不同產(chǎn)地黃芩中的黃芩苷提取轉(zhuǎn)移率研究

劉 濤，張 蕾，劉 婷，周雪蓮，羅小偉

(成都大學(xué)生物產(chǎn)業(yè)學(xué)院，四川 成都 610106)

不同產(chǎn)地黃芩中的黃芩苷提取轉(zhuǎn)移率研究

劉 濤，張 蕾，劉 婷，周雪蓮，羅小偉

(成都大學(xué)生物產(chǎn)業(yè)學(xué)院，四川 成都 610106)

采用同一提取方法對不同產(chǎn)地的黃芩中黃芩苷的提取轉(zhuǎn)移率進(jìn)行考察，并對結(jié)果進(jìn)行分析，以研究不同產(chǎn)地黃芩藥材中黃芩苷提取轉(zhuǎn)移率，完善黃芩藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn).實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同產(chǎn)地的黃芩藥材的有效成分轉(zhuǎn)移率有顯著差別，藥材轉(zhuǎn)移率是影響藥材質(zhì)量的一個(gè)重要參數(shù).建議在黃芩藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中加入提取轉(zhuǎn)移率這項(xiàng)指標(biāo)作為藥材主要質(zhì)量指標(biāo)之一.

黃芩;黃芩苷;轉(zhuǎn)移率

0 引言

黃芩是中醫(yī)臨床常用中藥，具有清熱燥濕、瀉火解毒等功效，其抗菌、抗病毒、抗炎等藥理作用是以黃芩苷為代表的黃酮類化合物［1］.有效成分的轉(zhuǎn)移率是中藥、天然藥物制備工藝研究中一項(xiàng)重要的指標(biāo)，轉(zhuǎn)移率的大小常用于評價(jià)與分析制備工藝的合理性與可行性.本課題組曾經(jīng)發(fā)現(xiàn)金銀花中的綠原酸提取轉(zhuǎn)移率不穩(wěn)定［2］，而苦參、木蝴蝶及梔子中的相關(guān)成分的提取轉(zhuǎn)移率與藥材的質(zhì)地有一定的相關(guān)性［3］，相關(guān)研究也發(fā)現(xiàn)，以不同黃芩為原料的中成藥中黃芩苷的轉(zhuǎn)移率也不穩(wěn)定［4］.在實(shí)驗(yàn)過程中，本研究也發(fā)現(xiàn)黃芩中所含的黃芩苷提取轉(zhuǎn)移率也存在不穩(wěn)定的現(xiàn)象，其原因可能與采收時(shí)間、產(chǎn)地及加工方法有關(guān).對此，本研究對不同產(chǎn)地黃芩中的黃芩苷的提取轉(zhuǎn)移率進(jìn)行了研究.

1 試劑與儀器

1.1 試劑

實(shí)驗(yàn)所用試劑包括:黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)，10715－200212)，黃芩藥材購自成都國際商貿(mào)城荷花池中藥材市場，經(jīng)有關(guān)專家鑒定符合《中國藥典》2010版(一部)黃芩項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn);甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純;水為純凈水.

1.2 儀器

實(shí)驗(yàn)所用儀器包括:P230Ⅱ型高效液相色譜儀(伊利特公司)，F(xiàn)A2004型電子天平(上海精科實(shí)業(yè)有限公司)，F(xiàn)W100型杯式粉碎機(jī)(北京科偉永興儀器有限公司)，電熱套.

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

取經(jīng)0℃減壓干燥4 h的黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每l mL含40 μg的溶液，制得對照品溶液.

2.2 原藥材含量測定方法

各原藥材的含量測定方法均按照《中國藥典》2010版(一部)黃芩項(xiàng)下方法進(jìn)行測定，原藥材計(jì)算含量時(shí)不以干燥品計(jì)算(即不扣除水分).

2.3 供試品溶液的制備

取100 g黃芩，再加入800 mL水，加熱煮沸提取1 h，提取3次，合并藥液，冷卻至室溫并測量體積，濾過，取10 mL溶液于100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻.再量取1 mL于10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，制得供試品溶液.

2.4 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相為甲醇∶水∶磷酸(47∶53∶0.2)，檢測波長280 nm;柱溫25℃，理論板數(shù)2 500.

2.5 測定法

分別精密量取對照品溶液與供試品各10 μL，注入液相色譜儀，測定，計(jì)算，即得.

2.6 轉(zhuǎn)移率計(jì)算方法

黃芩苷轉(zhuǎn)移率計(jì)算公式為，

其中，提取液中黃芩苷的總量=3次提取液黃芩苷的濃度×3次合并提取液的體積

2.7 方法學(xué)考察

2.7.1 線性關(guān)系考察.

取黃芩苷對照品適量，精密稱定，置于50 mL潔凈的容量瓶中，加甲醇定容至刻度，超聲至對照品完全溶解，其濃度為0.1 mg/mL.從已配好的0.1 mg/mL的黃芩苷對照品溶液中，精密吸取2、4、6、8 mL，置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容，其濃度依次為20、40、60、80 μg/mL，在“2.3”項(xiàng)下的色譜條件下測得其峰面積，以峰面積為橫坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.結(jié)果，R2=0.9993，表明黃芩苷在20～100 μg/mL之間具有良好的線性關(guān)系.

2.7.2 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn).

分別吸取供試液，按“2.3”項(xiàng)下的色譜條件下測得樣品4 h內(nèi)的穩(wěn)定性.結(jié)果顯示，樣品中的黃芩苷在4h之內(nèi)穩(wěn)定(RSD=2.83%).

2.7.3 精密度實(shí)驗(yàn).

取黃芩苷對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積.結(jié)果表明，其精密度良好(RSD值=1.06%).

2.7.4 加樣回收率.

取樣品0.3 g，精密稱定，加入黃芩苷對照品0.8766 mg，按照“2.3”項(xiàng)下的色譜條件測定.結(jié)果顯示，加樣回收率在95.4% ～104.4%之間，表明加樣回收率合格.

2.8 結(jié) 果

不同產(chǎn)地原藥材中黃芩苷含量及提取轉(zhuǎn)移率如表1所示.

表1 不同產(chǎn)地黃芩中黃芩苷含量及提取轉(zhuǎn)移率測定結(jié)果

結(jié)果表明，不同產(chǎn)地的黃芩藥材中黃芩苷含量及其所含黃芩苷的提取轉(zhuǎn)移率不同，山西所產(chǎn)的黃芩中其黃芩苷含量較高，提取轉(zhuǎn)移率也較高，大于80%，且符合相關(guān)技術(shù)要求.

3 討論

本研究中黃芩提取液的制備工藝參數(shù)，如溶媒及其用量、提取時(shí)間、提取次數(shù)等，是經(jīng)過單因素及正交試驗(yàn)確定的，此可以避免提取工藝參數(shù)對藥材提取轉(zhuǎn)移率的影響.由于未按干燥品投料，故計(jì)算原藥材含量時(shí)也未按照干燥品計(jì)算.

本研究參照文獻(xiàn)［3］方法，考察過按照《中國藥典》(一部)黃芩項(xiàng)下“含量測定”的方法對其粗粉和細(xì)粉分別進(jìn)行了含量測定.實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，粗粉和細(xì)粉含量差別較大.因此，在原藥材含量測定中，本研究將藥材盡量粉碎，以保證原藥材含量的準(zhǔn)確性.

有效成分的轉(zhuǎn)移率是現(xiàn)行新藥研究的重要內(nèi)容，是衡量工藝參數(shù)是否合理的重要指標(biāo)［6］.本研究測定了不同產(chǎn)地的黃芩藥材中黃芩苷的含量及其轉(zhuǎn)移率.結(jié)果表明，不同的產(chǎn)地的黃芩含黃芩苷以及黃芩苷的轉(zhuǎn)移率有顯著差距，在所測定的樣品中，山西所產(chǎn)的黃芩其黃芩苷含量最高，所含黃芩苷提取轉(zhuǎn)移率較高.原因可能是藥材生于不同產(chǎn)地時(shí)，采收時(shí)間及加工方法不同引起的，其具體原因有待進(jìn)一步研究.

建議有關(guān)部門在黃芩藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中加入“提取轉(zhuǎn)移率”作為主要質(zhì)量指標(biāo)，以控制中藥制品的質(zhì)量.

［1］姚干，何宗玉，方積年.黃芩總黃酮提取及純化工藝的研究［J］.中成藥，2006，29(11):1568 －1571.

［2］徐娜紅，全金龍.炮制方法對黃芩中有效成分黃芩苷含量的影響［J］.臨床合理用藥雜志，2010，3(16):100.

［3］王雷，王學(xué)艷，周雪琴，等.黃芩苷在不同溶媒中的穩(wěn)定性研究［J］.中國藥師，2006，9(2):129 －132.

［4］宋逍，唐志書，崔春利，等.中藥復(fù)方制劑中黃芩苷轉(zhuǎn)移率影響因素研究［J］.陜西中醫(yī)，2008，29(6):730 －731.

［5］黎萬壽.黃芩苷提取工藝研究［J］.中草藥，2000，31(2):107－110.

［6］劉濤，萬德光，王永香，等.HPLC法測定金銀花藥材中綠原酸的轉(zhuǎn)移率［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2008，50(5):350 －352.

［7］劉濤，郭曉恒，吳春梅，等.肺毒清顆粒中有效成分的含量測定及轉(zhuǎn)移率考察［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19(10):54－56.

［8］張清波，劉麗娟.對《中國藥典》2000年版(一部)收載品種黃岑苷含量測定方法及限量的探討［J］.中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2002，3(4):5 －8.

［9］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

Study on Transfer Rate of Extraction of Baicalin from Scutellaria Baicalensis Root

LIU Tao，ZHANG Lei，LIU Ting，ZHOU Xuelian，LUO Xiaowei
(School of Biological Industry，Chengdu University，Chengdu 610106，China)

To study the transfer rate of extraction of baicalin from Scutellaria baicalensis roots in different producing areas and improve available quality standards of Scutellaria baicalensis roots，we use the same extraction method to investigate the transfer rate of extraction，and analyze the obtained results.The experimental results show significant differences among transfer rates of active ingredients of Scutellaria baicalensis roots in different producing areas.We conclude that the transfer rate of extraction is a parameter which affects quality of chinese medicinal materials，and it is recommended that the transfer rate can be added to quality standards for Scutellaria baicalensis roots as one of the main quality indicators.

Scutellaria baicalensis root;baicalin;transfer rate

R282.5

A

1004－5422(2014)01－0007－03

2013－11－20.

成都市科技局高等院校應(yīng)用成果轉(zhuǎn)化(12DXYB020JH－002)資助項(xiàng)目.

劉 濤(1976—)，男，博士，高級(jí)工程師，從事中成藥新藥開發(fā)與再評價(jià)研究.