化學(xué)發(fā)光參與的免疫測定在臨床中的應(yīng)用

麻志慧

（赤峰學(xué)院第二附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

1 引言

化學(xué)發(fā)光免疫測定分析技術(shù)是指通過化學(xué)發(fā)光劑對抗體或抗原進(jìn)行標(biāo)記，并利用試劑的這種發(fā)光特性進(jìn)行檢測的一種分析技術(shù)，可以進(jìn)行有效定量或定性，現(xiàn)在已經(jīng)被廣泛應(yīng)用在了臨床診斷的許多領(lǐng)域.現(xiàn)綜述及展望如下.

2 化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)

2.1 起源

化學(xué)發(fā)光免疫測定分析技術(shù)最早應(yīng)用在上世紀(jì)七十年代，當(dāng)時(shí)只限于作為示蹤信號，而且儀器發(fā)展水平有限，其靈敏度差，且發(fā)光時(shí)長不足，依賴手工操作，無法實(shí)現(xiàn)試驗(yàn)條件的即時(shí)控制，應(yīng)用領(lǐng)域嚴(yán)重受限.后來發(fā)展到八十年代中期，辣根過氧化物酶標(biāo)記技術(shù)的出現(xiàn)，使信號強(qiáng)度及發(fā)光時(shí)間明顯提高，解決了技術(shù)難題，從而得到迅猛發(fā)展和廣泛應(yīng)用.

2.2 原理

2.2.1 發(fā)光原理

基于化學(xué)發(fā)光的免疫測定，首先是把化學(xué)發(fā)光物或酶標(biāo)記物標(biāo)記在抗體或抗原上，促使其相互之間發(fā)生免疫反應(yīng)，即抗體與抗原進(jìn)行特異性結(jié)合成復(fù)合物，之后把氧化劑或者化學(xué)發(fā)光劑加入生成的復(fù)合物，使其發(fā)光.之后再通過儀器檢測發(fā)光強(qiáng)度，進(jìn)一步換算待測物的濃度.

能夠作為化學(xué)發(fā)光物的多為有機(jī)化合物，通過氧化反應(yīng)出現(xiàn)發(fā)光現(xiàn)象，這是由于反應(yīng)過程中的中間體能量釋放而發(fā)光.

2.2.2 檢測原理

處于激發(fā)態(tài)的分子在釋放的多余能量部分以光能釋放，從而發(fā)出波長一定的光子，而被檢測出，由于是否能夠的光子是微量的，在檢測的過程中往往加入微量倍增技術(shù)，從而提高顆粒磁粉的吸附量，加快反應(yīng)速度，從而利于檢出.

2.3 分類

根據(jù)發(fā)光原理及試劑的不同，化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)被分為三種主要類型，發(fā)光物免疫測定、發(fā)光酶免疫測定及發(fā)光輔助因子免疫測定等.

3 臨床應(yīng)用

3.1 對病毒的檢測

3.1.1 對梅毒螺旋體的檢測

對于梅毒的篩查，臨床常用的方法為檢測患者體內(nèi)的非密螺旋體特異性抗體，然后進(jìn)行確證檢測而確診.而常用的梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)、血凝試驗(yàn)等人工檢測方法，操作繁瑣，耗時(shí)長但準(zhǔn)確率低，無法滿足臨床，而廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科的何惠[1]等采用化學(xué)發(fā)光免疫測定法，可以利用全自動(dòng)免疫化學(xué)發(fā)光分析儀，通過兩步法定性檢測，明顯降低了假陽性率，符合臨床需求.

3.1.2 對乙肝病毒標(biāo)志物HBsAg的測定

乙型肝炎是一種傳染性強(qiáng)、流行廣泛且具有嚴(yán)重危害性的病毒性肝炎，傳統(tǒng)的檢測多采用ELISA法進(jìn)行定性，但不能滿足臨床定量的要求.目前，多以HBsAg作為判斷病毒感染的標(biāo)志，可以采用化學(xué)發(fā)光免疫測定法，對乙肝HBsAg抗原進(jìn)行測定，既能定性，又可定量，靈敏度可以達(dá)到100%，特異性和符合率可分別高達(dá)96.15%及97.50%，各指標(biāo)均能符合臨床診斷及治療的需求.焦梅[2]等通過化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)進(jìn)行乙肝HBsAg的測定，發(fā)現(xiàn)其在較大范圍內(nèi)線性較好.

3.1.3 艾滋病的預(yù)防

獲得性免疫缺陷綜合征，即艾滋?。ˋIDS），是由HIV病毒（人類免疫缺陷病毒）引起的，迄今為止沒有有效的治療手段，因此切斷感染途徑是重要措施.研究發(fā)現(xiàn)，可以通過化學(xué)發(fā)光免疫測定法進(jìn)行對需要檢查的血清、儀器等樣本進(jìn)行HIV抗原檢測，可不受黃疸、酯血及溶血的影響，降低了假陽性率，提高了檢測準(zhǔn)確度.

3.2 對腫瘤標(biāo)志物的檢測

在腫瘤患者細(xì)胞中，腫瘤標(biāo)志物存在于其細(xì)胞及組織中，腫瘤標(biāo)志物主要有蛋白質(zhì)、癌基因產(chǎn)物、酶、激素等等.現(xiàn)在國內(nèi)外許多學(xué)者通過化學(xué)發(fā)光免疫測定法對腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行了檢測，對腫瘤的早期體外診斷及術(shù)后監(jiān)測均提供了重要而有效的方法.例如Mac等通過化學(xué)發(fā)光免疫測定法檢測了血清中鱗狀細(xì)胞癌抗原、癌胚抗原以及cy-fra21-1的濃度，從而進(jìn)行了食管癌的診斷和病情監(jiān)測，效果顯著.

3.3 對心臟疾病的診斷

有學(xué)者通過試驗(yàn)，進(jìn)行了心臟疾病患者的心肌損傷標(biāo)記物cTnT肌酸激酶同工酶CK-MB以及肌紅蛋白之間的相關(guān)系數(shù)分析，證實(shí)三者之間具有良好的相關(guān)性，因此可以利用化學(xué)發(fā)光免疫對這些指標(biāo)進(jìn)行臨床測定，用于臨床標(biāo)本的檢測，有助于心臟類疾病的及時(shí)、有效、準(zhǔn)確地診斷與病情監(jiān)測.而且臨床的檢測技術(shù)已經(jīng)相對成熟.例如，戶雪冬[3]等通過電化學(xué)光免疫法對患者的血清心肌損傷標(biāo)志物進(jìn)行了分析，有效檢出和確診了心肌梗死病例，比傳統(tǒng)的診斷方法準(zhǔn)確而方便.

3.4 自身免疫性疾病的診治

3.4.1 系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的診治

SLE是一種累及全身的自身免疫亢進(jìn)類疾病，臨床癥狀多樣化，容易造成誤診及延期診斷，造成疾病治療的延誤.但是傳統(tǒng)的診斷方法僅從臨床表現(xiàn)很難取得正確的結(jié)果，有效的實(shí)驗(yàn)室檢查被迫切需求.有同仁對SLE患者進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)其dsDNA抗體與補(bǔ)體C3、C4呈負(fù)相關(guān)，而與疾病活動(dòng)指數(shù)、血沉等成正相關(guān)，說明dsDNA抗體水平對SLE的診斷及病情發(fā)展判斷有良好的指示價(jià)值，可以通過化學(xué)發(fā)光免疫測定法測定dsDNA抗體的水平，從而幫助進(jìn)行SLE疾病的判斷.但需要指出的是，dsDNA抗體的濃度與SLE病情的危重程度沒有直接相關(guān)性.

3.4.2 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的診治

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎也是一種自身免疫系統(tǒng)疾病，常累及多個(gè)關(guān)節(jié)，可以通過血清學(xué)標(biāo)志物的檢測進(jìn)行診斷及監(jiān)測.有學(xué)者采用化學(xué)發(fā)光免疫測定法檢測類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的血清抗環(huán)瓜氨酸肽抗體，取得了較其他方法精密度更高，特異性更好的結(jié)果，而且整個(gè)檢測過程僅用了20分鐘，能夠較好地滿足臨床檢驗(yàn)需求，對該疾病的治療具有良好的應(yīng)用價(jià)值.

3.5 其他

化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域還涵蓋了婦產(chǎn)科，如診斷早孕及滋養(yǎng)體細(xì)胞疾??；內(nèi)分泌科，如甲狀腺疾病；血液科，如貧血等科別領(lǐng)域.

4 討論與展望

4.1 提高分析方法的靈敏度

能夠有效滿足疾病標(biāo)記的抗原畢竟是少量的，因此，應(yīng)該充分優(yōu)化檢測方法，有效實(shí)現(xiàn)分析結(jié)果的放大，提高放大倍數(shù)，延長檢測下限，提高分析方法的靈敏度，使化學(xué)發(fā)光免疫測定應(yīng)用范圍更加廣范，發(fā)揮更大價(jià)值.

4.2 提高分析儀器的準(zhǔn)確性

任何分析和檢測，以準(zhǔn)確性為最終目的，而凡是使用儀器的分析以提高儀器的準(zhǔn)確性為根本.化學(xué)發(fā)光的免疫測定方法越來越廣泛地被應(yīng)用，但是也有其相應(yīng)的局限，進(jìn)一步的改進(jìn)工作，應(yīng)以提高分析儀器的準(zhǔn)確性、使儀器向小型化及智能化方向轉(zhuǎn)變?yōu)槭滓蝿?wù).

4.3 發(fā)掘新型發(fā)光物和高效催化劑

化學(xué)發(fā)光的免疫測定方法依賴于發(fā)光物的生成及高效催化劑的放大作用，為了擴(kuò)大應(yīng)用范圍、提高檢測的靈敏度，發(fā)掘新型發(fā)光物和高效催化劑是問題的重點(diǎn).而且在這個(gè)基礎(chǔ)上和過程中，可以進(jìn)一步研究新的分析方法.

4.4 修飾和增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)效果

修飾和增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)效果與發(fā)掘新型發(fā)光物及高效催化劑是相輔相成的，應(yīng)該兩方面同時(shí)進(jìn)行研究和改進(jìn).有利于擴(kuò)大化學(xué)發(fā)光的免疫測定方法的應(yīng)用領(lǐng)域和范圍，并且提高檢測靈敏度，提升檢測準(zhǔn)確度.

5 結(jié)語

化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)靈敏度高、特異性好、分析方法簡單快速、能夠穩(wěn)定地與標(biāo)志物結(jié)合而無污染，不受檢測樣本的破壞，如溶血等的影響，在對病毒的檢測、腫瘤標(biāo)志物的檢測、心臟疾病的診治以及免疫系統(tǒng)疾病的診斷等各方面應(yīng)用效果好、但是相比放射性分析方法，尚在儀器的準(zhǔn)確性、檢測方法的靈敏性方面有一定差距，應(yīng)充分發(fā)掘新型的發(fā)光物和高效催化劑、修飾和增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光效果，提高其檢測準(zhǔn)確度，擴(kuò)大其臨床應(yīng)用范圍.

〔1〕何惠,周迎春,劉基鐸,等.化學(xué)發(fā)光免疫測定在梅毒螺旋體抗體檢測中的臨床應(yīng)用[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011,32(13):1469-1471.

〔2〕焦梅,李明.化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)定量測定HBsAg的評價(jià)[J].實(shí)用醫(yī)技雜志,2003,10(6):598-599.

〔3〕戶雪冬,戶秋冬,劉陽貴.電化學(xué)發(fā)免疫法檢測血清心肌損傷標(biāo)志物及心肌酶學(xué)在心肌梗死中的應(yīng)用[J].中國誤診學(xué)雜志,2009,6(23)：4545-4546.

〔4〕施麗娟.化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)及在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2012,9（4）：454-456.