炎,自身免疫性；伴刀豆球蛋白A；eRF3b片段

肝臟疾病是一類嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題，很多原因均可導(dǎo)致肝臟發(fā)生病變，長(zhǎng)期肝損傷將最終發(fā)展為肝衰竭[1]。伴刀豆球蛋白A(concanavalin A,Con A)誘導(dǎo)的急性肝損傷模型是一個(gè)較理想的T細(xì)胞介導(dǎo)的肝炎小鼠模型，常用來(lái)模擬人病毒性和自身免疫性肝病[2]。本課題組早期利用弱陽(yáng)離子磁珠純化和基質(zhì)輔助激光解析離子化飛行時(shí)間質(zhì)譜分析尋找肝硬化和肝癌潛在的早期血清生物學(xué)標(biāo)志物的過(guò)程中，分離得到一個(gè)相對(duì)分子質(zhì)量為4 210 000的多肽[3]，進(jìn)一步分析顯示該多肽為真核肽鏈釋放因子3b(eukaryotic peptiae chain release factor GTP-bind subunit,eRF3b)的一個(gè)36個(gè)氨基酸片段，其在慢性肝炎患者中表達(dá)水平高于肝硬化和肝癌患者。本研究觀察人工合成的該eRF3b片段對(duì)Con A誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷的預(yù)防及治療作用，旨在為臨床治療肝病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物來(lái)源及分組：本研究使用6～8周齡雄性Balb/c小鼠124只，購(gòu)于河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。本研究共分為4部分實(shí)驗(yàn)，分別為預(yù)防性給藥實(shí)驗(yàn)、預(yù)防性給藥生存分析實(shí)驗(yàn)、治療性給藥實(shí)驗(yàn)、治療性給藥生存分析實(shí)驗(yàn)，將小鼠隨機(jī)分為14組。其中，預(yù)防性給藥實(shí)驗(yàn)4組，分別為正常組、模型組、陽(yáng)性組及多肽組，每組8只小鼠；預(yù)防性給藥生存分析實(shí)驗(yàn)3組，分別為模型組、陽(yáng)性組及多肽組，每組10只小鼠；治療性給藥實(shí)驗(yàn)4組，分別為正常組、模型組、陽(yáng)性組及多肽組，每組8只小鼠；治療性給藥生存分析實(shí)驗(yàn)3組，分別為模型組、陽(yáng)性組及多肽組，每組10只小鼠。

1.2 處理方式

1.2.1 預(yù)防性給藥實(shí)驗(yàn)：模型組、陽(yáng)性組及多肽組小鼠分別給予生理鹽水0.25mL、地塞米松500μg/kg或eRF3b片段150μg/kg，1h后均給予12mg/kg Con A。正常組小鼠2次均給予生理鹽水0.25mL。Con A注射12h后處死小鼠，采集血清用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)各組血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase，ALT)和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase，AST)水平；分離肝組織，石蠟包埋后進(jìn)行HE染色。

1.2.2 預(yù)防性給藥生存分析實(shí)驗(yàn)：模型組、陽(yáng)性組及多肽組分別注射生理鹽水0.25mL、地塞米松500μg/kg及eRF3b 150μg/kg片段，1h后均給予致死劑量25mg/kg Con A，觀察各組小鼠Con A注射后72h內(nèi)的生存情況，進(jìn)行生存分析。

1.2.3 治療性給藥實(shí)驗(yàn)：模型組、陽(yáng)性組及多肽組小鼠均給予12mg/kg Con A，0.5h后分別給予生理鹽水0.25mL、地塞米松500μg/kg或eRF3b片段150μg/kg。正常組小鼠2次均給予生理鹽水0.25mL。檢測(cè)Con A注射12h后各組血清ALT和AST水平，肝組織進(jìn)行HE染色。

1.2.4 治療性給藥生存分析實(shí)驗(yàn)：模型組、陽(yáng)性組及多肽組小鼠均給予致死劑量25mg/kg Con A，0.5h后分別給予生理鹽水0.25mL、地塞米松500μg/kg及eRF3b片段150μg/kg，觀察各組小鼠Con A注射后72h內(nèi)的死亡情況，進(jìn)行生存分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。多組均數(shù)比較采用Kruskal-WailH檢驗(yàn)，組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)；生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-rank檢驗(yàn)。P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 eRF3b片段預(yù)防性給藥對(duì)Con A所致肝損傷的作用：Con A注射12h后，模型組小鼠血清ALT和AST水平均顯著高于正常組(P<0.01)；陽(yáng)性組和多肽組血清ALT和AST水平均顯著低于模型組(P<0.01)；多肽組ALT水平高于陽(yáng)性組(P=0.043)，AST水平與陽(yáng)性組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.768)。HE染色結(jié)果顯示，正常組小鼠肝組織結(jié)構(gòu)清晰、有序排列，模型組小鼠肝組織中出現(xiàn)大片狀壞死區(qū)域及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，其余各組中均未見明顯壞死區(qū)域。

2.2 eRF3b片段預(yù)防性給藥對(duì)給予致死劑量Con A小鼠生存率的影響：模型組、陽(yáng)性組及多肽組小鼠Con A注射后72h生存率分別為20%、80%和70%，中位生存時(shí)間分別為11、72和72h。多肽組和陽(yáng)性組小鼠生存率均顯著高于模型組(P<0.01)，生存時(shí)間顯著延長(zhǎng)；而多肽組與陽(yáng)性組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.668)。

2.3 eRF3b片段治療性給藥對(duì)Con A所致肝損傷的作用：Con A注射12h后，模型組小鼠血清ALT和AST水平均顯著高于正常組(P<0.01)；陽(yáng)性組和多肽組小鼠血清ALT及AST水平均顯著低于模型組(P<0.01)；多肽組ALT和AST水平與陽(yáng)性組相比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.898、0.840)。HE染色顯示，多肽組和陽(yáng)性組小鼠肝組織中均未見明顯壞死區(qū)域。

2.4 eRF3b片段治療性給藥對(duì)給予致死劑量Con A小鼠生存率的影響：模型組、陽(yáng)性組及多肽組小鼠Con A注射后72h生存率分別為20%、60%和50%，中位生存時(shí)間分別為13、72和58h。與模型組相比，eRF3b片段和地塞米松顯著提高了致死劑量Con A誘導(dǎo)小鼠的生存率(P=0.026、0.011)，延長(zhǎng)了生存時(shí)間；而陽(yáng)性組與多肽組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.792)。

3 討 論

有研究[4]顯示，Con A所誘導(dǎo)肝損傷主要表現(xiàn)為血清ALT和AST水平顯著升高，肝組織出現(xiàn)廣泛壞死和凋亡。本研究中，與正常組相比Con A模型組血清轉(zhuǎn)氨酶水平顯著升高，且肝組織中出現(xiàn)典型肝壞死表現(xiàn)和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致。實(shí)驗(yàn)顯示，eRF3b片段預(yù)防性及治療性給藥均顯著降低血清ALT和AST水平，同時(shí)肝損傷明顯減輕。說(shuō)明eRF3b片段可有效預(yù)防和治療Con A所致肝損傷。進(jìn)一步研究顯示，eRF3b片段預(yù)防性及治療性給藥均顯著提高經(jīng)致死劑量Con A處理小鼠的生存率、延長(zhǎng)生存時(shí)間。因此，有充分理由認(rèn)為該eRF3b片段對(duì)Con A所誘導(dǎo)肝炎有較好的預(yù)防和治療作用。

[1] WANG C,NIE H,LI K,et al.Curcumin inhibits HMGB1 releasing and attenuates concanavalin A-induced hepatitis in mice[J].Eur J Pharmacol,2012,697(1/3):152-157.

[2] SHAO X,QIAN Y,XU C,et al.The protective effect of intrasplenic transplantation of Ad-IL-18BP/IL-4 gene-modified fetal hepatocytes on Con A-induced hepatitis in mice[J].PLoS One,2013,8(3):e58836.

[3] 李曼,賈媛,員美娜,等.真核肽鏈釋放因子eRF3b在人肝組織及體外肝細(xì)胞中的表達(dá)[J].河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2012,33(9):1091-1092.

[4] VOLAREVIC V,MITROVIC M,MILOVANOVIC M,et al.Protective role of IL-33/ST2 axis in Con A-induced hepatitis[J].J Hepatol,2012,56(1):26-33.

(本文編輯：許卓文)

2014-10-15；

2014-10-30

河北省衛(wèi)生廳適用技術(shù)跟蹤項(xiàng)目(GL2012059)；河北省衛(wèi)生廳醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題(20110041)

劉志鵬(1985-),男,內(nèi)蒙古烏蘭察布人，內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市食品化妝品監(jiān)督管理所醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士，從事肝病分子流行病學(xué)研究。

*通訊作者。E-mail:liudw56@tom.com

R575.1

B

1007-3205(2014)12-1458-02

10.3969/j.issn.1007-3205.2014.12.035