牛副結(jié)核及其防治

徐 剛，蔣曙光，王 蒴，王治才*

（1.新疆克拉瑪依白堿灘區(qū)元亨動(dòng)物診所，新疆 克拉瑪依 834008；2.新疆維吾爾自治區(qū)畜牧工作總站，新疆 烏魯木齊 830009；3.新疆維吾爾自治區(qū)畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所，新疆 烏魯木齊 830000）

牛副結(jié)核及其防治

徐 剛1，蔣曙光2，王 蒴3，王治才3*

（1.新疆克拉瑪依白堿灘區(qū)元亨動(dòng)物診所，新疆 克拉瑪依 834008；2.新疆維吾爾自治區(qū)畜牧工作總站，新疆 烏魯木齊 830009；3.新疆維吾爾自治區(qū)畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所，新疆 烏魯木齊 830000）

牛副結(jié)核是近年來新疆部分牛場(chǎng)常見多發(fā)但常被忽視或誤診的一種慢性消耗性人畜共患病。本文根據(jù)國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)，就該病的流行病學(xué)、病原學(xué)、臨床癥狀、診斷和防控進(jìn)行了論述，以期為相關(guān)技術(shù)人員提供該病診斷與防治的參考。

牛副結(jié)核；病原學(xué)；流行病學(xué)；診斷與防治

牛副結(jié)核 （Paratuberculosis）又稱約內(nèi)氏病 (Johne’s disease),是由副結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium paratuberculosis,MP)引起的以頑固性腹瀉、漸進(jìn)性消瘦、腸黏膜增厚并形成皺褶為特征的慢性消化道疾病。本病可通過病畜及其產(chǎn)品傳染給人和其它動(dòng)物。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為必須通報(bào)的動(dòng)物疫?。↙ist animal diseases）[1]，我國(guó)農(nóng)業(yè)部將其列為二類動(dòng)物疫病。目前，本病廣泛流行于世界各國(guó)，特別是奶牛養(yǎng)殖業(yè)較發(fā)達(dá)的一些國(guó)家。我國(guó)自1955年確診該病的發(fā)生以來,牛副結(jié)核在一些地區(qū)的種牛場(chǎng)、奶牛場(chǎng)、牧場(chǎng)不斷蔓延，近年來發(fā)病率有日漸增多的趨勢(shì)，嚴(yán)重危害養(yǎng)牛業(yè)的健康發(fā)展和畜產(chǎn)品的安全，但關(guān)于牛副結(jié)核的防控研究報(bào)道較少。全面了解和認(rèn)識(shí)該病對(duì)指導(dǎo)其防控具有重要意義。

1 牛副結(jié)核的流行病學(xué)

牛副結(jié)核于1895年美國(guó)人 Johne等首先發(fā)現(xiàn)。1906年國(guó)外學(xué)者用病牛腸道勻漿飼喂?fàn)倥８腥境晒?，證實(shí)了它是不同于結(jié)核病的另外一種獨(dú)立疾病，并命名為約內(nèi)氏?。↗ohne’s disease）。目前，牛副結(jié)核已遍布全世界。養(yǎng)牛業(yè)發(fā)達(dá)的國(guó)家，如英國(guó)、法國(guó)、丹麥、荷蘭、德國(guó)、美國(guó)、蘇聯(lián)、澳大利亞、加拿大、新西蘭等國(guó)尤為多見。在英國(guó)，該病感染率在15%～33%，每年損失200萬～300萬英鎊，是奶牛淘汰的第一病因，并被認(rèn)為是英國(guó)某些地區(qū)最重要的疾?。幻绹?guó)已確認(rèn)30個(gè)州約360多個(gè)牧場(chǎng)存在本病，感染牛群每年損失為12%；全美國(guó)的奶業(yè)因該病每年損失達(dá)l5億英磅。在法國(guó)本病流行30多年，發(fā)病死亡率為8%。在荷蘭，每年損失為12%～l5%。澳大利亞每年因?yàn)楦苯Y(jié)核病而限制出口的肉、奶損失約7 500萬澳元，產(chǎn)業(yè)損失5 760萬澳元[2]。據(jù)調(diào)查，副結(jié)核病正在世界范圍內(nèi)逐漸傳入新的地區(qū)，對(duì)牛羊養(yǎng)殖業(yè)已構(gòu)成一個(gè)危害廣泛、急迫的國(guó)際問題。近年來由于奶牛和肉牛發(fā)展非常迅速，生產(chǎn)規(guī)模越來越大，集約化程度越來越高，牛流動(dòng)范圍越來越廣，副結(jié)核病發(fā)生呈擴(kuò)大的趨勢(shì)，世界已經(jīng)有168個(gè)國(guó)家和地區(qū)報(bào)道此病[2]。

我國(guó)于1955年在內(nèi)蒙古自治區(qū)的呼盟謝爾塔拉牧場(chǎng)由北京農(nóng)業(yè)大學(xué)首次發(fā)現(xiàn)并確診牛副結(jié)核的發(fā)生，此后遼寧、黑龍江、內(nèi)蒙、貴州、陜西、河北等地區(qū)相繼報(bào)導(dǎo)了本病的流行；近年來本病幾乎遍及東北、西北、華北、內(nèi)蒙等地區(qū)[2]。牛副結(jié)核的流行將嚴(yán)重影響我區(qū)乃至我國(guó)畜牧業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展。

牛是副結(jié)核最易感的動(dòng)物，綿羊、山羊等反芻動(dòng)物均易感[2]。另外副結(jié)核分枝桿菌還能感染豬、馬、駱駝、鹿、猴、鴿、斑鳩等多種哺乳動(dòng)物和禽類[3,4]。有關(guān)野生反芻動(dòng)物的副結(jié)核病報(bào)道較多，大部分集中于野羊、野牛和鹿，還有犀牛、水牛等[3]。在對(duì)野生非反芻動(dòng)物的流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，狐貍、鼬、黃鼠狼、烏鴉、白嘴鴉、寒鴉、鼠、木鼠、野兔、獾等野生動(dòng)物也可檢測(cè)出副結(jié)核分枝桿菌感染[3]。同時(shí)對(duì)無脊椎動(dòng)物的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，蜂蠅科的幼蟲、成年雙翅目昆蟲及蚯蚓中也存在副結(jié)核分枝桿菌的感染[5]。

本病一般為散發(fā)或地方流行性，病牛、處于潛伏期的?；驇Ь鷦?dòng)物是重要傳染源。本菌主要存在于病畜體內(nèi)腸系膜淋巴結(jié)或腸黏膜，病?？蓮募S便排出大量病原菌。由于病原菌對(duì)外界的抵抗力較強(qiáng)，因此可存活數(shù)月。糞便中的病原菌污染飲水、草料等，通過消化道而侵入健康的牛體內(nèi)。有研究表明部分病例中的病菌可經(jīng)血流或牛乳、尿液排出體外。

從公牛的性腺也曾發(fā)現(xiàn)過牛副結(jié)核桿菌[6]。當(dāng)母牛患副結(jié)核病時(shí)，子宮感染率達(dá)50%以上；有試驗(yàn)證明，皮下或靜脈接種也可使?fàn)倥Ｈ?。本病的傳播速度比較緩慢，不同病例的出現(xiàn)往往間隔較長(zhǎng)時(shí)間，從表面上看似呈散發(fā)性，實(shí)際上是一種呈現(xiàn)緩慢傳播的地方流行性傳染病。

牛的年齡不同，對(duì)副結(jié)核分枝桿菌的易感性也不同，4月齡以下的牛最易感，絕大多數(shù)感染后造成永久性感染并排菌或發(fā)病。較大犢牛只有大劑量感染才能引起臨床發(fā)病。青年牛和成年牛能具有較強(qiáng)的抵抗力，只有超量接種才能引起感染。除糞口感染途徑外，胎兒也有可能子宮內(nèi)感染。

2 牛副結(jié)核的病原學(xué)

副結(jié)核分支桿菌是一種細(xì)胞內(nèi)寄生菌，在分類上屬鳥分枝桿菌副結(jié)核亞種 （Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis,MAP）。該菌是一種細(xì)長(zhǎng)桿菌，有的呈短棒狀或球桿狀，不形成芽胞、莢膜和鞭毛，大小為0.5～1.5 μm，革蘭氏染色陽性。MAP對(duì)熱和化學(xué)藥品的抵抗力與結(jié)核菌相同，對(duì)外界環(huán)境的抵抗力較強(qiáng)，在污染的牧場(chǎng)和廄肥中可存活數(shù)月至一年，在牛乳和甘油鹽水中可保存十個(gè)月。該菌最佳生長(zhǎng)溫度為38℃～40℃，對(duì)熱敏感，63℃30 min、70℃20 min、80℃5 min均可被殺死。

副結(jié)核分枝桿菌能夠抗強(qiáng)酸強(qiáng)堿，在5%草酸、5%硫酸、4%氫氧化鈉溶液中30 min仍保持活力。但用3%來蘇兒30min、3%福爾馬林20 min、3%～5%石炭酸5 min即內(nèi)可將其殺死[7]。該菌是胞內(nèi)生長(zhǎng)菌，細(xì)菌侵入機(jī)體后，在機(jī)體內(nèi)首先產(chǎn)生細(xì)胞免疫，然后出現(xiàn)體液免疫。細(xì)胞免疫隨著病情加重而降低，體液免疫隨著病情發(fā)展而增強(qiáng)。

生態(tài)學(xué)的研究還發(fā)現(xiàn)，副結(jié)核分枝桿菌可在酸性土壤型存在，但在鹼性和含鈣質(zhì)多的土壤區(qū)則很難生存。有學(xué)者對(duì)所分菌株的細(xì)菌學(xué)鑒定發(fā)現(xiàn)，存在3個(gè)生物型菌株,即牛型副結(jié)核株，在自然條件下只感染牛而不使羊發(fā)?。谎蛐透苯Y(jié)核株，在自然條件下可使羊感染，對(duì)牛也有輕微致病力；色素副結(jié)核株，僅發(fā)現(xiàn)在蘇格蘭的分離株。也有學(xué)者分別用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)、脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)等分子生物學(xué)方法進(jìn)行了副結(jié)核分枝桿菌的分型研究，但結(jié)果差異很大。

3 臨床癥狀與病理病變

牛副結(jié)核的潛伏期長(zhǎng)短不一，一般在6個(gè)月左右，有些可達(dá)數(shù)年（2～4年），有些牛在2～5歲時(shí)才表現(xiàn)臨床癥狀。母牛在開始懷孕、分娩以及泌乳時(shí)易于出現(xiàn)明顯臨床癥狀。臨床癥狀首先出現(xiàn)于青年牛，但2歲以上的其它年齡牛均也可表現(xiàn)出病癥，其特征性臨床癥狀主要表現(xiàn)為慢性進(jìn)行性消瘦和腹瀉。腹瀉開始是間歇性的，而后逐漸嚴(yán)重和頻繁。初期沒有明顯癥狀，一般由軟便到下痢從間歇性下痢發(fā)展到持續(xù)性下痢，繼之變?yōu)樗畼拥膰娚錉钕铝　Ｓ械幕寂Ｍ蝗怀霈F(xiàn)嚴(yán)重下痢，糞便惡臭，帶泡沫。但發(fā)病牛體溫始終不高。隨著病程的發(fā)展，出現(xiàn)營(yíng)養(yǎng)不良，貧血，高度消瘦，全身狀況惡化并伴發(fā)下頜、胸垂、腹部水腫，產(chǎn)奶量急劇下降或停止泌乳，最后患畜全身衰弱而死亡。部分患牛發(fā)病初期作為一般性消化不良病例采用對(duì)癥治療可得到緩解；亦有部分病牛未經(jīng)治療亦可停止下痢，食欲和體重增加，但在數(shù)月或數(shù)年后又復(fù)發(fā)下痢并死亡。

該病的病理變化常見于空腸、回腸和結(jié)腸前段，腸粘膜面覆蓋大量灰黃色或黃白色糊狀粘稠粘液；有些區(qū)域有出血、皺褶頂點(diǎn)充血、溢血。回腸腸粘膜增厚3～20倍并形成似腦回樣皺褶的硬而彎曲的縱橫皺褶；腸系膜淋巴結(jié)腫大，比正常淋巴結(jié)腫大2～3倍以上，切面可見乳白色水樣液體，但沒有充血，也不形成結(jié)節(jié)與壞死。隨著病程進(jìn)一步發(fā)展，回腸、空腸、小腸后段、盲腸和結(jié)腸以及腸系膜淋巴結(jié)均出現(xiàn)肉眼可見病變。但病理剖檢變化的明顯程度與臨床癥狀的嚴(yán)重程度并非一致。

4 診斷與檢測(cè)

根據(jù)成年牛出現(xiàn)漸進(jìn)性消瘦、頑固性腹瀉，抗生素治療無效，即可做出初步診斷，確診則有需要通過糞便涂片檢查、糞便和組織的細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)、血清學(xué)檢測(cè)、樣品的PCR擴(kuò)增比對(duì)，尸體剖檢的特征性病變及組織學(xué)檢查，以區(qū)別可能出現(xiàn)類似癥狀的胃腸道寄生蟲感染、病毒性腹瀉-粘膜病、梭菌性腸炎、霉變飼料的慢性中毒等。

雖然發(fā)病牛糞便以及病變腸粘膜中含有大量的菌，但副結(jié)核桿菌的染色形態(tài)很不典型；初代的分離培養(yǎng)也極為困難。培養(yǎng)時(shí)需要在人工培養(yǎng)基上價(jià)格昂貴的添加草分枝桿菌素抽提物，6～8周才能長(zhǎng)出針尖大小的白色、粗糙的小菌落；培養(yǎng)6個(gè)月才能發(fā)現(xiàn)有明顯的小菌落出現(xiàn)。

血清學(xué)檢測(cè)是目前常用診斷檢測(cè)技術(shù)方法。我國(guó)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《牛副結(jié)核病檢疫技術(shù)規(guī)范》該病對(duì)臨床診斷、顯微鏡檢查、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、ELISA、瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)（延遲型）、PCR檢測(cè)方法做出了規(guī)范。但由于補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)操作費(fèi)時(shí)、繁瑣；皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)檢測(cè)方法的敏感性和特異性較低很低，很多國(guó)家已不再使用[8]。此外，變態(tài)反應(yīng)結(jié)果易受各種因素，特別是其它分枝桿菌感染的干擾而出現(xiàn)假陽性[9]；瓊擴(kuò)反應(yīng)則敏感性不足。目前，在進(jìn)出口檢疫和較大規(guī)模檢測(cè)中多采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）進(jìn)行相關(guān)抗體檢測(cè)，用PCR進(jìn)行相關(guān)病原基因檢測(cè)。ELISA檢測(cè)所用的試劑盒主要是美國(guó)IDEXX公司生產(chǎn)副結(jié)核病抗體檢測(cè)試劑盒以及法國(guó)IDVET公司生產(chǎn)的副結(jié)核抗體初篩試劑盒，該方法具有敏感、特異、快速、穩(wěn)定、半自動(dòng)化及結(jié)果可視化等優(yōu)點(diǎn)，適合短時(shí)間內(nèi)大批量樣品的檢測(cè)。

5 牛副結(jié)核的防治

牛副結(jié)核的確診已達(dá)百年，但迄今為止仍無特效的預(yù)防和治療藥物。各國(guó)研究人員先后在不同地區(qū)試驗(yàn)用多種抗分枝桿菌的藥物進(jìn)行治療，均未獲得滿意效果。目前，對(duì)該病較為常用的防治技術(shù)措施主要有以下幾個(gè)方面：其一是對(duì)檢出的陽性牛和有臨床癥狀的病牛及時(shí)隔離或撲殺；對(duì)檢測(cè)陽性的妊娠后期母牛，可在嚴(yán)格隔離條件下飼養(yǎng)至產(chǎn)犢后再撲殺處理；所產(chǎn)犢牛在嚴(yán)格消毒后進(jìn)行人工飼喂。其二是定期對(duì)牛群進(jìn)行監(jiān)測(cè)；在疫區(qū)，每年對(duì)牛群檢疫3～4次，檢出的陽性牛嚴(yán)格隔離，確保病牛與健牛完全分離；檢測(cè)出陽性個(gè)體或有臨床癥狀的牛場(chǎng)要對(duì)圈舍進(jìn)行連續(xù)性的徹底清理和消毒；檢出的疑似病例應(yīng)做好標(biāo)記，單獨(dú)組群飼養(yǎng)3個(gè)月后再進(jìn)行檢測(cè)，仍為可疑者可按陽性牛處理。其三是培育健康犢牛群；疫區(qū)或疫群的犢牛出生后，立即與感染或患病病牛隔離，人工喂初乳3 d后飼喂消毒奶至6月齡斷奶，然后進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)，陰性犢牛歸入假定健康群，再堅(jiān)持每年做3～4次檢查至滿4歲；歷次檢查均為陰性者可視為健康牛。其四是對(duì)病牛舍及飼養(yǎng)場(chǎng)進(jìn)行定期消毒；常用消毒藥可選用l0%～20%漂白粉液、5%甲醛溶液、5%來蘇兒、3%～5%石碳酸水等，藥液加熱消毒效果更佳；其五，疫群牛奶須經(jīng)80℃1～3 min的消毒處理方可使用；疫群清理出的糞便應(yīng)堆積泥封，生物熱消毒。牛副結(jié)核傳染性較強(qiáng)，牛群出現(xiàn)陽性個(gè)體后如不盡快和嚴(yán)格處理，則可能在本群扎根，一旦扎根則很難凈化。

牛副結(jié)核的免疫預(yù)防研究正在進(jìn)行當(dāng)中。正在試驗(yàn)用于牛副結(jié)核預(yù)防的疫苗主要有3種：一種是菌體成份苗，另一種是全菌苗，第三種是弱毒活苗。這些菌苗在感染牛群6多年的免疫比較試驗(yàn)證明，均在一定程度上可減少本病所造成的損失，且以全菌苗效果更好，在美國(guó)一些地區(qū)副結(jié)核病污染嚴(yán)重牛場(chǎng)，用滅活疫苗進(jìn)行凈化，使臨床發(fā)病率顯著下降[10]。我國(guó)吉林省獸醫(yī)科學(xué)研究所于1990年也試制出了牛副結(jié)核滅活疫苗并在一些牛場(chǎng)的應(yīng)用中取得了良好效果。盡管疫苗的臨床免疫試驗(yàn)結(jié)果已經(jīng)成功，但進(jìn)入臨床應(yīng)用不僅仍然還需要時(shí)間，而且面臨許多困境。其原因是副結(jié)核的感染主要發(fā)生于幼齡期，且存在垂直感染的可能，僅靠主動(dòng)免疫阻止感染較為困難；此外，由于副結(jié)核菌和牛結(jié)核菌表面抗原存在一定的相關(guān)性，副結(jié)核疫苗的免疫可能干擾和影響結(jié)核菌素對(duì)牛結(jié)核的檢疫，而牛結(jié)核病對(duì)人類健康的危害較副結(jié)核嚴(yán)重的多，則必須優(yōu)考慮。

雖然已經(jīng)有許多國(guó)家認(rèn)為，疫苗接種是保護(hù)畜群的最好方法，但疫苗接種也僅在特定國(guó)家或區(qū)域被限制性使用。由于我國(guó)一些地區(qū)牛場(chǎng)牛副結(jié)核與牛結(jié)核病的同時(shí)存在和流行，副結(jié)核疫苗的應(yīng)用更應(yīng)慎重。根據(jù)我國(guó)一些地區(qū)牛副結(jié)核和牛結(jié)核流行病學(xué)，防治牛副結(jié)核的最佳方法仍然還是定期檢疫，及時(shí)發(fā)現(xiàn)和清除感染牛。經(jīng)3～5年的檢疫與凈化，完全有可能使牛場(chǎng)的副結(jié)核病檢出率明顯下降。

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Bovine Paratuberculosis and Prevention

XU Gang1，JIANG Shu-guang2，WANG Shuo3，WANG Zhi-cai3*
(1.Yuanheng Animal Clinic of Baijiantan,Kelamay,Xinjiang，China; 2.General Station of Xinjiang Husbandry,，China 3.Institute of Veterinary Medicine Xinjiang Academy of Animal Science，China)

Bovine paratuberculosis is a common chronic and wasting zoonosis in parts of bovine farms in Xingjiang in recent year,which is often beng neglected or misdiagnosed.In order to provide the references about the disease diagonosis and control for the animal production technicals,the epidemiology,etiology, clinical symptoms,diagnosis and prevention are discussed according to the relevant literature.

bovine paratuberculosis,etiology,epidemiology,diagnosis and prevention.

S858.23文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1003－6377（2014）04－0053-04

2014-02-07

國(guó)家星火計(jì)劃項(xiàng)目（2012GA890001）

徐剛（1957-），男，大專，助理獸醫(yī)師。

王治才（1955），男，研究員，碩士生導(dǎo)師，主要從事牛羊疫病防治研究。