匹多莫德對(duì)哮喘患兒血清中GATA-3與T-bet的影響

高雪，宮建，陳琪瑋，羅佳，曲華，任靈

哮喘是一種兒童時(shí)期最常見(jiàn)的慢性呼吸道疾病，是多種細(xì)胞和細(xì)胞組分共同參與的氣道慢性炎癥性疾病，最新全國(guó)兒童流行病學(xué)調(diào)查顯示，94.62%患兒以呼吸道感染為誘因[1]。而呼吸道感染又與Th1、Th2細(xì)胞亞群失衡有關(guān)，而匹多莫德能調(diào)節(jié)Th1、Th2細(xì)胞亞群失衡[2]。GATA蛋白家族屬于Ⅳ型鋅指蛋白，迄今為止，該家族共發(fā)現(xiàn)有6個(gè)成員(GATA-1～GATA-6)。GATA-3對(duì)Th1細(xì)胞的發(fā)育起抑制作用，可能通過(guò)抑制γ干擾素(interferon-γ，IFN-γ)、白細(xì)胞介素12(interleukin-12，IL-12)的信號(hào)傳導(dǎo)來(lái)抑制Th1細(xì)胞發(fā)育，GATA-3是Th2細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中重要的轉(zhuǎn)錄因子，主要在Th2細(xì)胞中表達(dá)[3]。T-bet是T-box家族成員，在胚胎發(fā)育中起重要作用，Th0細(xì)胞產(chǎn)生的IFN-γ與其受體結(jié)合，激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因1(signal transduction and transcriptional activation factor-1，STAT-1)，進(jìn)一步活化T-bet基因，而后者則激活I(lǐng)FN-γ基因，即T-bet的作用是通過(guò)激活I(lǐng)FN-γ基因而發(fā)揮其對(duì)Th1細(xì)胞發(fā)育的正調(diào)控作用的[4]。本文初步分析匹多莫德與GATA-3與T-bet濃度的關(guān)系，為進(jìn)一步探討匹多莫德糾正Th1、Th2細(xì)胞亞群失衡提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2010-03/2013-02沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院兒科門(mén)診首次診斷為哮喘患兒90例，按隨機(jī)數(shù)字表法分為觀察組和對(duì)照組各45例。兩組治療前臨床資料見(jiàn)表1。兩組患兒在年齡、性別、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、血清GATA-3、T-bet濃度方面比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

表1 兩組治療前臨床資料比較±s，n=45)

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照兒童支氣管哮喘診斷與防治指南(2008年修訂)中兒童支氣管哮喘的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) (1)符合兒童支氣管哮喘的診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)年齡3～6歲；(3)家長(zhǎng)知情同意。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) (1)合并甲亢、糖尿病、急慢性胰腺炎以及嚴(yán)重肝腎疾病、心肺功能不全者、無(wú)服用影響糖代謝的藥物；(2)合并痛風(fēng)、外科手術(shù)或嚴(yán)重創(chuàng)傷；(3)合并血液系統(tǒng)疾?。?4)治療前3個(gè)月使用免疫抑制藥者，如非甾體抗炎藥、類(lèi)固醇和鴉片等藥物等；(5)合并急性感染、惡性腫瘤等疾??；(6)存在免疫缺陷等疾病。

1.5 治療方法 對(duì)照組患兒運(yùn)動(dòng)前或體力勞動(dòng)前給予硫酸沙丁胺醇吸入氣霧劑(英國(guó)葛蘭素威康制藥有限公司)100 μg/次。觀察組在對(duì)照組基礎(chǔ)上連續(xù)口服匹多莫德口服液(意大利多帕藥業(yè)有限公司)400 mg/次，每日2次。兩組均治療3個(gè)月。治療期間每周電話隨訪1次，每2～4周門(mén)診隨訪1次。

1.6 檢測(cè)方法 連續(xù)口服藥物3個(gè)月后對(duì)所有檢測(cè)對(duì)象均抽取靜脈血3 mL，注入玻璃試管內(nèi)，靜置10 min，以3 000 r/min離心10 min，分離血清-70 ℃保存待測(cè)。血清GATA-3與T-bet檢測(cè)采用ELISA法測(cè)定，試劑盒購(gòu)自上海西塘生物科技公司，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.7 療效判定標(biāo)準(zhǔn) (1)顯效：治療中未復(fù)發(fā)或6個(gè)月內(nèi)輕微發(fā)作不超過(guò)1次；(2)好轉(zhuǎn)：6個(gè)月內(nèi)復(fù)發(fā)次數(shù)減少1/2以上，發(fā)病時(shí)病程縮短，癥狀減輕；(3)無(wú)效：治療前后復(fù)發(fā)次數(shù)、病程及癥狀均無(wú)明顯改變[6]。

1.8 觀察指標(biāo) 兩組臨床療效及治療前后血清GATA-3、T-bet濃度。

2 結(jié)果

2.1 兩組臨床療效對(duì)比 見(jiàn)表2。

表2 兩組臨床療效對(duì)比[n(%)，n=45]

表2結(jié)果表明，觀察組顯效率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。兩組總有效率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 兩組治療前和治療后血清GATA-3、T-bet濃度對(duì)比 觀察組、對(duì)照組連續(xù)治療3個(gè)月后GATA-3與治療前比較有所降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，治療3個(gè)月后觀察組較對(duì)照組GATA-3濃度低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；觀察組、對(duì)照組連續(xù)治療3個(gè)月后T-bet與治療前和對(duì)照組比較升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，治療3個(gè)月后觀察組T-bet濃度高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。血清中GATA-3濃度與T-bet濃度呈負(fù)性相關(guān)關(guān)系(r=-0.68,P=0.041<0.05)。

表3 兩組治療前后血清GATA-3、T-bet濃度對(duì)比±s，n=45，ng/L)

3 討論

匹多莫德化學(xué)名為(R)-3-[(S)-(5-氧-2-吡咯烷基)羥基]-噻唑烷基-4-甲酸，是一種全新的化學(xué)合成免疫調(diào)節(jié)劑，其結(jié)構(gòu)類(lèi)似二肽，是意大利多帕藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，1993年上市，是一種新型免疫調(diào)節(jié)劑，由焦谷氨酸和硫代脯氨酸組成，它很好地克服了生物來(lái)源免疫調(diào)節(jié)劑的不良反應(yīng)，既能促進(jìn)非特異性免疫反應(yīng)，又可以促進(jìn)特異性免疫反應(yīng)[7]。劉恩梅等[8]試驗(yàn)證明，匹多莫德能調(diào)節(jié)T細(xì)胞亞群，下調(diào)IL-4等炎性因子，并可以通過(guò)激活抗原提呈細(xì)胞，促進(jìn)Th1細(xì)胞功能，抑制哮喘患兒體內(nèi)相對(duì)亢進(jìn)的Th2細(xì)胞功能，使哮喘癥狀得到改善。而匹多莫德能調(diào)節(jié)各類(lèi)免疫功能低下人群的細(xì)胞免疫功能，而發(fā)揮增強(qiáng)患者非特異免疫功能的作用[9]。

T-bet主要表達(dá)于T、B、NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞，Th0細(xì)胞產(chǎn)生的IFN-γ與其受體結(jié)合，激活STAT-1，進(jìn)一步活化T-bet基因，而后者則激活I(lǐng)FN-γ基因，即T-bet的作用是通過(guò)激活I(lǐng)FN-γ基因而發(fā)揮其對(duì)Th1細(xì)胞發(fā)育的正調(diào)控作用的[4]。GATA-3與T-bet作用相反，使Th0向Th2細(xì)胞分化，GATA-3優(yōu)先激活I(lǐng)L-4基因，進(jìn)一步調(diào)節(jié)IL-5和IL-13的表達(dá)。最新研究表明，GATA-3對(duì)于早期IL-4的產(chǎn)生與以后穩(wěn)定Th2細(xì)胞的極化狀態(tài)都是必須的，既可以通過(guò)TCR信號(hào)傳導(dǎo)途徑也可以通過(guò)IL-4/STAT-6信號(hào)途徑來(lái)誘導(dǎo)GATA-3的表達(dá)，而后者是Th2細(xì)胞增殖的主要途徑[10]。本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，對(duì)照組與觀察組治療后血清中GATA-3明顯降低，而T-bet明顯升高；觀察組血清T-bet濃度高于對(duì)照組，GATA-3濃度低于對(duì)照組，且觀察組顯效率高于對(duì)照組，證實(shí)了匹多莫德能通過(guò)調(diào)節(jié)GATA-3與T-bet來(lái)控制哮喘的癥狀。Th1細(xì)胞是參與細(xì)胞免疫的重要正向調(diào)節(jié)細(xì)胞，分泌的細(xì)胞因子IFN-γ調(diào)節(jié)效應(yīng)性T細(xì)胞的功能；T-bet在哮喘患者體內(nèi)表達(dá)量降低導(dǎo)致Th2細(xì)胞分化[11]，其激發(fā)Th0細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化的能力降低，GATA-3表達(dá)量增加。而通過(guò)給予外源性的匹多莫德后，T-bet表達(dá)量升高，GATA-3表達(dá)量降低，說(shuō)明匹多莫德能很好的通過(guò)這一途徑來(lái)改善哮喘癥狀。匹多莫德改善哮喘癥狀并不是單純一條途徑，而是多條途徑共同作用的結(jié)果，這些途徑的相互關(guān)系如何值得去進(jìn)一步探索。

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(收稿日期：2014-02-20)